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高密度脂蛋白对缺血再灌注大鼠心肌损伤保护作用的研究.doc

上传人:cjc2202537 文档编号:262183 上传时间:2018-03-25 格式:DOC 页数:8 大小:99.50KB
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1、高密度脂蛋白对缺血再灌注大鼠心肌损伤保护作用的研究河北医药 2O07 年 2 月第 29 卷第 2 龃 HebeiMedicalJol 望 QN0:高密度脂蛋白对缺血再灌注大鼠心肌损伤保护作用的研究熊宏强【摘要】目的探讨高密度脂蛋白(HDL) 预处理对大鼠心肌缺血再灌注的影响.方法将 42 只sD 大鼠随机分为假手术组(s 组),缺血再灌注组(IR 组)和缺血再灌注 HDL 预处理组(H/IPC).以穿线结扎左冠状动脉制备心肌缺血再罐注模型,H,m 组缺血前 10min 经尾静脉注入HDL(30ms/ks).检测 3组大鼠缺血再灌注后 30,60,120,240min 血清肌酸激酶(CK),细

2、胞间黏附分子.1(ICAM.1)的含量;观察 3组大鼠缺血再灌注后 120min 心肌组织病理学变化.结果 H/IPC 组与 IR 组比较,大鼠 CK,ICAM.1 含量均降低,下降率分别为 36.5%,32.0%,12,6%(P0.01);S 组 CK,ICAM1 含量明显低于 IR 组(P0.01),S 组心肌纤维大小均匀,线粒体结构清楚;与 IR 组比较,H/IPC 组伤后 240min心肌细胞变性,炎性细胞浸润及线粒体肿胀程度减轻,且未见细胞溶解坏死.结论 HDL 对大鼠心功能的保护作用,可能与HDL 抑制 ICAM.1 的表达有关.【关键词】细胞间粘附分子.1;肌酸激酶;缺血再灌注损

3、伤;心肌EffectsoflII)Lprec 咖曲 Onisdaemia-repe删棚删 uryinratsXIONGHongqiang,-mentofBurnandPlasticSurgery,TheFourthHospitalofr4inCity,Tianjin300222【Abazaet】ObjectiveToinvestigatetheeffectsofHDLpreconditioningonischemia-eperfusionmyocardialinjuryinrats.Methods42SDratsweldividedrandomlyintothreegroups:shamope

4、rationgroup(S),ischemie/repeIfusiongroups(YR),HDL/ischemiepreconditioninggroups(H/IPC),Theischemia-reperfusionheartmodelwasestablishedbyligatingandlooseningtheleftanteriordescendingbranchofcoronaryarteryinSDrats.Theereatineki-nase(CK),expressionsofICAM-1weredetectedbyELISA,andmorphologicalchangesofm

5、yocardialtissueswereobservedunderlightmicroscopeandelectronmicroscope,ResultsThecontentsofCK,ICAM-1intheshafflopera-tiongroupsweleobviouslylowerthanthoseinI/Rgroups(P0,01),whilethoseinHDL-I/Rgroupwelealsomarkedlylowerthanthoseinshamoperationgroup(P0.O1).Thesizeandthestructureofthecardiacmuscularfibe

6、rintheshamoperationgroupwereevenandnorma1.ComparedwiththoseinYRgroup,degeneration,inflammato-ryinfiltrationandmitochondrialswellingwelfoundtobelessmarkedintheH/groupat240min.andfocallysisandnecrosiswerenotfound,whichwerefoundinI/Rgroup.ConelusiomHiShdensitylipoproteinhastheprotee-tioneffectonheartfu

7、nctionofischemia/repeffusionmyocardialinjuryinrats,themechanismisprobablybecausehighdensitylipoproteinearlinhibittheexpressionsofICAM-1inthemyocardialtissues.【Keywords】 ICAM-1;CK;theischemia-repeffusioninjury;myocardium研究表明,缺血再灌注后白细胞粘附和聚集于缺血组织的血管中,活化的中性粒细胞释放大量毒性物质如氧自由基及酶类物质,从而加剧了缺血再灌注的损伤.粘附分子是介导中性粒细

