1、ICS 13.100C 52中华人民共和国国家职业卫生标准GBZ/T XXXXXXX尿中草甘膦的测定方法 气相色谱-质谱法Method for determination of glyphosate in urine gas chromatography-mass spectrometryXXXX - XX - XX 发布 XXXX - XX - XX 实施中 华 人 民 共 和 国 国 家 卫 生 健 康 委 员 会 发 布GBZ/T XXXXXXXI前 言根据中华人民共和国职业病防治法制定本标准。本标准按照GB/T 1.12009的规则起草。本标准主要起草单位：江苏省疾病预防控制中心、南京
2、市职业病防治院、山东省职业卫生与职业病防治研究院、扬州市疾病预防控制中心、镇江市疾病预防控制中心。本标准主要起草人：朱宝立、张锋、霍宗利、刘炘、潘丽萍、刘华良、周长美、张志虎、窦建瑞、姜方平。GBZ/T XXXXXXX1尿中草甘膦的测定方法 气相色谱质谱法1 范围本标准规定了职业接触尿样中草甘膦测定的气相色谱质谱法。本标准适用于职业接触人员尿样中草甘膦的测定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GBZ/T 295 职业人群生物监测方法总则3 尿中草甘膦气相色
3、谱质谱测定方法3.1 原理尿样中草甘膦用三氟乙酸酐（TFAA） 七氟丁醇（HFB）衍生化后，用氮气吹干，用柠檬醛乙酸乙酯溶液溶解残渣，以保留时间和定性离子定性，以草甘膦衍生物的定量离子与同位素内标衍生物定量离子峰面积比值定量。3.2 仪器3.2.1 具塞试管，10 mL。3.2.2 容量瓶，10 mL、100 mL、500 mL、1000 mL 。3.2.3 移液器，50 L、200 L、1000 L。3.2.4 电子天平（感量为 0.01 mg）。3.2.5 高速冷冻离心机（最大离心力 16162 g）。3.2.6 旋涡振荡仪。3.2.7 氮吹浓缩仪。3.2.8 恒温水浴锅，1。3.2.9
4、聚乙烯进样瓶（1.5 mL）、聚乙烯瓶（10 mL 、50 mL 等不同规格）、衍生瓶（4 mL）。3.2.10 尿比重计。GBZ/T XXXXXXX23.2.11 气相色谱-质谱联用仪（带四级杆质量分析器），配有电子轰击离子源（EI）和自动进样器。仪器操作参考条件如下：色谱条件a) 色谱柱：30 m0.25 mm0.25 m（5% 苯基）甲基聚硅氧烷质谱专用柱；b) 进样口温度：200 ；c) 升温程序：80 保持 1.5 min，以 30 /min 升至 260 ，保持 1 min，再以 30 /min 升至 300 ；d) 进样体积：2 L；e) 载气为高纯氦气（纯度99.999 %），
5、流速为 1.0 mL/min；质谱条件a） 离子源：EI 源（70 eV），温度：250 ；b） 接口温度：270 ；c） 调谐方式：用全氟三丁胺（PFTBA）在 m/z 350m/z 650 范围，对 m/z 414、 m/z 502、m/z 614 进行手动调谐，使 1.0 ng/mL 标准溶液的色谱信噪比 101；d） 选择离子监测方式：草甘膦衍生物的定性离子 m/z 611、m/z 612、m/z 584、m/z 460；e） 内标衍生物的定性离子 m/z 615、m/z 614；f） 草甘膦衍生物的定量离子 m/z 612，内标衍生物的定量离子 m/z 615。3.3 试剂3.3.1
6、 实验用水，去离子水，电导率18.2 M。3.3.2 草甘膦标准品。3.3.3 草甘膦同位素内标标准品。3.3.4 三氟乙酸酐（TFAA），纯度99%。3.3.5 七氟丁醇（HFB），纯度98% 。3.3.6 衍生化试剂： TFAAHFB（21，体积比），临用前配制，并于4 以下的低温冰箱中冷冻保存。使用时取 0.8 mL 加入 4 mL 衍生瓶中，加盖后放入40 以下的低温冰箱中冷冻 0.5 h，备用。3.3.7 乙酸乙酯，色谱纯。3.3.8 甲醇，色谱纯。3.3.9 盐酸，分析纯。3.3.10 柠檬醛，纯度95%。3.3.11 0.2 %柠檬醛乙酸乙酯溶液： 100mL 乙酸乙酯中加入 2
