1、趋化因子受体 CCR7蛋白在肝细胞癌组 织中的表达及临床意义 沈利 李红霞 解放军第一零七医院重症医学科 解放军第一零七医 院护理部 摘 要： 目的 探讨趋化因子受体 CCR7在肝细胞癌组织中的表达及临床意义。方法 采用 组织芯片技术和免疫组化技术测定 65对肝细胞癌组织及配对正常组织中 CCR7 的表达情况, 分析 CCR7表达的临床病理特征及其与预后的关系。结果 CCR7在 肝细胞癌组织中表达量显著高于其配对正常组织 (P0.05) , 而与AFP水平、包膜完整有关 (P76%分别定义为 0、1、2、3分。最后两项相加, 阴性:01 分;弱阳性:2分;中等阳性:34分;强阳性:56分。 三
2、、 Western Blot检测肿瘤细胞和正常肝细胞HL-7702的CCR7蛋白表达水平, 以 及 BEL-7405 细胞质粒干扰后 CCR7 蛋白的表达水平 提取总蛋白;加入蛋白上样缓冲液, 100煮沸变性;通过分离, 转至硝酸纤维素 膜上, 加入一抗 CCR7 和GAPDH 抗体, 4孵育过夜;加入二抗, 室温下孵育 2 h; 然后用奥德赛红外激光成像系统扫描条带显色。 结果用Image J进行灰度值分析。 四、统计学方法 计数资料以百分比率 (%) 表示, 应用SPSS 16.0统计软件分析, 采用检验分 析免疫组织化学检测组间差异, Spearman等级相关分析对数据进行处理, Kap
3、lan-Meier生存分析以及 Cox比例风险回归, 以P0.05为差异有统计学意 义。 结果 一、CCR7 在肝细胞和组织中的表达 CCR7阳性染色定位于浸润淋巴细胞的胞浆, 呈棕褐色, 肿瘤间质与癌巢内亦可 见分布。在总共65 对HCC和正常组织中, HCC 组织中CCR7阳性率达 42例 (64.6%) , 阴性率 23例 (35.4%) , 而配对正常肝组织中 CCR7阳性率为 18例 (27.7%) , 阴性率 47例 (72.3%) 。CCR7蛋白在HCC中的表达显著高于其配对 正常肝组织 (P0.05) , 详见图1。 二、CCR7 表达与 HCC 患者临床病理特征的关系 综合6
4、5 例HCC病例相关资料分析, CCR7表达水平与 HCC患者年龄、性别、肝功 能分级及乙型肝炎病史等因素无关, 而与AFP 水平 (P0.05) 以及包膜完整 (P0.05) ) 有关, 详见表1。 三、CCR7 表达与 HCC患者预后的关系 所有65 例HCC患者术后共出现 13例复发, 复发率为20%。CCR7低、高表达组患 者的1 年生存率分别为 90.0%和75.5%, 3年生存率分别为 64.5%和 38.7% (P0.05) 。1年无复发率分别为 95.5%和80.4%, 3 年无复发率分别为 70.4%和 45.3%。差异有统计学意义 (P0.05) , 见图 2、3。 图1
5、趋化因子 CCR7 蛋白在HCC 及配对正常肝组织中的表达情况 下载原图 A:CCR7高表达 (SP50) ;B:CCR7高表达 (SP100) ;C:CCR7高表达 (SP200) D:CCR7高表达 (SP50) ;E:CCR7高表达 (SP100) ;F:CCR7高表达 (SP200) 表1 CCR7 表达与肝细胞癌患者临床病理特征的关系 下载原表 图1 CCR7 蛋白差异表达患者总体生存率比较 下载原图 图2 CCR7 蛋白差异表达患者无复发率比较 下载原图 讨论 肝癌是一种较常见的恶性肿瘤, 我国为肝癌高发地区, 每年死亡人数约 13万, 大约占全球肝癌死亡病例的 40%9。尽管近年
6、来诊断、治疗技术不断进步, 肝 癌的预后仍然较差。 外科手术是根治 HCC唯一行之有效的治疗手段, 但肝癌病程 进展迅速, 许多患者就诊时已处在中晚期阶段, 已失去了获得根治性手术治疗 的机会。而传统的 AFP、CEA等相关肿瘤标志物敏感性有限10, 因此寻找新的 HCC敏感的分子检测标志物迫在眉睫。 趋化因子是一类能定向趋化细胞移动的小分子肽类物质, 通过与相应受体结合 介导多种免疫细胞如淋巴细胞、树突状细胞的定向移动。趋化因子受体家族对肿 瘤的形成、浸润、迁移及转移等多个环节都有重要的影响, 许多肿瘤细胞表面均 发现有趋化因子受体的异常表达。CCR7为7 次跨膜G蛋白偶联受体, 主要表达
7、于各种淋巴细胞和组织, 已知它的高亲和力配体为胸腺和活化调节的趋化因子 及巨噬细胞衍生的趋化因子。研究发现 CCR7 与其配体不仅在多种炎症性疾病中 发挥重要作用, 而且与多种恶性肿瘤的生物学行为密切相关, 而其在 HCC的具 体临床研究尚缺乏11-12。 本研究检测了HCC患者肝癌组织以及配对正常肝脏标本中 CCR7的表达情况, 并 进一步证实了CCR7 与HCC临床病理特征和复发转移的相关性。结果表明 CCR7 在HCC 患者肝癌组织中的表达量显著高于其配对正常肝组织, 而CCR7 高表达与 HCC患者的年龄、性别、肝功能分级、乙型肝炎病史等相关临床因素无关, 而与 HCC患者 AFP水平