8、胞与血管内皮细胞粘附的分子基础,在缺血再灌注损伤过程中起着重要作用 J.目前,在心肌缺血再灌注损伤的防治研究中,抗细胞粘附分子疗法越来越受到关注.近年的研究发现,高密度脂蛋白(HDL)能显着减轻心肌缺血一再灌注损伤,但其机制尚不明确.HDL 是否通过调节细胞粘附分子表达,抑制中性粒细胞与血管内皮细胞粘附,从而减轻心肌缺血一再灌注损伤,尚未见报道.因此,本实验拟采用大鼠心肌缺血再灌注模型,观察各组不同时间点血清肌酸激酶(CK),细胞间黏附作者单位:300222 天津市第四医院烧伤整形科105?论着?分子.1(ICAM.1)的含量及心肌组织病理学变化.并对其相关机制作初步分析,为扩大 HDL 的临

9、床应用提供实验依据.1 材料与方法1.1 实验动物健康 sD 大鼠 42 只,体重(25030)g,购自天津医科大实验动物中心,雌雄不拘.1.2 动物模型制备及分组1.2.1 动物模型制备:实验大鼠以戊巴比妥钠腹腔麻醉 (45ms/ks),麻醉后固定于鼠台.经胸骨左缘 24 肋开胸,剪开心包,暴露心脏及左室表面血管,持续记录心电图和动脉血压,稳定 15min 后结扎左冠状动脉前降支,30min 后放开再灌注 3h_3,关闭胸腔.1.2.2 动物分组:假手术组(shamgroup,S 组,n=10),开胸后穿线做套环,但不收紧结扎线;缺血再灌注组(ischemie106 河北医药 2OO7 年

10、2 月第 29 卷第 2 期HebeiMedicalJournal,Feb2OO7.Vol29.No.2reperfusiongroup,IR 组,rg=16),收紧结扎线,造成缺血 30min,牵拉再灌注拉线使结扎线放松后行再灌注 180min;高密度脂蛋白一缺血预处理组(hdlischemlcpreconditioninggroup,H/ffC组,n=16),缺血前 10min 尾静脉注射 HDL30mg/ks.1.3 检测指标1.3.1CK,ICAM.1 检测:3 组大鼠缺血再灌注后,3o,60,120,240min 摘除眼球采血 2Hll 后立即置入加有 20EDTANaz 和 l0抑

11、肽酶的预冷离心管内充分混匀,4C 下 3500r/rain,离心 5min,吸取管内上清液密封后于一 20 低温冰箱保存待测.采用7180 型全自动生化分析仪(日本日立公司)分别检测 CK 的含量,参照试剂盒(北京中山生物技术有限公司)说明书操作; 采用酶联免疫吸附测定法检测 ICAM.1 的含量,参照试剂盒(深圳华美生物工程公司)说明书操作.1.3.2 组织病理学检查取 3 组大鼠缺血再灌注后 120min 心肌组织.部分采用甲醛固定,常规石蜡包埋,切片行 HE 染色,光镜下观察;另一部分用 3%戊二醛及 l%锇酸双固定,乙醇逐级脱水,环氧树脂 Epon812 包埋,切片,醋酸铀和枸橼酸铅双

12、染 ,于PhilipsEM400T 透射电镜下观察.1.4 统计学方法采用 SPSS10.0 软件处理,计量数据均以牙s 表示,采用方差分析,P0.05 为差异有统计学意义.2 结果2.1 各组大鼠血清中 CK,ICAM-1 含量的比较 H/IPC 组各时间点血清中 CK,ICAM.1 的含量均明显低于 IR 组(P0.01),S组上述指标明显低于 IR 组(P0.01),见表 l.表 1 各组大鼠血清中 cKU,L),ICAM-1 /L)含量比较 is注:与 S 组比较 ,P0.01H/II:E 组与 IR 组比较,P0.012.2 组织病理学观察光镜下观察:IR 组心肌细胞空泡变性 ,并见

