1、高效净水沼泽红假单胞菌的分离和鉴定广西农业科学 2005 年第 36 卷第 1 期?57?高效净水沼泽红假单胞菌的分离和鉴定雷爱莹,彭敏,曾地刚,李咏梅(广西水产研究所,南宁 530021)摘要:从高产虾塘底泥中采用平板涂布法分离光合细菌 ,得到一株活性较高的沼泽红假单胞菌(Rhodopsdomonaspal“strls).将其施放于南美白对虾养殖池水中 ,待繁殖后测定氨氮,亚硝酸盐,溶解氧,COD值和 pH 值等各项指标.结果表明,沼泽红假单胞菌对虾池水质具有较好的改善作用.关键词:净化水质;沼泽红假单胞菌;分离鉴定中图分类号:Q93.331 文献标识码:A 文章编号:1002 8161(2
2、005)010057-02IsolationandidentificationofRhodopseudomonaspalustrlsforhigheffectivepurifyingwaterinagricultureIEIAiying,PENGMin,ZENGDigang,LIYongmei(GuangxiAquaticProductionResearchInstitute,Nanning530021)AbstractHighproductivitystrainofRhoat)psPtat)moHaspalustrlswasscreenedfromthemudofshrimppondsbys
3、preadplatemethodandwasidentifiedafterreproducedinPenaeusvannameimariculturepond,thechemicaldata,includingNH3 一 N,NO2 一,DO,CODandpHetc.ofwaterqualityweredetectedregularly.IheresultindicatedthatthestraincouldimprovethequalityOfshrimppondswater.Keywords:purificationofwater;R0o 户 so,dspalustrls;isolatio
4、nandidentification随着我国水产养殖的发展,养殖生态环境恶化的问题日趋严重,寻找既能优化养殖环境,又不会使水环境受到二次污染的水质净化方法是国内外水产养殖业关注的焦点.光合细菌(pHotoSyntaeticBacteria)广泛存在于自然界,是一类以光为能源,利用自然界中的有机物,硫化物等为营养体,并能进行光合作用的微生物,它不仅能净化水质,而且含有丰富的营养,可作为鱼虾的饵料添加剂,促进水产品的繁殖,提高孵化率卜.光合细菌的多种良好性能已引起国内外广大学者的关注.我们从本地高产虾塘的底泥中进行了光合细菌的分离到一株沼泽红假单胞菌,用于净化养虾池水,取得了较好的效果.1 材料与
5、方法1.1 待分离材料广西南宁某高产虾塘底泥.1.2 培养基【“富集培养基 ,分离培养基,扩大培养基1.3 菌株的分离方法取采集的虾塘底泥 1g 放人 250ml 三角瓶中,再添加富集培养基 100ml,液面注入灭菌液体石蜡,隔绝氧气,于光照生化培养箱中 2830C 保温,随时观收稿日期:20041115基金项目:广西科学基金资助项目(桂科青 0229025)作者简介:雷爱莹,女,1970 年生,广西南宁人,工程师 ,主要从事水产动物病害研究.察.当培养液变红色后,重复进行富集培养 2 次,取富集液用平板稀释涂布分离法分离,采用焦性没食子酸去氧法进行厌氧光照培养,观察并挑取红色单菌落.镜检运动
6、活跃者,重复平板稀释涂布分离法分离 3 次,以得到纯的菌株,将红色菌落移至斜面培养基中保存备用.1.4 菌种鉴定方法1.4.1 形态观察及生理特性的测定.测定方法主要参照文献.1.4.2 碳源的利用.经斜面培养 48h 的菌株,用无菌生理盐水洗涤菌体制成菌悬液,离心洗涤 3 次,用生长谱法,以分离培养基为基础,在添加不同碳源的平板上点涂菌悬液,培养 48h 观察菌株的代谢特性.1.5 分离菌株对养虾池的水质净化试验试验分为试验组和对照组,池面积均为 1.2m,池深 1.5m,每池的放养密度为 27 尾/m.投喂鱼颗料饲料,预喂 5d 后开始试验.第 1 天测量水中的氨氮,亚硝酸盐,溶解氧含量及
