1、液相色谱柱维护保养及仪器冲洗注意：每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书。色谱柱维护保养是很重要的，关系到色谱柱的使用寿命和检测结果的准确性，所以任何人用过色谱柱之后，一定要对色谱柱进行保养，管理人员和使用者互相监督。总的原则是色谱柱要 轻拿轻放 ，避免损坏填料；另外没有使用的情况下，一定要保证 两端的堵头封好 。对于具体的色谱柱，下面列出常用色谱柱维护保养的具体方法和注意事项，以便使用者参考。对于未启用的新的色谱柱，先用甲醇或乙腈以小流速（0.2ml/min 缓慢升高到 0.5ml/min）不接检测器冲洗色谱柱 30 分钟后，将色谱柱与检测器连上，流速调为 1.0 ml/min 冲洗色谱柱
2、 60 分钟，然后不断降低有机相的比例（如80%、 50%、 10%甲醇或乙腈）各冲洗至少 30 分钟。若色谱柱暂时不用，则将色谱柱保存在高比例有机相中（如 80%甲醇或乙腈，或者参考该色谱柱使用说明书中建议的溶剂中） ；色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例的有机溶剂（将缓冲盐溶液换成水）冲洗色谱柱 15 分钟，然后再换成流动相进行样品分析。样品分析完后，色谱柱维护与保养方法：流动相中若含酸、碱、盐类物质，则要先用 10%甲醇或乙腈冲洗，1.0ml/min 的流速冲洗至少 30min，再用 80%甲醇或乙腈冲洗至少 30min，柱子保存在 80%甲醇或乙腈里（ 具体问题具体分析，洗脱程序可以是
3、梯度洗脱程序，注意如果最后色谱柱保存的是高有机相，第二天用之前一定要用高水相过渡一下，再换成流动相 ） 。如柱子长时间未用，则柱子保存在 100%的甲醇或乙腈里。对于含有离子对试剂的流动相如庚烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等，柱子应采用梯度洗脱，一般用乙腈-水系统（水：90-10；乙腈：10-90）冲洗时间要稍长些，然后保存于 90%乙腈。需要特别强调的是 ，目前所有的 C18 柱均不能用纯水进行长时间（1 小时C18 柱（包括预柱）以上）冲洗，除非有专门耐水的专用柱，否则，用纯水长时间冲洗色谱柱，会导致色谱柱的固定相流失和相塌陷，损坏色谱柱。大多数反相色谱柱的 pH 稳定范围是 28，有的 pH
4、稳定范围会宽，具体pH 稳定范围参照色谱柱说明书，当分析条件的 pH 值偏小或偏大时，可选择pH 稳定范围宽的柱子进行分析，否则，会损坏色谱柱。在每次进行样品分析时，要保证流动相（包括盐、缓冲盐、酸等）与色谱系统及柱内的保存液要互溶，如不能互溶，则需要用一定比例的有机溶剂（不低于 10%）或与分析流动相相当的有机溶剂对柱子进行过渡，否则，流动相中的盐会在系统与柱内析出，影响样品分析或损坏柱子。硅胶柱、正相手性色谱柱【包括 AS-H、AD-H、OD-H 系列，5DMB、5TBB 系列，OA 系列（如 OA-3100、OA-3300） 】 对于未启用的新的色谱柱，在保证系统是正相的情况下，可先用异
5、丙醇小流速（流速为 0.10.3ml/min）冲洗色谱柱约 15 分钟，然后换上正相流动相平衡进行色谱分析。硅胶柱及正相手性柱不能过水相（对于 sepax 系列的硅胶柱，可以过低比例的水相（有机相不低于 50%） ） ，接上色谱柱之前要保证液相色谱系统中的所有管路为正相流动相【如是不含盐的反相溶液（如水/ 乙腈；水/ 甲醇） ，先用异丙醇冲洗所有管路，然后用正相流动相冲洗所有管路，最后再接上色谱柱；若反相流动相中含有缓冲盐（如缓冲盐/乙腈；缓冲盐 /甲醇） ，先用纯水冲洗HPLC 系统，然后用异丙醇冲洗所有管路，最后用正相流动相冲洗，再接上色谱柱。 】使用结束后，先用异丙醇冲洗色谱系统与色谱柱