13、灶性溶解坏死,血管扩张明显,大量炎性细胞浸润(图 la);H.IR 组心肌细胞部分颗粒变性,未见溶解坏死,炎性细胞浸润较明显减轻(图 lb).透射电镜下观察 :IR 组心肌纤维排列紊乱,部分断裂/溶解,线粒体明显肿胀,大小不均,电子密度低 ,嵴变短,于 j列零乱,细胞结构紊乱(图 2a);H/)c 组心肌纤维排列较整齐,电子密度稍低,嵴稍变短,线粒体轻度肿胀(图 2b).3 讨论缺血再灌注损伤是一种复杂的病理生理过程,其病因复杂,涉及多种因素.中性粒细胞与血管内皮细胞粘附是心肌缺血一再灌注损伤的一个早期和重要事件 J,其中主要由粘附分子 ICAM.1 介导 J.注:IR 组心肌细胞空泡变性,并

14、见灶性溶解坏死;H.IPC 心肌细胞部分颗粒变性,未见溶解坏死圈 12 组心肌组织的变化(HE100)注:IR 组心肌纤维排列紊乱,部分断裂/溶解,线粒体明显肿胀,嵴变短;H/IPC 组心肌纤维排列较整齐,线粒体轻度肿胀圈 22 组心肌组织的变化透射电镜(12000)本结果显示,IR 组大鼠 ICAM-1 含量显着增加,这与 Ichika.wa 等的报道一致 .H/ffC 组大鼠 ICAM.1 的含量显着降低.由于缺血再灌注后中性粒细胞与内皮细胞的黏附增强,中性粒细胞活化,导致机体出现失控性炎症反应,F_.IL-6 等炎症介质增多,其大量释放造成组织器官(如心脏/肝脏)的损伤,且TNF-ct

15、的释放增加还可以刺激 ICAM-1 的表达增强 ,从而加重心肌等重要器官损伤.本实验表明 HDL 可能通过抑制 TNF-ct直接或间接抑制 ICAM.1 的表达,由此阻断了缺血再灌注后的炎症反应进一步扩大,从而达到对心肌的保护作用.本结果显示,IR 组大鼠 CK 含量显着增加,以 120min 最为显着,光镜观察心肌细胞空泡变性,并见灶性溶解坏死,血管扩张明显,大量炎性细胞浸润,透射电镜观察线粒体明显肿胀,嵴变短.H.ffC 组大鼠心肌各时相点血清 CK 含量均显着低于 IR 组; 心肌细胞变性和炎性细胞浸润程度明显减轻.表明 HDL 预处理可对缺血再灌注后的大鼠心肌产生保护作用.本结果显示,

16、HDL 预处理后的缺血再灌注大鼠心肌 ICAM-l 的表达明显减少,表明 HDL 可以抑制 ICAMl 的表达 ;HDL 预处理后心肌组织病理学炎症变化减轻,从而表明经 HDL 预处理可对缺血再灌注后的大鼠心肌产生保护作用.由此得出结论:阿北医药 2OO7 年 2 月第 29 卷第 2 期 HebeiMedicalJournal,Feb2007,Vol29,No.2HDL 可以通过抑制 ICAM.1 的表达,从而对缺血再灌注大鼠心肌起保护作用.这为缺血再灌注损伤的防治提供了一些实验依据.但 HDL 抑制 ICAM.1 表达的分子机制,尚待进一步研究.参考文献1KirkpatrickUJ,Bla

17、nnAD,AdamsRA,eta1.Solubleadhesionmoleculesinclinicalischaemicinjury.IntJsurgInvestig,2000,2:151-158.2CeckerillGW,McDonaldMC,Mota-FilipeH,eta1.Highdensitylipoproteinsreduceorganinjuryandorgandysftmctioninaratmodelofhemorrhagicshock.FASEBJ,2001,15:1941.1952.3BemardoNL.DAngeloM,OkuboS.eta1.Delayedische

18、micpreconditioningismediatedbyopeningofATP-sensitivepotassiumchannelsintherabbitheart.AmJPhysiol,1999.276(4Pt2):H1323.H1330.1074BeUucciR,SalaR,DeProprisMS.eta1.Interferonalphaandbcr-ablantisenseoligodeoxynucleotidesincombinationenhancetlleantileukemiceffectandtheadherenceofCMLprogenitorstopreformeds

