1、SDS-PAGE1、 SDS-PAGE：聚丙烯酰胺凝胶电泳2、 Acr：丙烯酰胺；配胶时用 30%Acr（质量比 Acr：Bis=29:1）3、 Bis：甲叉双丙烯酰胺4、 DDW：超轻水5、 SDS：十二烷基硫酸/磺酸钠，阴离子去污剂（配胶时用 10%）6、 APS：过硫酸铵 NH4S2O4 配胶时用 10%7、 TEMED：四甲基乙二胺，促凝剂8、 Tris-Hcl：3 羟基氨基甲烷盐酸缓冲液，配胶时（分离胶 ph=8.8，浓缩胶 ph=6.8）9、 DTT：二硫苏糖醇，DTT 也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。10、 I
2、MA：碘乙酰胺，碘代乙酰胺用于有机合成，在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷基化试剂，用于多肽测序以及酶抑制剂等，蛋白组学级试剂。 CH2ICONH2，是和碘乙酸一样，可通过下列反应不可逆地抑制 SH 酶类的物质。1) 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制 SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)：SDS-PAGE 分离胶浓度 最佳分离范围6%胶 50-150kD8%胶 30-90kD10%胶 20-80kD12%胶 12-60kD15%胶 10-40kD成分 配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（毫升）6%胶 5 10 15 20 30 50蒸馏水 2.
3、0 4.0 6.0 8.0 12.0 20.030%Acr-Bis(29:1)1.0 2.0 3.0 4.0 6.0 10.01M Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.010%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.510%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5TEMED 0.004 0.008 0.012 0.016 0.024 0.04成分 配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（毫升）8%胶 5 10 15 20 30 50蒸馏水 1.7 3.3 5.0 6.7 10.0 16.730%Acr-Bis
4、(29:1)1.3 2.7 4.0 5.3 8.0 13.31M Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.010%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.510%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5TEMED 0.003 0.006 0.009 0.012 0.018 0.03成分 配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（毫升）10%胶 5 10 15 20 30 50蒸馏水 1.3 2.7 4.0 5.3 8.0 13.330%Acr-Bis(29:1)1.7 3.3 5.0 6.7 10.0 16.71M
5、 Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.010%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.510%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02成分 配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（毫升）12%胶 5 10 15 20 30 50蒸馏水 1.0 2.0 3.0 4.0 6.0 10.030%Acr-Bis(29:1)2.0 4.0 6.0 8.0 12.0 20.01M Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4
6、 19.010%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.510%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02成分 配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（毫升）15%胶 5 10 15 20 30 50蒸馏水 0.5 1.0 1.5 2.0 3.0 5.030%Acr-Bis(29:1)2.5 5.0 7.5 10.0 15.0 25.01M Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.010%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.
7、3 0.510%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加 10%SDS 即可配制成非变性 PAGE 胶。1) 按照如下表格配制 SDS-PAGE 的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶) ：成分 配制不同体积 SDS-PAGE 浓缩胶所需各成分的体积（毫升）5%胶 2 3 4 6 8 10蒸馏水 1.4 2.1 2.7 4.1 5.5 6.830%Acr-Bis(29:1)0.33 0.5 0.67 1.0 1.3 1.71M Tris,pH8.8 0.25
8、 0.38 0.5 0.75 1.0 1.2510%SDS 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.110%过硫酸铵 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.1TEMED 0.002 0.003 0.004 0.006 0.008 0.01TBST 缓冲液每 2L 体积中含：1M TrisHCL(pH7.5)100mLNacl 16gKCL 0.4g吐温 1ml1) 抗体去除液每 50mL 抗体去除液中含：0.5M TrisHCL（pH6.8）6.25mL10%SDS 10mLBeta-ME 0.175mL水 33.75mLSDS-PAGE 电泳的基本原理：SDS-
9、聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进 SDS（十二烷基硫酸钠），SDS 会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合 SDS 的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此 SDS 多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与 1.4g 去污剂结合。当分子量在15KD 到 200KD 之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW 为分子量，X 为迁移率，k、b 均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体，其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否，与促凝剂及环境密切相关；制胶缓冲液：浓缩胶选择 pH6.8，分离胶选择 pH8.8，选择 trisHCL 系统，具体作用后面介绍；TEMED 与 AP：促凝作用，加速聚丙烯酰胺的凝固；AP 中含有 29 的丙烯酰胺和 1 的甲叉基聚丙烯酰胺，能产生自由氧基，使丙烯酰胺聚合。十二烷基硫酸钠（SDS）：阳离子去污剂，作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。
