1、 中国汉族原发性闭角型青光眼大家系临床资料总结及 T【摘要】 目的 总结一中国汉族原发性闭角型青光眼大家系临床表型特点及遗传模式，并筛查在该家系成员中是否存在 TIGR/MYOC基因第三外显子突变。方法 对该家系家庭成员进行眼科检查，包括视力、屈光检查、Goldmann 压平眼压计测量眼压、房角镜检查、自动视野检查以及眼球 A 超检查。应用聚合酶链反应（PCR）扩增 22名家系成员 TIGR 基因第三外显子，并对 PCR 产物进行测序分析。结果 原发性闭角型青光眼在此家族中呈常染色体显性遗传模式，其临床表型为慢性闭角型青光眼。与第 6 代成员相比，第 4 代及第 5代成员的眼轴及前房较短，晶状
2、体较厚。第 4 代成员的平均屈光状态为远视，第 5 代为正视，第 6 代为近视，但第 6 代中仍有一名成员为远视。家族的 22 名成员中未检测到 TIGR 基因第三外显子突变或单核苷酸多态性（SNP）。结论 在此中国汉族常染色体显性遗传原发性闭角型青光眼大家系中排除了 TIGR 基因第三外显子突变与青光眼发病之间的关系。 【关键词】 原发性闭角型青光眼 家系 TIGR 基因 中国人 Abstract: Objective To identify the hereditary mode and clinical features of the disease in a Chinese prima
3、ry angle closure glaua (PACG) pedigree of the Han nationality and to screen the existence of exon 3 mutation of TIGR genes in this family. Methods A Chinese 7-generation PACG pedigree ologic examinations consisted of evaluation of visual acuity, refraction, Goldmann applanation tonometry, gonioscopy
4、, automatic visual field test and A ultrasonography. The coding sequence of exon 3 of the TIGR gene ily members by polymerase chain reaction (PCR) using genomic DNA, folloal dominant pattern of inheritance of PACG. The clinical features of PACG in this pedigree can be classified as chronic angle clo
5、sure glaua. Relatively shorter axial length and anterior chamber depth ean refraction status changed from hyperopic in generation to emmetropia in generation , ean refraction status yopic, but still, there ember in generation utation nor SNP in exon 3 of the TIGR gene utation in exon 3 of the TIGR g
6、ene in the pathogenesis of PACG inherited al dominant pattern in this Chinese pedigree. Key ary angle closure glaua; pedigree; TIGR gene; Chinese 在原发性闭角型青光眼患者及其家属中常可观察到眼前段结构的拥挤现象。在因纽特人中，原发性闭角型青光眼患者的一级亲属发病率比一般人群高 3.5 倍1，中国原发性闭角型青光眼患者的家族成员发病率则比一般人群高 6 倍2。T rnquist3在 1953 年首先提出存在一个原发性闭角型青光眼显性基因，但至今为止仍未
7、发现原发性闭角型青光眼疾病基因或与之相关的候选基因位点。有关原发性开角型青光眼的分子遗传学研究则已明确了 15 个与开角型青光眼相关的基因位点，此外还有 7 个与其他类型青光眼致病相关的疾病基因也得到确认4。其中小梁网糖皮质激素诱导反应蛋白（TIGR）基因，也称为 MYOC 基因。TIGR 基因是目前为止研究最多的原发性开角型青光眼疾病基因5，在白人、亚裔人及非洲裔人中均发现了致病碱基改变，其中 3%5% 的成年性开角型青光眼患者存在该基因突变，而在青少年性开角型青光眼患者中其突变率为 8%36%。目前已报道的突变基因有 70 个，绝大部分致病突变基因位于第三外显子区域，与青少年性青光眼相关的
