1、ASCO/CAP乳腺癌HER2检测指南 的学习体会和困惑,武汉协和医院病理科 聂秀,主要内容,IHC检测流程和判读标准,2007版,Arch Pathol Lab Med. 2007;131(1):18-43,IHC检测流程和判读标准,2013版,2007版：30%,Arch Pathol Lab Med. 2013 Oct 7. Epub ahead of print,主要内容,对肿瘤医生的推荐要点,必须要求对乳腺癌患者的每个浸润性原发灶和转移灶（若为期肿瘤，且可获得标本）进行HER2检测，以指导HER2靶向治疗的决策。,同组织病理学特征的不一致性,如果发现下述组织病理学特征， 初始HER2
2、检测结果为阳性，则应当要求新的HER2检测。,组织学1级的下列类型腺癌： 浸润性导管或小叶癌，ER和PgR阳性 小管癌（至少90%为纯小管癌） 粘液癌（至少90%为纯粘液癌） 筛状癌（至少90%为纯筛状癌） 腺样囊性癌（至少90%为纯腺样囊性癌）,Arch Pathol Lab Med. 2013 Oct 7. Epub ahead of print,对浸润性微乳头状癌判读3+不再强调完整的闭环膜染色至少判2+,即使存在异质性，只要扩增细胞连续、均质，且占浸润癌10%以上，就应明确报道为ISH阳性。,推荐：切片超过6周不再用于HER2检测,IHC检测流程和判读标准,2013版如因技术问题导致无
3、法将单一或双重检测（IHC和ISH）报告为阳性、阴性或不确定时，必须报告HER2检测结果为无法确定（indeterminate）。 情况可能包括： 样本处理不当 人为原因（人为挤压或边缘效应）导致判读困难 检测失败 应要求对另一样本进行检测以确定HER2状态 应在报告的备注中注明检测结果无法确定的原因。,Arch Pathol Lab Med. 2013 Oct 7. Epub ahead of print,主要内容,亮视野ISH检测,2013版指南：“可接受的（IHC和ISH）检测应优先使用FDA批准的IHC，亮视野ISH，或FISH检测” “在进行亮视野ISH检测时，首先必须与FDA批准的
4、FISH检验进行对比验证”“对于亮视野ISH，计数时应对正常乳腺细胞和肿瘤细胞中的着色模式进行比较，因为可能会观察到难以判读的人为原因造成的着色。如果肿瘤细胞的着色模式既非正常也非明显的扩增，应寻求专家意见。”,单探CISH,双探CISH,IHC+单探CISH,IHC+双探CISH,乳腺SISH,无扩增,扩增,胃SISH,无扩增,扩增,主要内容,对组织处理的要求,2007版：组织获取至固定的时间应尽可能短；用于HER2检测的标本应在10%中性缓冲福尔马林中固定6-48小时；细胞学标本必须固定在福尔马林中。 2013版：“应确保所有用于HER2检测的标本（细胞学标本、穿刺活检或切除标本）都尽快开
5、始固定流程（离体后在1小时内开始固定），并于10%中性缓冲福尔马林中固定6至72小时”,冷缺血时间：外科医师切除肿块到肿块进入固定液的时间。理想的时间应该少于30分钟。冷缺血时间直接影响蛋白、RNA、DNA等成分的降解速度，从而影响对这些成分的准确检测。 防止组织自溶,甲醛浸透组织的速度大约1mm/h,不是简单的化学固定反应，需要甲醛对蛋白和核酸进行交联。 固定时间至少6-8h，最好24h。 小组织需要与大组织同样的充分的固定时间。,固定不及时，组织自溶,形态无法观察,HE检测固定较差示例：乳腺癌,30,原发灶：固定较差会导致组织收缩、形态学发生改变，影响组织学的分级淋巴结转移灶,IHC检测固
6、定较差示例：乳腺癌,图片由 W Hanna提供,IHC检测固定较差示例,ki67,固定不佳，抗原丢失，假阴性,ISH检测固定较差示例：乳腺癌,图片由 Abbott/Vysis.提供,固定不完全会导致片状染色；探针信号可能较弱或缺失,胃肠道MDT病理科调查问卷反馈,1. 您在实际工作中使用的固定液类型为 A酒精 B.10%福尔马林 C.10%中性缓冲福尔马林 D.不清楚 E,其它_ (正确率：本院38%，进修学生25%） 2. 免疫组化或者分子标记物检测中推荐使用的固定液类型为_ A酒精 B.10%福尔马林 C.10%中性缓冲福尔马林 D.不清楚(正确率：本院38%，进修学生50%） 3. 您在
7、实际工作中，胃镜活检标本从离体到放入固定液的时间是_A_；手术标本从离体到放入固定液的时间是_B_ A. 10分钟之内 B. 30分钟之内 C.1个小时之内 D. 1个小时以上(正确率：本院49%、33%，进修学生58% 、33% 。） 4. 胃切除标本在放入固定液之前，您是否常规沿大弯剪开_ A. 是 B. 否 (正确率：本院49%，进修学生75%）,34,5 实际工作中，固定液和手术样本体积之比合适的为_ A. = =20:1 E.不清楚 (正确率：本院25%，进修学生50%） 6. 您认为标本固定不符合要求，可能对检测产生哪些影响（不定项选择）_ A. 影响很小或者无影响 B. 会导致H
8、E染色失败 C. 因为标本固定不及时，会导致组织自溶，丢失蛋白或者DNA分子标记物 D. 严重时会导致免疫组化或者分子诊断失败 E标本离体到固定时间，标本固定时间，固定液类型，固定液与标本体积大小的比例，都会影响标本固定效果 (正确率：本院29%，进修学生25%）,35,7. 您认为内镜活检标本的固定时间在那个时间段内最合适：_ A. 1小时之内 B.6个小时之内 C. 6-48小时 D.48个小时以上 E.不清楚 (正确率：本院13%，进修学生8%） 8. 您认为胃大部切除标本的固定时间在哪个时间段内最合适：_ A. 6小时之内 B.12个小时之内 C.12-48小时 D.48个小时以上 E
9、.不清楚 (正确率：本院21%，进修学生25%） 9. 内镜下粘膜切除（EMR）或内镜下粘膜下层切除（ESD）固定前最佳处理步骤是: A.直接放入固定容器中 B. 标本离体后，立即将标本展平，使粘膜的基底层面贴附在泡沫板上,并用大头针固定,必要时用生物色标标记基底及周边切缘 C.不清楚 (正确率：本院67%，进修学生83%）,36,武汉协和医院胃癌Her2检测结果分析,分析数据说明：来源：协和医院病理科报告系统内2013年6月7日-2014年3月7日 的胃癌Her2检测数据选用原则：外院送检的IHC组化和FISH检测病例都未纳入计算， 只计算本院病人数据，IHC和FISH、手术标本和活检标本、不同 科室来源的手术标本分别进行了统计目的：分析不同来源的样本对于Her2结果检测的影响,不同外科来源的手术标本检测结果对比分析,不同来源的手术标本IHC阳性率最高为11.43%，最低为0，不同科室区别较大 原因分析： 除综合外科以外，IHC3+ 以及2+的比率出现一致的走势，基本可以看出标本来源对于结果的影响， 建议结合平时工作中观察到的标本质量来考虑，是否阳性率低的科室标本固定更不规范,IHC数据分析与思考,结语,1、免疫组化质控工作任重道远，规范需要各科室各环节通力合作。病理科将MDT放在战略的高度加以重视。 2、质控需要病理科医生和技术员在平等理解的基础上通力协作,41,谢谢!,
