1、全血水杨酸钠药物代谢动力学参数的测定1、实验目的：掌握药物代谢动力学参数的意义及其测定方法，掌握用分光光度法测定水杨酸钠（sodium salicylate）的血药浓度。二、实验动物：家兔 体重 2.585kg 性别：雌3、实验药品：20%乌拉坦、 生理盐水、0.5%水杨酸钠、0.06%水杨酸钠标准液、10%三氯醋酸、10% 三氯化铁、蒸馏水水杨酸钠在酸性环境中成为水杨酸（salicylic acid） ，与三氯化铁生成一种紫色络合物。该络合物在 520nm 波长下比色，其光密度与 salicylic acid 浓度成正比。反应式为：4、实验器材：电子天平、兔台、5ml 和 1ml 枪头、5m
2、l 注射器、6 号针头、手术器械、动脉插管、棉球、头皮针、10ml 离心管、722 分光光度计、离心机、涡旋混匀器五、实验方法1、 取 10 支 10ml 试管，用 0.5%肝素润湿管壁。2、 家兔称重，从兔耳缘静脉注射 20%乌拉坦（1g/kg 体重，注射了 13ml） ，待兔麻醉后，将其仰卧，先后固定四肢及兔头(此时家兔惊醒，补助乌拉坦 6ml)。3、 剪去颈前部兔毛，正中切开皮肤 5-6cm，用止血钳纵向分离软组织及颈部肌肉，暴露器官及与气管平行的颈动脉。分离颈动脉，行颈动脉插管。手术完毕后，用温热的生理盐水纱布覆盖手术创口。静脉注射肝素，剂量为 1000U/kg 体重（约为2.58ml
3、） 。4、 取 1 支 10ml 试管，家兔颈动脉取血 1.5ml，摇匀试管内血液，防止凝血。5、 沿对侧耳缘静脉缓慢注射 10%水杨酸钠 150mg/kg（因注射过程中发现部分药品漏出，补注了一部分，估计约为 3.9ml） 。于注射后1、3、5、10、20、50、80、110min 分别颈动脉放血 1.5ml 入相应的试管并摇匀。6、 取 10 支 10ml 离心管，水杨酸注射前取血管子标为“ 对照” ，水杨酸注射之后不同时间取血管标为相应“取血时间” ，另有 1 个管子没有取血，直接加入配置好的0.06%水杨酸钠标准液标为“ 标准” ，按下表加入样品及试剂：试管号 10%三氯制酸（ml）全
4、血（ml） 0.06%水杨酸钠（ml）蒸馏水（ml）对照 4 1 0 1标准 4 1 1 0各取血时间 4 1 0 17、 各试管用涡旋混匀器充分混匀，2000rpm，离心 10min。8、 各试管取上清液 3ml 加入另一套干净试管中，再加入 10%三氯化铁 0.3ml，混匀显色。以对照管调零，再 722 分光光度计上读取 520nm 的 OD 值。9、 求出水杨酸钠在家兔体内的血药浓度（Y ） 。先求出标准管浓度（Y 0）与 OD 值（X 0）的比值（K） ，K=Y 0/X0, Y=XK。10、绘出药-时曲线，以水杨酸钠浓度的对数值为纵坐标，对应时间横坐标作图，分析水杨酸钠药动力学模型及药
5、动学参数计算。6、注意事项1.颈总动脉插管术。2.取血前注意用肝素润湿注射器和针头，取血后注意用肝素封管，避免血液凝固。3.注意取药时间的精准性。4.注意先放掉残留在管中的液体后再放出的血才为该被收集的血液，不要误取了管中残留的血液和肝素等。5.离心后不要用力摇晃细管避免沉淀物溶解。6.每次加样时剂量一定要准确。7、实验记录采血时间 校零前实测数据 校零后数据 计算所得药物浓度(mg/ml)对照 0.185 0 0标准 0.226 0.041 0.0601 0.26 0.075 0.1093 0.229 0.044 0.0645 0.233 0.048 0.07010 0.228 0.043
6、0.06320 0.222 0.037 0.05450 0.165 -0.020 -0.02980 0.163 -0.022 -0.032110 0.154 -0.031 -0.045八、数据分析：因为后三组测量数据偏低，甚至低于对照组，导致计算所得的血药浓度变为负数，这明显是不现实的。因此在之后的软件分析中，将后三组血药浓度视为 0 进行分析（即舍弃后三组数据） 。分析时采用的程序为 PKSolver Compartmental Analysis Report（Version 2.0 ） ，具体分析结果如下：PKSolver Compartmental Analysis Report= Ve
7、rsion 2.0 =User InformationAnalyst: UserDate: 2014-4-15Time: 15:03:48User SettingsTime Unit: minConcentration Unit: mg/mlDose: 390Dose Unit: mgNumber of compartment: 2Fitting Weight: 1Model PKSolver #206: Compartmental Analysis of Plasma Data after IV Bolus InputSummary TableTime Conc ln(Conc) Conc_
8、pre Residual Weight1 1.09256 0.088523566 1.09255235 7.64997E-06 13 0.6439 -0.44021184 0.680482934 -0.03658293 15 0.70244 -0.35319529 0.663605943 0.038834057 110 0.62927 -0.46319486 0.623329047 0.005940953 120 0.54146 -0.61348608 0.54996059 -0.00850059 1Calculation ResultsParameter Unit ValueA mg/ml
9、36.30245325Alpha 1/min 4.521111854B mg/ml 0.706485351Beta 1/min 0.012522792Parameter Unit Valuek10 1/min 0.574267217k12 1/min 3.860777535k21 1/min 0.098589895t1/2Alpha min 0.153313433t1/2Beta min 55.3508486C0 mg/ml 37.00893861V (mg)/(mg/ml) 10.53799473CL (mg)/(mg/ml)/min 6.051624903V2 (mg)/(mg/ml) 4
10、12.6675785CL2 (mg)/(mg/ml)/min 40.68485331AUC 0-t mg/ml*min 20.52873111AUC 0-inf mg/ml*min 64.44550121AUMC mg/ml*min2 4506.838365MRT min 69.932552Vss mg/(mg/ml) 423.2055732Diagnostics Valuer obs-pre 0.991984112SS 0.00295395WSS 0.00295395R2 0.998941569WR2 0.998941569SE 0.054350253AIC -21.1230601SC -2
11、2.68530845Charts Output00.20.40.60.811.20 5 10 15 20 25Time (min)Concentration (mg/ml)ObservedPredicted0.11100 5 10 15 20 25Time (min)Concentration (mg/ml)ObservedPredicted分析 ：由于静脉给药，所以并没有表示药物在体内吸收分布的上升峰，图示的是给药后血药浓度直接大幅上升，然后表现为持续较长时间的下降支，反映药物的代谢排泄相。由图及表格分析可知:T=0 时，C=0.109T=20 时，C=0.054由于图示趋势线较精准，不正常点值少，故可以得出结论半衰期近似等于20min.Residual Plot-0.05-0.04-0.03-0.02-0.0100.010.020.030.040.050 5 10 15 20 25Time (min)Residual (mg/ml)=The End of PKSolver Report=九、实验讨论：