6、，再用色谱级的正己烷冲洗色谱柱， （或者直接用正己烷异丙醇（90 ： 10）冲洗，并保存在正己烷异丙醇（90：10）中） 。如长时间未用，则保存在 正己烷中。需要特别强调的是，冲洗硅胶柱时，不能用纯水或含水的有机溶剂或缓冲盐体系冲洗色谱柱，只能用纯有机溶剂冲洗色谱柱（对于 sepax 系列的硅胶柱可以用不低于 50%有机相冲洗色谱柱） ，最后保存在纯的有机溶剂中。在进行样品分析前，一定要保证流动相与色谱系统及色谱柱柱内的保存液要互溶，如不互溶，则需要用异丙醇过度，否则，会影响色谱系统与损坏柱子。反相手性色谱柱（如：CHIRALCEL OZ-3R）：同 C18 柱阴离子柱和阳离子柱： 目前常见的
7、阴子柱有 waters IC-PakTM anion，阳离子柱有磺酸基阳离子柱与 waters 阳离子交换柱（钙型） 。对于 waters IC-PakTM anion 和 waters 阳离子交换柱（钙型） ，新柱子使用前用高纯水小流速（0.2ml/min 缓慢升高到 0.5ml/min）冲洗约 30 分钟，然后再换成流动相平衡色谱柱。在冲洗色谱柱之前，要保证整个色谱系统为纯水相。对于磺酸基阳离子柱（含有硅胶基柱的） ，使用前用甲醇或乙腈小流速冲洗30 分钟，然后高纯水替换系统冲洗，然后接上色谱柱。分析完样品后，对于 waters IC-PakTM anion 和 waters 阳离子交换柱
8、（钙型）用高纯水冲洗色谱柱，色谱柱最后保存在纯化水中。对于磺酸基阳离子柱，用 50%的乙腈或甲醇冲洗色谱柱 30 分钟，最后保存在甲醇或乙腈中（参照柱子说明书） 。冲洗所用流速根据柱子耐压情况进行调整。需要特别强调的是 waters IC-PakTM anion 和 waters 阳离子交换柱（钙型）是不能过有机相（纯有机溶剂或有机溶液） ，否则会损坏色谱柱。氨基柱、氰基柱、苯基柱及 C8 柱目前所使用的氨基柱、氰基柱、苯基柱及 C8 柱基本都是使用反相系统，其操作方法与维护保养与 C18 相同。对于新碰到的别的型号的色谱柱，如本规程没有说明时，要参照色谱柱说明书具体问题具体分析。Commen
9、t u1: 洗针液洗针的外壁,流动相一直走内壁液相仪器的冲洗1、冲洗色谱系统（具体情况具体分析，可针对缓冲盐浓度较高的流动相）一般做完试验冲洗完色谱柱后，换上两通，将各通道放于 10%乙腈中冲洗至少 30分钟（若原色谱系统中流动相含盐，则用 高纯水 （有时候用温水效果更好）冲洗至少 30分钟后再用 10%乙腈冲洗） 。若仪器长时间不用，则将仪器保存于 80%乙腈中。2、清洗进样针、柱塞杆洗针液应选择能较好溶解样品的溶剂（如该样品在 70%甲醇中溶解，则洗针液应选择 70%甲醇或更高比例的甲醇） ；清洗柱塞杆的溶剂（为了清洗流动相中析出的盐） ，一般选择低比例的有机相，如 10%甲醇或乙腈。3、
10、仪器的钝化色谱泵溶剂过滤头、进出口阀及管路（包括进样器和检测池）若被污染，系统应做清洗和钝化处理。一般采用 30%磷酸水溶液作为清洗剂，用 6mol/L硝酸作为钝化剂，先清洗再钝化。清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢。钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜。30%磷酸水溶液制备：取 85%浓磷酸 35ml与 65ml水混匀。6mol/L硝酸的制备：取浓硝酸 40ml与 60ml水混匀。方法：将色谱柱取下，用两通连接进样器和检测器，将所有吸滤头放入高纯水中，以 1.0ml/min流速过渡（至少 30分钟） ，待管路中有机溶剂洗脱干净；再换用 30%磷酸清洗系统（约 45分钟） ，再换高纯水冲洗，直至出口水 pH值约为 67(用 pH试纸测试） ，清洗完成；然后换用 6mol/L硝酸冲洗系统（约45分钟） ，再换高纯水冲洗，直至出口水 pH值约为 67，钝化完成。用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用。
