1、環境微生物實驗濾膜過濾法(MF 試驗法)組長: 蔡傑舟 4980N020組員: 李俊澄 4980N052陳凱傑 4980N075黃瑋晟 4980N031指導老師:曹俊文一、目的: 熟知濾膜法檢測之原理及判斷方法。二、原理與冗長的多管發酵法實驗過程比較，以濾膜法測定大腸菌類顯得簡單多。主要原因是將水樣經由抽氣幫浦真空抽氣，使其通過孔徑0.450.02m、直徑為47mm之無菌濾膜，大腸桿菌類因無法濾過而留置於濾膜上。接著將以過濾的濾膜置於吸滿乳糖培養液或 Laury1 tryptose培養液之飽和吸收墊上，在攝氏350.5恆溫下培養1.52小時，接著取出濾膜移至E-Endoagar培養基或M-En
2、do培養液之飽和吸收墊上，攝氏350.5恆溫下培養2224小時。培養過程中，大腸桿菌類會分解乳糖，產生氣體和醛類，醛類會與培養基（液）中的鹼性洋紅染料結合，在光線反射下，呈現綠色金屬光澤的菌落，數據計算大腸桿菌類的數目。所有缺乏金屬光澤的菌落，均判定為非大腸桿菌群。 通常濾膜上總菌數在200 以下，且大腸菌數2030 個時最適宜計數，若總菌數超過200 個時，可將水樣進行稀釋後再進行實驗；令檢驗濁度較高或已知有大腸菌類的水樣時，則可利用較小體積的水樣來進行過濾。 適用範圍:本方法適用於地面水體、地下水體、廢水、污水及海域水質及水源水質水樣中大腸桿菌群之檢測。三、實驗材料及儀器1.塑膠培養皿 2
3、.無菌濾膜 3.玻璃吸管 4.吸球 5.稱藥紙 6.稱藥勺 7.鑷子 8.培養液 9.錐形瓶 10.燒杯 11.酒精12. M-Endo agar 13.崑山湖水樣儀器: 1.電子天平 2.電磁加熱攪拌器 3.恆溫培養箱 4.過濾抽氣裝置四、實驗步驟1.熟知濾膜法檢測之原理及判斷方法。 2.使用之培養基為M-Endo agar配置方法為1000ml加入51g M-Endo agar及20ml 95%酒精，現僅需要30ml水，因此 M-Endo agar 51/1000=X/30 95%酒精20/1000=Y/30。 3.放入磁石，放入電磁加熱攪拌器上加熱，蓋子不得鎖緊，外圍以紙箱圍住作為隔離。
4、 4.隨時注意加熱情況，一有沸騰現象，要立即將瓶子由加熱器上移除，記得戴上隔熱手套進行。 5.到入空的小培養皿中，每個約45ml共六個，等待培養基凝固。 6.紀錄水樣來源。 7.以連續10倍稀釋，由原液取出11ml加入另一個100ml的培養液混合均勻，再取11ml加入另一個100ml培養液，依此推斷置10-5倍，因此水樣有6個濃度，各100ml，分別為原液、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5倍。 8.取0.45um孔徑之濾膜置於真空抽氣幫浦上，將水樣過濾。 9.過濾完後，將濾膜取出平鋪於凝固的 M-Endo agar 培養基上，標示清楚。10.隔天看結果(一般將吸收墊置於無菌塑膠
5、培養皿。 進行M-Endo培養液或M-Endo培養基的配置。 用已滅菌且過火之玻璃吸管分別吸取2ml M-Endo培養液 (基)滴至吸收墊上。 取一張無菌濾膜放入過濾裝置中，並打開過濾裝置開關。 先以少量無菌稀釋水將濾膜淋洗濕潤，再以2030ml無菌 稀釋水重複三次淋洗過濾漏斗。將濾膜置於吸收墊上。 完成後將培養皿置於351度C培養242小時後取出觀察與計數。 由實驗結果判定大腸菌類之生長。由於培養過程中大腸菌類會分解乳糖，產生氣體和醛類，而醛類會與培養基（液）中的鹼性洋紅染料結合，在陽光反射下，呈綠色金屬光澤菌落，如果不是大腸桿菌將不會出現這種顏色。六、心得瑋晟:這次實驗步驟沒什麼困難的，不
6、過隔天出來的數據令人失望，6 個培養基中才一個有金屬光澤菌落，不知道是哪個步驟搞錯，可能因為下雨導致崑山湖水樣比較乾淨一些，所以只有一個菌吧。 凱傑：這實驗唯一擔心就是製做培養基時怕弄到吧!數據有點問題可能因為實驗當天下雨，使崑山湖水樣乾淨一些，所以做出來都沒什麼菌。俊澄:這次的實驗有點危險因為要使用的藥品有毒,所以大家都很小心的操作,此外就沒有什麼太大的困難,最後大家還是很小心的把實驗做完了。傑舟：怎麼綠色金屬光澤只有一個，明明水就這麼混，培養基也沒問題呀，然到崑山湖變乾淨了嗎？這次的培養基是致癌的化學物品，使用上要戴上手套，以免手沾到化學藥劑。蔡傑舟 100%陳凱傑 100%李俊澄 100%黃瑋晟 100%
