1、血液分析仪临床应用,客户技术服务部吴子权,第一部分 血液学基础,1.血液流经全身各脏器，是人体最大的循环系统； 2 .为全身提供氧气和营养成分； 3.带走二氧化碳和代谢产物 4.有动脉和静脉之分,血液成分,EDTA-K2抗凝血血浆55% 水 90% 养分 蛋白质 激素 细胞45% 红细胞 白细胞 血小板,红细胞,1.红细胞为双凹圆盘状； 2.内含血红蛋白； 3.为机体组织携带氧气和养分； 4.正常男性为：4.0-5.51012/L女性为：3.5-5.01012/L细胞膜有脆性，易破碎，因而溶血剂（表面活性剂）可溶解红细胞,血红蛋白,1.血红蛋白为红细胞内部结构，具有携带氧气的位点； 2.其功能
2、为携带氧气； 3. 当红细胞被溶解后，血红蛋白释放出； 4.正常人含量为：110-170 g/L血红蛋白有粘性，容易附着,血小板,血小板功能为参与止血 正常参考为：100-300 109/L血小板由于本身的功能特性，容易受到刺激后聚集，因而在临床检测中最容易受影响,血小板,白细胞,功能为抵抗机体免受感染 正常参考为：4-10109/L可分为5个亚群，各自行使独立的功能具有细胞核，,白细胞,白细胞亚群,1.中性粒细胞 2.淋巴细胞 3.单核细胞 4.嗜酸细胞 5.嗜碱细胞,1,2,3,4,5,库尔特原理,负压,血细胞 悬液,外电极,内电极,小孔,小孔管,小孔电流,样品杯,小孔近观,库尔特原理三要
3、素：小孔、负压、电极检测：细胞大小和数量,第二部分 血细胞直方图,在小孔计数时仪器获得细胞的数量和大小(体积)的信息,再进一步分类整理,得到在各种不同体积下相应的数量,反应在坐标上 坐标横轴表示细胞大小,以fl(飞升)为单位 坐标纵轴表示相应数量,三分类之白细胞直方图,红细胞直方图,典型的红细胞直方图上，可以看到两个细胞群体： 1细胞主群 从50 fL开始，两侧对称呈正态分布的曲线， 又称“主峰”2大细胞群 在主群右侧，又称“足趾部”，是一些红细胞二聚体、三聚体、多聚体的混合物。,血小板直方图（拟合曲线）,在血小板的直方图上可见两条曲线： 一条是 2fl-20fl 的原始数据曲线; 另一条是
4、0fl-70fl 的拟合曲线.,拟合曲线,血小板计数的干扰主要来自: 2 fl以下：噪音、电磁波的干扰 20 fl以上：裂红细胞;小红细胞;白细胞的干扰,拟合曲线作用,仪器根据测量得到的220 fL范围内血小板分布情况，按照对数正态分布规律得到070 fL范围血小板分布情况（正常人血小板绝大多数分布在220 fL 范围内）。如果拟合成功，血小板数量由拟合曲线下的面积换算得到，即070 fL范围的血小板数量； 如果拟合不成功，没有拟合曲线，血小板结果只报告220fL范围的血小板数量。通常情况下是低于实际数量的,血小板曲线不拟合的原因,1.血小板原始计数小于20 109/L； 2.血小板曲线不呈现
5、对数正态分布； 3. 血小板曲线的波峰不在3fL-15fL之间； 4.血小板PDW大于20% 5.三次计数中任何一次没有符合上述4点拟合条件,第三部分 血细胞五分类,库尔特VCS五分类技术V：体积分析C：细胞核型分析S：细胞内部颗粒分析,接近原态的白细胞分析,Scatter Pak双试剂系统的作用 E-lyse: 通过低渗作用溶解红细胞； S-lyse: 终止溶解作用，使白细胞恢复到接近原态,接近原态的WBC分析,接近原态的白细胞,进入流式通道,逐个、同时、直接的三维检测,NEDC Mean,细胞的三维定位,NEOP Mean,NE RLS Mean,细胞的三维定位,细胞的三维定位,三维空间的
6、多侧面表示-DF1 -体积(V),激光散射(S),嗜酸细胞,中性粒细胞,淋巴细胞,单核细胞,DF2 -体积(V),传导性(C),单核细胞,淋巴细胞,中性粒细胞 嗜酸细胞 嗜碱细胞,网织红细胞的检测,网织红细胞是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的不成熟红细胞,通常较成熟红细胞稍大,其胞质中尚残存部分嗜碱性物质(RNA,核糖体),经碱性染料染色后可见深染的网状结构,故名。 右图中标记A、B、C的细胞分别代表不同成熟度的网织红细胞的。,新亚甲蓝-VCS检测法,以经典的超活染料新亚甲蓝（NMB）着色网织红细胞内残存的RNA 漂洗红细胞内血红蛋白(酸性试剂) 用VCS三维技术，检测网织红细胞,网织红细胞
