1、STRPCR 分析嵌合体在同种异基因造血干细胞移植中的应用(1)作者：孙敬芬 韩晓苹 赵丹丹 汪菲菲 靳海杰 高春记 达万明 于力【摘要】 利用荧光标记的多重 PCR 扩增短串联重复序列结合毛细管电泳检测供者细胞嵌合率,以探讨该方法的连续检测对异基因造血干细胞移植后转归的预警作用，采集 27 例清髓性外周血干细胞移植患者移植前、移植后不同时段的外周血或骨髓，DNA 样本用 ProfilerPlus 和CofilerPlus 商品化试剂盒扩增后,用 ABI310 遗传分析仪进行毛细管电泳,确定基因位点及峰面积,根据基因型的差异选择嵌合率计算公式。结果表明：两种试剂盒测得的 DC 嵌合率一致;在
2、27 对中能区别出供受差别的 STR 位点，ProfilerPlus 为个,CofilerPlus 为个。26 例患者均在移植后 28 天出现供者细胞，1 例患者未出现供者细胞。14 例患者 DC100%,均获得持久植入,至今仍无白血病生存；另有 9例患者出现不稳定混合嵌合状态,其中 5 例为血液学复发。27 例病人中有 6 例死亡。上述 5 例复发患者均在出现临床症状前发生 DC 量下降;供者细胞完全嵌合组移植物抗宿主病的发生率高于 MC 组。结论：动态检测 DC 可用于移植动力学研究,对移植物早期植入或被排斥、疾病复发以及 GVHD的发生均有预警作用,对早期实施临床干预治疗有重要的指导意义
3、。【关键词】同种异基因造血干细胞移植；STRPCR; 毛细管电泳;嵌合体ApplicationofChimerismAnalysistoAllogeneicHematopoieticStemCellTransplantationbySTRPCRAbstractTheaimofthisstudywastoanalyzechimerism,evaluatethestatusofengraftmentandpredicttheoutcomeofallogeneichematopoieticstemcelltransplantationbymultipleshorttandemrepeatamplif
4、icationusingfluorescencelabelingpolymerasechainreactioncombinedwithcapillaryelectrophoresis.Peripheralbloodandbonemarrowin27patientswhoreceivedmyeloablativeallogeneticcelltransplantationwerecollectedbeforeandaftertransplantationindifferenttimes.10and7differentSTRmarkerswerecoamplifiedinasinglereacti
5、onbyusingacommercialAmpF/STRProfilerPlus/CofilerplusPCRamplificationkits.SeparationofthePCRproductsandfluorescencedetectionwereperformedbyABIprism310GeneticAnalyzerwithcapillaryelectrophoresis.TheGenescanandGenotypesoftwarewereusedforsizecallingandquantificationofpeakareas.Theformulatocalculatedonor
6、chimerismvalueswasbasedonthedifferentallelicdistributiontypebetweendonorandrecipient.Theresultsshowedthatdonorchimerismwassimilarbythetwomethods.ThemediannumberofinformativealleleswasbyProfilerPlusandbyCofilerPlus.Thedonorallelesappearedin26patientsonday28posttransplantation.Onepatientwasnotobserved
7、toappeardonoralleles.14patientswith100%donorchimerismhadstableengraftmentandtheystillsurviveinfreeleukemia.9patientshadunstablemixedchimerism,and5ofthemrelapsedafteralloHSCT,6patientsdied.Decreaseofdonorchimerismappearedpriortograftrejectionanddiseaserelapse.TheincidenceofGVHDwashigheringroupoffulld
8、onorchimerism.ItisconcludedthatdynamicmonitoringdonorchimerismbySTRPCRincombinationwithallautocapillaryelectrophoresisisavaluabletoolforpredictinggraftrejection,diseaserelapseandoccurrenceofGVHD,andprovidesabasisforearlyclinicalinterventioninthepatientsreceivedalloHSCT.Keywordsallogeneichematopoieti
9、cstemcelltransplantation;STRPCR;capillaryelectrophoresis;chimerismJExpHematolXX;15:337-341同种异基因造血干细胞移植是治疗恶性血液病和免疫缺陷性疾病的有效手段之一,移植成功与否与供者细胞在受者体内的植入情况,即嵌合体的形成有关。供者细胞嵌合率的下降与移植物排斥及本病复发密切相关1,因此移植后动态检测嵌合状态对判断移植效果、实施临床早期干预治疗尤为重要2 。目前，嵌合体的监测已成为同种异基因造血干细胞移植术后患者的常规检测项目，检测方法已由传统的细胞学和遗传学方法发展到分子生物学方法，其中荧光标记的多重 PC
10、R 扩增 STR 位点结合全自动毛细管电泳方法敏感性高,重复性好,简单高效,已成为目前国际骨髓移植登记处推荐的检测供受嵌合状态的金标准。我们用上述方法对 27 例 alloSCT 患者嵌合状态进行了连续动态检测。一般资料27 例病人为 XX 年 10 月-XX 年 7 月在中国人民解放军总医院血液科及其附属 304 医院血液科接受 alloHSCT 的患者,其中急性髓系白血病 8 例,急性淋巴细胞白血病 2 例,慢性粒细胞白血病 11 例,急性非淋巴细胞白血病 2 例，再生障碍性贫血 2 例，类小细胞肺癌 1 例，骨髓增生异常综合征 1 例。27 例中接受同胞供者外周血干细胞移植者 22 例,
11、接受无亲缘关系供者外周血干细胞移植者 5 例。男 22 例,女5 例,中位年龄岁。供受者性别相合 19 例,性别不合 8 例，20 例同胞供者 HLA 均相合;2 例为父母给子女 HLA 单倍相合供者；非亲缘供者 HLA 相合 4 例,HLA 不相合 1 例。样本采集术前采集供者和受者外周血或骨髓,术后 28 天采集受者骨髓,术后 3 个月内每月 1 次采集骨髓,此后每 3 个月 1次采集受者骨髓，部分复发者每 2 周采集 1 次骨髓或外周血，肝素抗凝,4保存。试剂和仪器DNA 抽提选用美国 Promega 公司 DNAPurificationkit试剂盒,PCR 扩增试剂盒为美国应用生物系统
12、公司AmpF/PSTRProfilerplus 和 CofilerPlus 商品化试剂盒,选择D3S1358、vWA、FGA、D8S1179、D21S11、D18S51、D5S818、D13S317、D7S8209 个基因位点和 1 个性别位点及D3S1358、D16S539、TH01、TPOX、CSF1PO、D7S820 和 1 个性别位点所对应的荧光标记的特异性引物同时进行复合扩增,基因位点特异性同文献3 。内标 Rox500 及等位基因梯 Ladder 购自 ABI 公司,去离子甲烯胺购自 Promega 公司。主要仪器有 ABI 公司 2400PCR 扩增仪和 prism310 遗传分析仪,Amersham 公司的 GeneQuantpro 紫外分光光度计。（作者：3COME 未知本文来源于爬虫自动抓取，如有侵犯权益请联系 service立即删除）