8、及包膜完整有关。而Kaplan-Meier生存分析结果显示 CCR7蛋 白表达与HCC术后生存时间相关, CCR7高表达患者生存期显著低于 CCR7低表达 患者, 同时 CCR7高表达患者 HCC术后无复发率也显著低于 CCR7低表达患者。 这 表明CCR7 可能参与了 HCC侵袭转移过程, CCR7 高表达患者预后显著低于 CCR7 低表达患者。 综上所述, 趋化因子 CCR7在HCC发生发展过程中具有重要作用, 其表达水平是 衡量HCC 患者预后的重要标志, 本研究为CCR7 可能作为HCC预后标志物及治疗 靶点提供了理论依据。 参考文献 1赫捷, 陈万青.中国肿瘤登记年报 (2012)
9、.北京:军事医学科学出版社, 2012:27-60. 2Yang S, Luo C, Gu Q, et al.Activating JAK1 mutation may predict the sensitivity of JAK-STAT inhibition in hepatocellular carcinoma.Oncotarget, 2016, 7:5461-5469. 3程兮, 邱伟华.肝癌合并门静脉癌栓的多学科治疗进展.外科理论与实践, 2015, 20:360-363. 4Mohamad B, Shah V, Onyshchenko M, et al.Characterizatio
10、n of hepatocellular carcinoma (HCC) in non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) patients without cirrhosis.Hepatol Int, 2016, 10:632-639. 5Yopp AC, Choti MA.Non-Alcoholic Steatohepatitis-Related Hepatocellular Carcinoma:A Growing Epidemic Dig Dis, 2015, 33:642-647. 6Niessen C, Thumann S, Beyer L, e
11、t al.Percutaneous Irreversible Electroporation:Long-term survival analysis of 71patients with inoperable malignant hepatic tumors.Sci Rep, 2017, 7:43687. 7Zhou M, Wang S, Hu L, et al.miR-199a-5p suppresses human bladder cancer cell metastasis by targeting CCR7.BMC Urol, 2016, 16:64. 8Mishan MA, Ahma
12、diankia N, Bahrami AR.CXCR4 and CCR7:Two eligible targets in targeted cancer therapy.Cell Biol Int, 2016, 40:955-967. 9Jang CW, Kwon HJ, Kong H, et al.Impact of clinically significant portal hypertension on surgical outcomes for hepatocellular carcinoma in patients with compensated liver cirrhosis:a
13、 propensity score matching analysis.Ann Hepatobiliary Pancreat Surg, 2016, 20:159-166. 10Yang Y, Chen L, Gu J, et al.Recurrently deregulated lncRNAs in hepatocellular carcinoma.Nat Commun, 2017, 8:14421. 11Hong H, He C, Zhu S, et al.CCR7 mediates the TNF-induced lymphatic metastasis of gallbladder cancer through the“ERK1/2-AP-1“and“JNK-AP-1“pathways.J Exp Clin Cancer Res, 2016, 35:51. 12Sun L, Zhang Q, Li Y, et al.CCL21/CCR7 up-regulate vascular endothelial growth factor-D expression via ERK pathway in human non-small cell lung cancer cells.Int J Clin Exp Pathol, 2015, 8:15729-15738.