19、troma.LeukLymphoma.1999.35:471.481.5IchikawaH.FIOl-G:S,KvietysPR,eta1.Molecularmechanismsofanoxia/reoxygenationinducedneutrophiladherencetoculturedendothdialceils.CircRes.l997,8l:922-931.6IchikawaH,FIOl-G:S,KvietysPR,eta1.Molecularmechanismsofanoxia/reoxygenationinducedneutrophiladherencetoculturede

20、ndothelialceHs.CircRes.1997.8l:922.931.7LevineAJ,ParkesK.RoaneySJ,eta1.111eeffectofadhesionmoleculeblockadeonpulmonaryrepeffusioninjury.AnnThoraeSurg,2O02,73:ll0lll06.(收稿日期:20060512)大肠正常粘膜,腺瘤及癌组织中 VEGF 及其受体 Flk 一 1 表达的意义石艳华叶红关丽华申兴斌龚秀云王瑞婷【摘要】目的探讨血管内皮生长因子(VEGF) 其受体 Flk.1 在大肠癌发生中的作用.方法采用免疫组化技术检测正常大肠粘膜

21、15 例(NM 组),大肠腺瘤 27 例(Ad 组),大肠癌81 例(cc 组) 中 VEGF及其受体 Flk.1 的表达.结果从 NM 到 Ad 到 cc 组 VEGF 及其受体 Flk.1 的表达逐渐增高,增强组间均存在显着差异(P 均0.01).结论 VEGF 及其受体 f1l(.1 可作为大肠正常组织恶变的不良信号,检测VEGF 及其受体 Flk.1 可作为预测组织恶变的参考指标.【关键词】大肠癌;血管内皮生长因子;nk.1;免疫组化Thesignificanceof,1 阢 FIk-1expressioninIl0mlalnuc0sa,adenomaandcolorectalcarc

22、inomaSHIYanhua,YEHong,GUANIi.hua,eto1.ChengdeMedicalCollege,Hebei,Chengde067000【Abstract】ObjectiveToinvestigatethesignificanceofVEGFanditsreceptorFlk.1expressioninnormalmuco$a(NM),adenomaandcolorectalcarcinoma(CC).MethodsSPimmunohistochemicalstainingwasusedtoex.amineexpressionsofVEGF,Flk.1among15cas

23、esofNM,27casesofAdand81case8ofCCD雠曲 n.embeddedspecimens.RanksumtestwasusedtoanalyzetheexpressionsofVEGFandFlk.1.ResultsleexpressionofVEGFandnk-1fromNMtoAdtoCCappearedanupwardtendency.ThereweresignificantdirencesinVEGFandf1l(.1expressionbetweenthetwogroups(P0.01,P0.01).ConclusionsVEGF,Flk-1asbadsigni

24、ntheoc.cLIrlnceofCCcouldberegardedaspredictivefactorsofCC.【Keywords】 colorectalcarcinoma;1GF;nk-1;immtmohistochemistry大肠癌是消化道的一种常见肿瘤,近年其发病率有增高趋势.肿瘤的发生,发展有多种因素参与,其中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)通过促进新生血管形成等机制可能参与肿瘤的发生,发展.本试验以大肠的正常粘膜,腺瘤及大肠癌标本作为研究对象,用免疫组化 S-P 法检项目来源:承德市科技局资助项目(编号:2003101

25、8); 河北省科技厅指导性课题(编号:032761138)作者单位:067000 河北省承德市,承德医学院(石艳华 ,申兴斌,王瑞婷);承德医学院附属医院(叶红,关丽华,龚秀云)?论着?测 VEGF 的表达,探讨其在大肠癌发生,发展中的作用,同时检测其受体 Flk.1 表达,分析 VEGF 作用的可能机制.1 资料与方法1.1 一般资料收集承德医学院附属医院肿瘤外科 2001 年 9月至 2002 年 10 月手术切除的大肠癌(eolorectalcarcinoma,CC组)标本 81 例,同时选取大肠癌远端病理证实为正常粘膜(nor.malmucosa,NM 组)15 例,内镜咬检的大肠腺瘤(adenoma,Ad组)27 例 .兔抗人 VEGF 多克隆抗体,鼠抗人 Flk.1 单克隆抗体,sP(I(it-9r720)试剂盒均购自北京中山公司.1.2SP 免疫组化染色切片脱蜡入水 ,3rnl?L 甲醇过氧化

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