1、实验1：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质,必修一实验:,检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质,一.实验原理：某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。如： .还原性糖的鉴定： 还原性糖+ .脂肪的鉴定： 脂肪+脂肪+ .蛋白质的鉴定： 蛋白质+ 淀粉 +,斐林试剂,砖红色沉淀,苏丹染液,橘黄色,苏丹染液,红色,双缩脲试剂,紫色,碘,蓝色,2,二.目的要求：尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质,1、还原糖的检测和观察：选材 应该选择含 量高.颜色为以苹果.梨为最好。,糖,白色或近于白色,制备组织样液：,制浆 过滤 取液,三.实验过程:,用一层纱布,的植物组织，,3
2、,可溶性还原糖与斐林试剂在加热的过程中生成砖红色沉淀，说明植物组织样液中含有还原糖。,注入2mL苹果组织样液,注入1mL刚配制好的斐林试剂,水浴加热约2min,呈色反应,变成砖红色,50-650C的温水,甲乙液等量混匀现配现用,振荡、混合摇匀呈现蓝色,4,还原糖有 。试剂： . （甲液：0.1g/ml的 , 乙液：0.05g/ml的 .） 甲乙液必须 后再加入样 液中， 。必须 。,葡萄糖，果糖，麦芽糖,用水浴加热,斐林试剂,NaOH,CuSO4,等量混合均匀,现配现用,注意事项：,颜色变化：,浅蓝色,棕色,砖红色,5,思考：,1.为什么加入斐林试剂甲液和斐林试剂乙液时必须混合后再加入？ 因为
3、若先加入NaOH溶液，还原性糖中的还原性半缩醛羟基易被氧化而失去还原性，再加入CuSO4溶液后不能产生Cu2O砖红色沉淀，只有将其先配成Cu(OH)2悬浊液，才可产生砖红色沉淀。,6,2.斐林试剂甲液和乙液既然混合后使用，为什么不能在实验前配制好，一定要使用时临时配制？,由一分析可知，鉴定试剂实质上是Cu(OH)2悬浊液，很不稳定，容易生成蓝色Cu(OH)2沉淀，所以应将甲液、乙液分别配制储存，使用时再临时配制,7,二、脂肪的检测方法一：制作临时切片,（1）选材：经浸泡去种皮的花生种子。,（2）检测过程：,制片,选取最薄的切片置于洁净的载玻片中央,制成临时装片：滴12滴蒸馏水，盖上盖玻片,染色
4、：在薄片上滴加23滴苏丹染液，染色23min,洗去浮色：用吸水纸吸去染液，滴加体积分数为50%的酒精12滴,镜观察：在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒，然后用高倍镜观察。,切片：花生种子（浸泡h），去皮， 将子叶削成薄片。,视野中有橘黄色颗粒,橘黄色小圆颗粒即为脂肪颗粒,脂肪 + 苏丹（或苏丹）染液 橘黄色（或红色）,注意事项：切片要薄，如厚薄不均就会导致观察时有的地方清晰有的地方模糊。酒精的作用是： 。需使用显微镜观察 使用不同的染色剂染色时间不同 颜色变化： 。,洗去浮色,橘黄色或红色,11,3、蛋白质的检测和观察：选材 应该选择含 丰富 的豆浆或鸡蛋清溶液（避免材料自身的颜色对实 验变化
5、颜色的掩盖）,蛋白质,黄豆浆滤液或蛋清稀释液,制备组织样液,呈色反应,组织样液2mL,双缩脲试剂A液1mL,双缩脲试剂B液4滴,摇匀后变成紫色,说明组织样液中存在蛋白质。,12,（3）注意事项：试剂： （A液：0.1g/ml的 ；B液： 0.01g/ml的 ）先加 ，再加 。 注意： 先加入试剂A，造成碱性环境，而只有在碱性环境中，蛋白质才容易与Cu离子发生颜色反应，形成紫色的络合物。B液要求量适中，否则多余的B液将会与A液发生反应生成大量蓝色Cu(OH)2沉淀而遮盖试验中所产生的紫色。同样为了防止生成较Cu(OH)2沉淀遮蔽实验结果，在配制溶液时，双缩脲试剂B比斐林试剂乙液浓度小得多，这也是
6、斐林试剂和双缩脲试剂不能互换使用的道理。 鉴定前，留出一部分组织样液，以便对比。用于蛋白质鉴定的蛋清必须稀释，以免实验后粘住试管壁，不易洗刷,双缩脲试剂,A液1ml,B液4滴,NaOH,CuSO4,蛋白质的检测结果,13,斐林试剂与双缩脲试剂的比较：,A液:0.1g/mLNaOH B液:0.01g/mLCuSO4,甲液:0.1g/mLNaOH 乙液:0.05g/mLCuSO4,紫色物质生成,砖红色沉淀,先加A液，再加B液，不需加热,甲液与乙液先混再用，且现配现用，需加热,蛋白质,还原性糖,14,斐林试剂与双缩脲试剂都由NaOH和CuSO4组成，但二者有如下三点不同： 溶液浓度不同。斐林试剂中N
7、aOH的浓度为0.1g/mL，CuSO4的浓度为0.05g/mL；双缩脲试剂中NaOH的浓度为0.1g/mL，CuSO4的浓度为0.01g/mL。使用原理不同。斐林试剂实质是新配制的Cu(OH)2溶液；双缩脲试剂实质是在碱性环境下的Cu2。使用方法不同。使用斐林试剂时，先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合，然后立即使用。使用双缩脲试剂时，先加入NaOH溶液，然后再加入CuSO4溶液。,淀粉的检测和观察：取材：,马铃薯匀浆,检测,组织样液2mL,碘液2滴,说明组织样液中存在淀粉。,注意： 常用材料：马铃薯 试剂： 。颜色变化： 。,碘液,变蓝,摇匀后变成蓝色,17,四种物质颜色反应的对比,还原糖,蛋白质,淀粉,脂肪,18,下列关于实验操作步骤的叙述中，正确的是 用于鉴定可溶性还原糖的斐林试剂甲液和乙液，可直接用于蛋白质的鉴定 .脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色的脂肪滴 C.鉴定可溶性还原糖时，要加入斐林试剂甲液摇匀后，再加入乙液 用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂A液与B液要混合均匀后，再加入含样品的试管中，且必须现配现用,（ ）,19,