8、突变基因则全部位于第三外显子与嗅球蛋白高度同源的片段6-8。 在近年来针对加拿大青光眼人群的基因型及表现型的研究中，发现在原发性闭角型青光眼患者中亦存在 TIGR 基因突变，Pro481Leu、 Glu368STOP、Gly399Val 均位于第三外显子区域，证明原发性闭角型青光眼患者也可携带 TIGR 基因突变。我们从 2004 年开始对一个连续 7 代患有原发性闭角型青光眼的家系进行了定期随访，我们认为在进行其他候选基因筛查及全基因组扫描前有必要首先筛查 TIGR 基因第三外显子，从基因学上确认所研究的家系属原发性闭角型青光眼家系。 1 资料和方法 1.1 一般资料 该原发性闭角型青光眼家
9、系成员大部分居住于中国南部偏僻山区农村，该家族所有成员均为汉族且无近亲结婚史。家族中 22 名成员纳入本研究并在北京大学深圳医院眼科接受检查。所有参与此项研究的患者均签署了知情同意书，研究计划亦通过了医院道德委员会审批。 1.2 家系研究方法 眼科检查包括：视力及校正视力，屈光状态，眼前节裂隙灯显微镜检查，Goldmann 压平眼压计测眼压，房角镜检查，眼底检查（90 D 前置镜及检眼镜检查），自动视野计检查（Humphery field analyzer）,A 型超声检查（Alcon Biophysic, OcuScan, Version 3.02）。所有家系成员（1 因只有 5 岁故未接受
10、检查）均接受以上检查，家系成员的疾病诊断及排除均由 2 名青光眼专业医师确认。其他信息如既往眼压及降眼压治疗或其他治疗、激光手术或其他抗青光眼手术史等也一并记录于档案中。 1.3 原发性闭角型青光眼诊断标准 青光眼性视盘改变，存在盘沿组织的缺失；青光眼性视野改变，且与盘沿组织缺失相一致；动态房角镜检查见房角关闭。对于存在上述诊断标准第 3 条但未见青光眼性视盘及视野改变的诊断为可疑原发性闭角型青光眼。已死亡患者的诊断根据其病史及手术记录。家系成员的精神疾病诊断依据其病史。 1.4 实验方法 抽取 2 名家系成员外周静脉血，采用 TIANamp Genomic DNA Kit(北京天根生物有限公
11、司) 从 300 l 全血中抽提基因组 DNA，采用 PCR 方法扩增涵盖 TIGR 基因第三外显子的 927 bp 的片断，正向及反向引物分别为:5-GCTGTCACATCTACTGGCTC-3和 5-ATCTCCTTCTGCCATTGCCT-3。 反应体系为 50 l，其中包括100 ng 基因组 DNA，5 l 10pfu 缓冲剂，4 l 25 mol/L Mg2+，1.2 l 10 mol/L 引物，1 l 10 mmol/L dNTP，及 1.25 U pfu DNA 聚合酶(MBI，Lithuania)。PCR 反应程序为： 95变性 2 min；随后 35 个循环，包括 95变性
12、 30 s，55退火 30 s，72延伸 2 min；最后 72延伸 5 min 完成全部过程。 PCR 产物长度为927 bp，以 1.5%琼脂糖凝胶电泳进行产物分析，以紫外线凝胶照相系统（BIO-RAD 公司）记录结果。只有结果显示无非特异性扩增的产物在进一步纯化（DNA Gel Extraction Kit，上海晶泰生物技术有限公司)后进行 DNA 双向测序。 双向测序所使用的引物为 5-ACTGGCTCTGCCAAGCTTCC-3及 5-GCTGAATACCGAGACAGTGA-3, 使用仪器为 Applied Biosystems 3730 DNA Analyzer (ABI 公司)
13、 ，并使用其附带软件Sequencing Analysis Soft DH, Goh LG, Ho T. Glaua pattern amongst the elderly Chinese in Singapore J . Ann Acad Med Singapore,1998,27(6):819-823. 2 ary angle-closure glaua J. Chin J Ophthalmol,1985,21(2):95-101. 3 T rnquist R. Shallober in acute angle-closure glaua: a clinical and geic stud
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