7、VCS三维散点图分析,网织红细胞检测注意点,使用抗凝血，样本采集后8小时内完成检测 加入染液（A液）后室温下作用5-60分钟 取2ul，加入2ml漂洗液（B液）后勿混匀，等待30秒钟 30秒钟一到，立即进样检测 网织红细胞检测的重复性不太理想（半自动）,第四部分 血细胞参数介绍,WBC、NE%、NE#、LY%、LY#、MO%、MO#、EO%、EO#、BA%、BA#； RBC、Hgb、Hct、MCV、MCH、MCHC、RDW PLT、MPV、PCT、PDW RET%、RET#、MRV、MI,白细胞系列参数,WBC：白细胞数量，正常人参考为4-10 109/L NE%：中性粒细胞百分比，正常参考为
8、50%-75% NE#：中性粒细胞绝对值 LY%：淋巴细胞百分比，正常参考为20%-40% LY#： 淋巴细胞绝对值 MO%：单核细胞百分比，正常参考为3%-10% MO#：单核细胞绝对值 EO%：嗜酸细胞百分比，正常参考为0.5%-5% EO#：嗜酸细胞绝对值 BA%：嗜碱细胞百分比，正常参考为0-2% BA#：嗜碱细胞绝对值,红细胞系列参数,RBC：红细胞数量，正常参考男性为4.0-5.5 1012/L正常参考女性为3.5-5.0 1012/L Hgb：外周血中血红蛋白浓度，正常参考为110-160 g/L Hct：血细胞压积，也可指红细胞压积，正常参考为0.35-0.50 MCV：平均红
9、细胞体积，正常参考为80-100 fL MCH：平均红细胞血红蛋白含量，指平均每个红细胞含的血红蛋白量，正常参考为27-34 pg MCHC：平均红细胞血红蛋白浓度，指红细胞中血红蛋白浓度，正常参考为320-360 g/L RDW：红细胞分布宽度，正常参考为11.5% - 15%,血小板系列参数,PLT：血小板数量，正常参考为100-300 109/L MPV：平均血小板体积，正常参考为6.5-12.5fL Pct：血小板压积，正常参考为0.108%-0.271% PDW：血小板分布宽度，正常参考为11 .5%-18%,网织红细胞系列参数,RET%：网织红细胞百分比，正常参考为0.5%-2.5
10、% RET#：网织红细胞绝对值 MRV：平均网织红细胞体积，正常参考为100-125fL MI：网织红细胞不成熟度，即不成熟网织红细胞占所有网织红细胞的比率，正常参考为0.2-0.4,第五部分 HMX常见的旗标和代码,旗标(数值后): R 结果需复核 *R 计数受干扰 H 结果高于参考范 围上限 L 结果低于参考 范围下限,代码(替代数值): - 三次计数比统一 不完全计算 + 结果超出操作范围 : 流式通道堵塞 ? 数据无效,白细胞计数值后出现 *R的临床意义,说明白细胞在35fl处的检测受到干扰. 在白细胞计数孔有35fl大小的颗粒通过并被当作白细胞计数,且超过一定数量,触发报警 在白细胞
11、直方图上看,曲线在35fl处上抬,正常情况,异常情况,导致 *R出现的可能原因,小白细胞 有核红细胞、抗溶红细胞 红细胞聚集,大血小板,血小板聚集 溶血剂输送系统故障,RDW后出现 R 的临床意义,红细胞计数时仪器计数 24fl 360fl的颗粒,绘出直方图,正常红细胞直方图应为两端封闭、单峰、呈高斯分布的曲线.RDW反应红细胞大小分布的偏离情况,其意义相当于 CV%(变异系数).,导致的原因： 输血 红细胞凝集 红细胞碎片 大血小板 血小板凝集成块 处理方法： 涂片镜检红细胞是否大小不一,PLT结果后出现 R旗标的 临床意义,仪器进行血小板计数时,计数 2fl 20fl的血小板数量,再拟合出
12、一条 0fl 70fl的曲线,目的是为了排除计数干扰.但条件不满足时仪器不能给出拟合曲线,这时候血小板数值后出现 R .,导致血小板后出现 R 的原因,小红细胞或红细胞碎片; 白细胞碎片; 大血小板,血小板凝集; 血小板大小不一(输血后); 电磁波或噪音干扰小孔计数,处理方法,1.手工涂片镜检,如发现小红细胞,细胞碎片等异常细胞,则手工计数血小板; 2.如果大血小板影响到白细胞或红细胞数值,重新复核; 3.如果出现卫星血小板,将标本以枸橼酸钠抗凝,检测血小板数值,但最终数值须乘以1.1(10%稀释比例).,+ 出现的临床意义,+ (代码) ：结果超出仪器的操作范围对白细胞而言计数值大于 99.
