1、,白喉杆菌 结核杆菌 芽胞杆菌,2018/9/2,2,实验目的：,通过感性认识，加深对白喉杆菌、结核杆菌、芽胞杆菌生物学性状的印象和记忆。通过实验掌握两种染色法。,一、白喉杆菌,白喉杆菌（C. diphtheriae）是棒状杆菌属中致病性最强的细菌，是白喉（diphtheria）的病原菌。 白喉杆菌在患者鼻、咽、喉等部位繁殖并产生强烈外毒素，引起感染局部形成假膜和全身中毒症状。,白喉杆菌实验内容：,（一） 观察白喉杆菌的形态（阿尔伯染色)（二）观察白喉杆菌在吕氏血清斜面上和亚碲酸钾培养基上的生长情况 （示教）（三）观察白喉杆菌毒力试验（示教）,实验材料：,阿尔伯（Albert）染色 材料： 接
2、种环、酒精灯、生理盐水 玻片 1片/人 白喉杆菌的吕氏血清斜面培养物 1支/2人 阿尔伯染色液 1套/2人 染色缸，染色架，胶瓶 1套/2人 吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸,（一）阿尔伯（Albert）染色实验方法：,步骤 涂片干燥固定 阿尔伯“甲液”染7-10分钟后水洗 阿尔伯“乙液”染1分钟后水洗 （将观察结果绘图）,2018/9/2,7,（二）观察白喉杆菌的生长情况 （示教）,亚碲酸钾培养基,吕氏血清斜面亚碲酸钾培养基,吕氏血清斜面,（三）观察白喉杆菌毒力试验（示教）,平板毒力试验（Elek平碟法）白喉外毒素 原理：毒素抗毒素中和(双向琼脂扩散),2018/9/2,10,白喉杆菌毒力试验
3、（Elek平碟法）,二、结核杆菌,（一）抗酸染色法 (复染法) （二）观察结核杆菌在罗氏培养基上的生长情况（示教）,抗酸染色法原理,抗酸性菌体内含脂类物质较多，如结核杆菌（脂质占菌体干重的2040%，占胞壁干重的60%）体内含有分枝菌酸（脂类），此物质具有抗酸的性质。染色时，它与石炭酸复红结合牢固，能抵抗酸性酒精的脱色作用，同时脂类又不易透过细胞膜，不能被脱色，因此抗酸菌能保持复红的颜色。相反，非抗酸性菌体内含脂类少，易被酸性酒精脱色，脱色时又易从细胞膜渗出而脱掉，最后被复染成蓝色。,（一）抗酸染色法 (复染法),步骤： 取痰涂片1片 固定 石炭酸复红染710分钟后水洗 3%盐酸酒精脱色35秒
4、，重复3次，然后水洗 碱性美蓝复染2分钟后水洗 自干或用吸水纸吸干，然后在油镜下观察结核杆菌的形态、排列及染色性。 （将观察结果绘图）,（二）观察结核杆菌在罗氏培养基上的生长情况（示教）,三、芽胞杆菌 (G+),（一）观察炭疽杆菌的形态和菌落特点（示教）（二）观察产气荚膜杆菌的形态和生长特点 （示教）,（一）观察炭疽杆菌的形态和菌落特点（示教）,形态： 致病菌中最大的细菌 菌体粗大，两端平截或凹陷。 竹节状排列 革兰氏染色阳性 芽胞 荚膜,2018/9/2,17,炭疽杆菌,2.观察炭疽杆菌在血平碟上的生长,专性需氧，灰白色粗糙菌落，边缘呈卷发状，周围无溶血环，（细菌有致病性）。 与枯草杆菌对比
5、（示教）. 对比观察枯草杆菌在血培养基上的生长情况： 专性需氧，菌落周围有溶血环，（细菌无致病能力）。,（二）观察产气荚膜杆菌的形态和生长特点 （示教）,形态 (复习)生长特点 汹涌发酵现象,1.观察产气荚膜杆菌的形态结构,是G+大杆菌，菌体粗大，两端钝圆,散在排列。芽胞呈卵圆形，芽胞宽度不比菌体大，位于中央或末次端。培养时芽胞少见，须在无糖培养基中才能生成芽胞。位于菌体中央或近极端。菌体周围可形成荚膜。,汹涌发酵现象在牛乳培养基中分解乳糖，产酸使酪蛋白凝固；产生大量气体，将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，甚至冲开管口棉塞，气势汹猛。,2018/9/2,22,1、显微镜（油镜）的使用和保护方法（1）提
6、供一张细菌玻片标本，要求能正确使用油镜观察到细菌的基本形态；（2）掌握显微镜（油镜）的保护方法 2、血清对倍稀释法（1）用生理盐水将血清进行对倍稀释，终浓度达到1/2，1/4,1/8三个稀释度；（2）掌握血清对倍稀释的原理和方法，能正确使用刻度吸管。 3、玻片凝集试验（1）要求用伤寒诊断血清，采用玻片凝集试验的方法检测待检细菌是否为伤寒杆菌；（2）要求操作方法、步骤正确，能准确判断结果；（3）无菌操作正确。 4 、革兰染色法（1）口试回答细菌涂片的制作方法；（2）将一张已涂好的细菌玻片进行革兰氏染色；（3）要求染色步骤及各项染色时间正确，操作熟练。 5、细菌划线分离培养技术（1) 将细菌分区划
7、线到普通琼脂平碟上（2）要求划线分区正确，接种划线手法正确、熟练（3）无菌操作正确 6、液体培养基的细菌接种方法（无菌操作）（1）将菌种接种到液体培养基内（2）要求各环节无菌操作正确 7、细菌在培养基中生长情况及细菌特殊结构的观察（1）正确描述固体培养基的菌落、菌苔（2）正确描述半固体、液体培养基中的细菌生长情况（3）正确观察出镜下细菌的特殊结构 8、抗酸染色（1）正确回答抗酸染色的各个步骤（包括用加热法或不加热法、初染时间）（2）操作技术手法正确熟练（3）脱色程度控制较好,微生物学与免疫学实验考核办法,考核方式：按学号顺序逐一进场应考。考核内容共8项，每位同学通过抽签考其中一项。 考核时间：每人限6分钟内完成。 考核地点：微免实验课上课的实验室,2018/9/2,23,学号为单数：抗原漂移；隐性感染 简述乙型肝炎病毒的传染源、传播途径及致病机制。学号为双数：抗原转换 ； Virus 简述HIV的传染源、传播途径及防治原则。,