7、 pH 值,COD 值,然后在试验组中加人沼泽红假单胞菌,浓度为 10 个/m.,以后每隔 12d 测定水质指标,测定项目同第 1 天.2 结果与分析2.1 菌株鉴定虾塘底泥经富集培养 14d 后,培养液变红,重复富集,取呈深红色的富集液进行稀释,经多次平板涂?58?广西农业科学 2005 年第 36 卷第 1 期布分离,得到一株菌株 GY(在固体培养基上 GY 菌菌落呈圆形,边缘整齐,表面凸状,光滑湿润,在厌氧光照下培养 4860h 后,呈红色至深红色),GYI 菌株菌体杆状,两端钝圆有时稍弯曲,在幼龄菌可见两端生鞭毛.根据分离菌株的形态和生理生化特征的测定,GY 菌被鉴定为沼泽红假单胞菌(
8、RhrJdrJPeldomonaspalustrls),详细特征见表 1.2.2 分离菌株对养虾池水质的净化效果分离菌株对养虾池水质净化效果见表 26.由表 2 可以看出,试验池的 COD 值从第 1 天的 8.39 下降到第天的 8.O5,而对照池的 COD 值,从第 1 天的 7.71 上升到第天的 9.54;由表 3 可以看出,试验饲养池水的 pH 值在 7.317.12 范围内变动,而对照池的 pH 值从第 1 天的 7.25 下降到第天的6.81;试验期问,试验池中亚硝酸盐浓度呈下降趋势,从 0.461mg/I 下降到 0.309mg/L,而对照组中亚硝酸盐浓度呈上升趋势,从 0.4
9、18mg/L 上升至0.825mg/L(表 4).从表 5 可以看出 ,试验池的氨氮浓度从第 1 天的 0.416mg/I 下降至第天的 0.395mg/I;试验池中加入沼泽红假单胞菌后,溶解氧浓度得到明显提高,从第 1 天的 2.9lmg/L 上升至第 7天的 3.54mg/L,而对照组的溶解氧浓度从第 1 天的3.54mg/L 下降至第 9 天的 1.86mg/L.表 1 形态特征和生理特征测定测定项目分离菌株测定项目分离菌株革兰氏染色一碳源利用接触酶试验+乙醇+H2S 生成试验一乙酸钠+吲哚试验+硫代硫酸钠一硝酸盐还原试验+葡萄糖一明胶液化试验一丙酸钠+注:十阳性一阴性表 2COD 测定
10、结果单位 mg/L试验组 7.317.217.157.027.097.12对照组 7.257.167.056.926.856.81对照组 0.04180.05210.05810.06120.07510.0825表 5 氨氮的测定结果单位:mg/I目前,南美白对虾养殖多采用人工投饵的方式,随着养殖规模的不断扩大,集约化养殖程度的提高,虾池中残饵和生物排泄量超过了池塘的自然净化能力,有机物不能重复被分解而沉积,池水中厌氧分解层不断增厚,使池水趋于高营养化,造成池水中对虾体有毒害作用的氨,亚硝酸盐等物质的积累,微生物平衡遭到破坏.采取化学药剂改善水质,虽然能在短时问内发挥一定的作用,但是,许多化学药
11、剂不仅会破坏水体微生态结构,而且对虾体也有很强的毒害作用4,必须加强养殖生态环境保护,减少或停止药物使用,改用无污染的微生物水质改良剂.光合细菌属红螺菌科,是一类能利用光能而不产氧的特殊生理类群原核生物的总称,具有多种特定生理功能的水圈微生物,它不仅能利用光能,氨氮合成有机物,也能通过多种方式和途径转化不同类型的有机物和无机物质,对水体净化有着十分重要的作用.沼泽红假单胞菌 GY,应用于养殖水体后能迅速繁殖成优势菌群,抑制病菌的生长繁殖,能有效利用水中过剩有机物作为自身繁殖的营养源,迅速分解水中的氨氮,亚硝酸盐等有害物质,大幅度降低水体的污染指标,增加溶解氧,稳定水质.沼泽红假单胞菌用于养殖水体的净化是可行的.【参考文献】1黄皓.光合细菌在水产养殖中应用的研究J.湛江水产学院,1990,10(3):5861.2小林正泰. 养鱼与光合细菌J.养殖,1981.18(8):5659.3俞吉安.应用光合细菌饵料添加剂的研究报告J.淡水渔业,1991(3):8 11.4朱章玉.光合细菌的研究及其应用M.上海交通大学出版社,1991,274284.5邓小臬.几株光合细菌的分离鉴定及用于水质净化的初步研究J.四川师范学院,2001.22(1):8488.6中国科学院微生物研究所细菌分类组.一般细菌常用鉴定方法M.北京:科学出版社,1978.(责任编辑廖振钧)