13、9109/L；对红细胞而言计数值大于7.001012/L ；对血小板而言计数值大于 999109/L. 处理方法： 用ISOTON III液稀释标本至线性范围内再测注: 1.先做一空白循环以防止携带污染2.不能报告白细胞分类结果 检查仪器稀释液和溶血剂输送系统有无故障,代码 - 出现的临床意义,- 出现代表三次计数不统一 可能导致的原因： 小孔堵塞或部分堵塞; 标本有凝块或丝状纤维蛋白; 白细胞聚集,红细胞凝集; 大血小板,血小板凝集; 标本稀释后未气泡混匀. 处理方法： 参照维修手册清洗小孔; 查看标本有无凝块,涂片镜检有无细胞聚集; 检测标本混匀系统.,代码 出现的临床意义, 出现表示数据
14、不完整,不完全计数通常当一个参数由于三次计数不统一或超过范围得不到确切数值时,其衍生参数后将出现 , 如WBC + ,则其衍生参数NE#、 LY #、 MO #、 EO #、 BA # 后将出现 , 也可表示吸样错误, 出现也可表示吸样错误,当发生吸样错误时,所有参数的结果后都会带有 导致的可能原因有： 样本有凝块,堵塞吸样针; 样本量不够; 样本的RBC和HGB浓度过低(严重贫血病人标本),血样探测器检测失败; 仪器吸样系统堵塞.,发生吸样错误的处理方法,1.查看样本有无凝块,如果有重取标本,没有则重新检测,再出现如上问题则涂片镜检有无凝块或细胞聚集; 2.检测标本量是否够; 3.对于严重贫
15、血病人样本采用手动进样方式. 4.检测仪器吸样系统,如发生堵塞则清洗.,代码 : 出现的临床意义,在白细胞五项分类及网织红细胞计数中,当流式通道堵塞产生 : 代码.在散点分布图上可有三种堵塞报警： - FC ,流式通道完全堵塞(无检测); - PC1 ,流式通道检测时间延长; - PC2 ,流式通道检测时间缩短.,导致 PC / : 的原因,- FC ：完全堵塞; - PC1 ：流式通道或标本通道部分堵塞导致分类时间延长; - PC2 ：红细胞未完全溶解导致分类时间缩短,或鞘液系统问题.临床上高胆固醇和高甘油三酯血症、血红蛋白病、药物治疗后、进行性肝病等都可导致 PC2.,出现PC / :的处
16、理方法,1.手工涂片进行白细胞分类; 2.用乳胶和 5C质控清洗流式通道; 3.查看ScatterPak液有否过期,检查 ScatterPak 液输送系统有无故障.,血常规样本的制备 抗凝剂的使用问题 长期放置对分类的影响 样本本身的干扰问题 检测温度的影响,第六部分 临床应用问题探讨,血常规样本的制备,静脉采血、并立即和抗凝剂充分混匀 抗凝剂浓度必须适宜 试管必须洁净，最好为一次性真空采血管 通常样本采集后24小时内完成常规检测 做网织红细胞检测必须在8小时内完成 样本必须室温下放置,抗凝剂的使用问题,抗凝剂推荐使用EDTA-K2或Na2 抗凝剂浓度为15g/dL，取20ul可抗凝1.5-2
17、.0ml静脉血 血细胞遇到抗凝剂会出现短时间的收缩，再逐渐平衡，恢复原来大小，通常这一时间为几分钟，极少数样本需要几十分钟 如果抗凝剂浓度过高，将使平衡时间延长，影响检测,样本长期静置对分类的影响,标本静立34小时以上 标本静立导致细胞分层，产生特殊微环境 重新混合后细胞需重建平衡，通常需要30分钟纠正的方法：间隔性混匀30分钟后再测,样本本身的干扰问题（I）,一.细胞聚集 红细胞聚集：常见于温度低时患者血样发生自身冷凝集，通常将血样37摄氏度温育15分钟后再检测，可消除 血小板聚集：常见于采血不顺利、抗凝不充分、试管质量差 二.低能量白细胞指衰老或生理异常白细胞，这些白细胞在经历E-lyse和S-lyse作用后通常不能或不能很快恢复到原态，影响分类,样本本身的干扰问题（II）,三.药物、激素影响的样本 如长期化学药物治疗、孕妇等四.一些特殊的不分类的样本 如肝病、慢性肾病、黄疸、新生儿等血样本，将不分类，并报警PC2 原因可能是红细胞表面负电荷增多，对S-lyse溶血剂具有抵抗作用，导致不分类并报PC2 处理方法：稀释后重新检测，取分类结果,检测温度的影响,低于20摄氏度时，仪器出现不分类 原因为低温影响溶血剂的作用处理方法： 提前开机预热 加热Pak试剂包,
