1、细菌形态学检查,南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心,教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生 实验课时：4学时 课程类型：专业实验课 课程要求：必修 每组人数：1人,实验目的和要求,掌握革兰染色法的原理、方法及结果判断。 掌握显微镜油镜的使用与保护、细菌涂片制备的方法。 熟悉不染色标本检查法。 学会观察细菌的基本形态和特殊结构。 了解实验室规则及注意事项。,实验内容,实验室规则及注意事项。 显微镜的使用与保护。 细菌不染色标本检查。 细菌涂片及革兰染色。 细菌基本形态、特殊结构观察。,一、实验室规则及注意事项,不得在实验工作区内吃、喝及抽烟，以及装卸隐形眼镜和上妆等。实验用的冰箱中不得储存饮
2、料、食物。 在实验操作时请穿好实验防护衣及其它合适的防护服。实验室中不宜穿凉鞋、露趾鞋。操作感染性、有毒物质或动物时，必须戴手套。不宜将实验衣、手套或其它个人防护装备穿着到实验室以外的场所。,实验工作台应每日清理，若有污染发生应立即进行消毒；所有设备在使用后均必须及时清理和处理，以保持无污染状态。 所有污染物玻璃器皿、动物笼、实验装置等，必须先经过消毒处理 (如：高压蒸气灭菌或化学杀菌处理)，再行清洗或重复使用。废弃物需经适当之废弃物处理流程处置。,在接触传染性物质、化学物质和动物后脱掉手套，切记洗手。 严格无菌操作，树立良好无菌观念。 在遇到不能处理的问题时，请立即与本实验室人员联系以便及时
3、采取相应的处理或消毒措施。,二、显微镜的使用与保护,普通光学显微镜用油镜放大1000倍，一般细菌均能清楚看到。 暗视野显微镜用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动观察。 相差显微镜主要用于检查不染色活细菌的形态及某些内部结构。,显微镜油镜的使用(一),低倍镜对光，将光线调至最强程度(聚光器提高，光圈全部开放)。 转动粗调节器使镜筒上升，滴香柏油1小滴(不要过多，不要涂开)于接物镜正下方标本上。 转动接物镜转换盘，使油镜头于镜筒下方。 俯身镜旁侧面在肉眼的观察下，转动粗调节器使油镜头徐徐下降浸入香柏油内，轻轻接触玻片为止。,显微镜油镜的使用(二),慢慢转动粗调节器，使油镜头徐徐上升至见到标本
4、的物象为止。 转动微调节器，使视野物象达到最清晰的程度。 左手徐徐移动推进器，并转动微调节器以观察标本。 标本观察完毕后，转动粗调节器将镜筒升起，取下标本玻片。立即用擦镜纸将镜头上的香柏油擦净。,显微镜的保护(一),显微镜在从木箱中取出或装箱时，右手紧握镜臂，左手稳托镜座，轻轻取出。不要只用一只手提取，以防显微镜坠落，然后轻轻放在实习台上或装入木箱内。 显微镜放到实习台上时，先放镜座的一端，再将镜座全部放稳，切不可使镜座全面同时与台面接触，这样震动过大，透镜和微调节器的装置易损坏。,显微镜的保护(二),显微镜须经常保持清洁，勿使油污和灰尘附着。如透镜部分不洁时，用擦镜纸轻擦，如有油污，先将擦镜
5、纸蘸少许二甲苯拭去。 显微镜用完后，取下标本片，经聚光器降下，再将物镜转成“八”字形，转动粗调节器使镜筒下降，以免接物镜与聚光器相碰。,三、不染色标本检查,应用：主要用于观察活菌的动力和运动方式。 常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野映光法。,1、压滴法,2、悬滴法,镜检,四、细菌涂片制备和革兰染色,细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小、排列方式外，还可根据染色反应将细菌进行分类。,（一）涂片制备,涂片： 干燥： 固定：通常用火焰加热固定，将已干燥的涂片在火焰中迅速通过3次，以手背皮肤接触玻片不烫为佳。,涂片,干燥,固定,染色,水洗、吸干,镜检,制备涂片标本染色,（二）革兰染色,最经典、
6、最常用的染色方法。 通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和G-菌两大类。,1、染色原理,细胞壁通性学说：与肽聚糖结构有关。 化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关。 等电点学说：与细菌所带电荷有关。,2、染色方法,结晶紫液初染,卢戈碘液媒染,95乙醇脱色,稀释复红复染,1min 水洗、甩干,30S1min 水洗、甩干,1min 水洗、甩干,影响革兰染色的关键步骤是脱色。,2、染色方法,3、革兰染色结果,紫色革兰阳性菌 红色革兰阴性菌,革兰阳性菌,革兰阴性菌,4、影响革兰染色的因素,操作因素 涂片的厚薄；脱色时间的长短。 染液因素 卢戈碘液放置时间过长；95乙醇挥发；结晶紫与草酸铵混合时间太长。 细菌因素 细菌种类；细菌菌龄等。,五、细菌的基本形态 和特殊结构观察,细菌基本形态球菌,细菌基本形态杆菌,细菌基本形态弧菌,细菌特殊结构芽胞,细菌特殊结构荚膜,细菌特殊结构鞭毛,