7、00 L 柠檬醛，混匀，避光冷藏。3.3.12 甲醇盐酸混合溶液：160 mL 水、2.7 mL 盐酸、40 mL 甲醇，混匀。GBZ/T XXXXXXX33.3.13 标准储备液：准确称取 10.00 mg 草甘膦标准品于聚乙烯塑料瓶中，用水溶解后，加2 滴盐酸，全部转移至 10 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，充分振摇混匀。配制成浓度为1.0 mg/mL 的标准储备溶液。3.3.14 标准应用液：将标准储备溶液用水分别稀释成 10.0 g/mL 和 100 g/mL 的标准应用液。草甘膦同位素内标使用水配置成 2.0 g/mL。3.4 样品的采集、运输和保存按 GBZ/T 295 要求采集
8、草甘膦接触工人班末尿样 50 mL 以上，测量比重后，冷藏（4 ）运输。样品 4 条件下可保存 3 d，20 条件下可保存 2 w。3.5 分析步骤3.5.1 标准曲线的配制和测定标准系列溶液：吸取不同的标准应用液，用水稀释成 0.0 g/mL2.0 g/mL 系列溶液。临用现配。取 0.7 mL 不同浓度的标准系列溶液，加入 0.1 mL 草甘膦同位素内标，0.2 mL甲醇盐酸混合溶液，涡旋 30 s 充分混匀，10000 r/min 离心 5 min 后，吸取 25 L 上清液在冰水浴条件下向预先准备好的衍生剂液面下缓慢加入，加盖小心混匀后于 90 恒温水浴中衍生 1 h（每 15 min
9、 小心振摇一次）。取出冷却至室温，用氮气吹干，并继续氮吹 0.5 h。加入 250 L 0.2%柠檬醛乙酸乙酯溶液溶解残渣，混匀后供 GCMS 分析。根据草甘膦衍生物定量离子峰面积与内标衍生物定量离子峰面积比值的均值与对应的溶液浓度（g/mL）计算回归方程。出现谱峰异常时应考虑重新配置。3.5.2 样品处理和测定将尿样放至室温，混匀。取 0.7 mL 尿样，加 0.1 mL 草甘膦同位素内标，其余操作同测定标准系列溶液的操作条件，测得的定量离子峰面积与内标峰面积比值由回归方程计算得样品中草甘膦的浓度（g/mL）。当样品中草甘膦浓度超过检测范围时应稀释后重新检测。在检测样品时，应同时做质控样品。
10、3.6 计算3.6.1 按式（1）计算尿样中草甘膦的浓度：(1)cF0式中：c0 尿样中草甘膦的浓度，单位为微克每毫升（g/mL） ；F 稀释倍数；c 测得的样品溶液中草甘膦浓度（减去样品空白） ，单位为微克每毫升（g/mL） 。3.6.2 为了校正尿液的稀释作用，将尿样中草甘膦的浓度用尿比重进行校正。校正公式见式（2）：(2)0.1201dcGBZ/T XXXXXXX4式中：c1比重校正后尿样中草甘膦的浓度，单位为微克每毫升（g/mL） ；c0尿样中草甘膦的浓度，单位为微克每毫升（g/mL） ；d尿液比重。3.7 说明3.7.1 本法最低检出浓度为 0.012 g /mL，定量下限为 0.040 g/mL；方法测定范围为 0.040 g/mL2.000 g /mL，在此范围内相关系数0.998；方法批内精密度相对标准偏差为6.2%7.9% ；方法批间精密度相对标准偏差范围为 7.2%8.4%；尿样加标回收率为85.4%101.8%。3.7.2 草甘膦代谢产物不干扰本法的测定。3.7.3 色谱分离图见图 1，草甘膦衍生物全扫描质谱图见图 2。说明：1氨基甲基膦酸衍生物；2草甘膦衍生物。图1 尿样中草甘膦及其代谢产物氨基甲基膦酸衍生物色谱分离图GBZ/T XXXXXXX5图2 草甘膦标准品衍生物全扫描质谱图
