1、“基因工程原理”习题1试述生命科学理论与技术的研究对基因工程产生的意义2基因工程的研究内容是什么？3简要归纳基因工程的应用成果4我国有关基因工程安全性方面的主要政策和法规有哪些？5总结归纳凝胶电泳、PCR 和分子杂交的原理6叙述 Southern Blotting 的过程7概述 PCR 反应系统中引物的设计原则8设计实验方案使 PCR 技术和凝胶电泳，分子杂交和凝胶电泳技术同时得到应用。(PCR 产物做凝胶电泳，Southern Blotting)9简述双脱氧法测序的原理。10简述化学法测序的原理。(复习课件内容)11理想的质粒载体的条件有哪些？构建质粒载体的基本原则是什么？ 12质粒的分类有
2、那几类方法？13 构建一个含有的 Kanr、Amp r 松弛型复制子的质粒载体，请写出构建的基本流程。(参照 P71 pBR322 的构建 )14. 质粒载体、噬菌体载体、Cosmid 载体、人工染色体载体组成如何？各有何优缺点？试加以比较。 （ori, 抗生素抗性基因，MCS; cos, ori, 抗生素抗性基因，MCS；P94。主要从能承载的外源 DNA 片段的大小来考虑）15热激法质粒转化大肠杆菌的原理是什么？16碱变性法提取质粒 DNA 的原理是什么？氯化铯密度梯度离心提取质粒的原理是什么？(参见课件 和教材和教材 )17由水稻中得到一含有目的基因的 DNA 片段，若将目的基因与载体进
3、行体外重组，如何降低非重组的高背景？ 18如何将内部没有 HindIII 和 EcoRI 位点的外源 DNA 片段定向克隆在 pUC18 质粒载体上并将其导入大肠杆菌中扩增？(用 HindIII 和 EcoRI 双酶切外源 DNA 和载体后做连接反应)19 理想的探针应具备的条件有哪些？20比较菌落原位杂交法和放射性抗体检测法各自的特点21总结归纳菌落（噬菌斑）原位杂交、免疫学方法筛选、结构分析筛选、转译筛选法检测基因克隆的适用范围和应用条件。22简述 DNA 分子克隆的基本过程23基因克隆时为什么要设置阴性对照和阳性对照？如何设置？24. 试比较基因组文库和 cDNA 文库的异同点。 25.
4、 如何构建基因组文库和 cDNA 文库？26. 筛选目的基因有哪几种主要方法，每种方法的原理是什么？27已知拟南芥基因组中有一 RFLP 分子标记与目的基因很近，大约 360kb。请设计实验克隆该基因。(参考染色体步移或着陆法设计实验)28已知 NO3-转运蛋白是一个基因家族，其中编码区有高度保守的氨基酸序列，现有水稻的 NO3-转运蛋白基因，请设计实验方案从玉米中克隆同源 NO3-转运蛋白基因。29在重金属 Hg 或 Cd 的胁迫诱导条件下，菜豆的有些基因会特异表达，请设计设计实验方案克隆菜豆的重金属应答基因。 （分别提取用重金属 Hg 或 Cd 胁迫诱导和不处理的菜豆提取 mRNA，利用
5、mRNA 差异显示技术克隆重金属应答基因）30在大肠杆菌细胞中克隆基因的表达产物有几种存在形式？ 31影响克隆基因表达的因素有哪些？32什么是基因座控制区和基质附着区？它们有什么研究价值？33大肠杆菌基因表达系统有什么特点？34常用的大肠杆菌表达系统有哪些？分别有什么特点？ 35如何提高克隆基因在大肠杆菌表达系统中的表达效率？36酵母表达系统的组成如何？37酵母表达系统有哪几类？它的应用前景怎样？38什么是基因沉默？基因沉默的机制如何？基因沉默的模式有哪些？39 利用原核细胞表达真核基因获得蛋白产物利用原核细胞表达真核基因获得蛋白产物通常要满足那些条件？40 影响基因表达的因素影响基因表达的因素有哪些？41 大肠杆菌高效表达外源基因的策略有哪些？大肠杆菌高效表达外源基因的策略有哪些？42 提高目标基因提高目标基因 mRNA 和目标基因蛋白产物稳定性的主要措施有哪些？有何局限性？和目标基因蛋白产物稳定性的主要措施有哪些？有何局限性？43克隆基因表达的目的是什么？克隆基因表达的目的是什么？44克隆基因的表达产物不溶性包涵体和可溶性蛋白各有何优缺点？克隆基因的表达产物不溶性包涵体和可溶性蛋白各有何优缺点？45目标蛋白分泌到周质空间有何优点？目标蛋白分泌到周质空间有何优点？46论述目标蛋白的细胞内加工和定位。论述目标蛋白的细胞内加工和定位。
