1、丹参茶的致突变性及致畸性试验第 l6 卷第 4 期2004 年 7 月?研究简报?癌变?畸变?突变Carcinogenesis,TeratogenesisandMutagenesisV01.16No.4JulY,2004丹参茶的致突变性及致畸性试验蒋中仁,敬明武,葛宇杰,刘科亮,欧世平,余明泽,周静(四川省疾病预防控制中心,四川成都 610031)【摘要】背景与目的:丹参茶是一种天然保健食品, 为确保其食用安全,对其进行了致突变性和致畸性研究.材料与方法:材料主要用丹参茶浸泡液,大,小鼠和 Ames 试验菌株 TA,TA,TA.,TA.方法主要有小鼠精子畸形试验,小鼠胸骨髓微核试验,Ames试
2、验及大鼠传统致畸试验.结果:3 个剂量组的微核率和精子畸形率与阴性对照组比较差异无显着性,各剂量组的回变菌落数均未超过溶剂对照组的 2 倍,未见母体毒性,胚胎毒性和致畸性.结论:在本实验条件下,丹参茶未见致突变性和致畸性.【关键词】丹参茶;致突变性;致畸性中图分类号:R994,4 文献标识码:A 文章编号:1004616X(2004)04023203MutagenicityandTeratogenicityTestsofDanshenTeaJIANGZhong-ren,JINGMing-wu,Geyu-jie,etal(SichuanCenterforControlandPreventiono
3、fDisease,Chengdu61003l,China)AssrtucrlBACKGROUNDAIM.TodetectmutationandteratogenicityofDanshenteawhichisanaturalfood.MATERIALANDMETHODS:ThewaterextractofDanshenteaWaSexaminedbythemicebonemarrowcellmi-cronucleustest,themicespermabormalitytest,Amestestandtheteratogenicitystudy.RESULTS:Themicmnucle-usf
4、reguencyandthefreguencyofspermabemionwerenotsignificantlydifferentcomparedwiththecontro1.Themutatedcoloniein3exposuregroupsWaSlessthandoubleofthatofthecontrols.ThereayenotMaternity,toxic-ity.embrytoxicityandteratogenicity,CONCLUSION:ThemutationandofDanshenteaalenotdetectedonthesecondions.【KEYWORDS】d
5、anshentea;mutation;teratogenicity丹参茶是一种天然保健食品,有关毒理学资料尚未见报道.本文就致突变性和致畸性进行了研究,为其安全性评价提供依据.1 材料与方法1.1 受试物丹参茶由某有限公司提供,成人每日推荐量为 133.33mg/kg(8000rag/60kg).实验前将丹参茶和蒸馏水按 1:15 在常压和 80cc90cc的条件下分两次浸泡提取,合并浸泡液在 60cc70cc 减压浓缩 42 倍,其浓缩液作为实验样品 ,每毫升浓缩液相当于 1.4g 丹参茶.实验时用蒸馏水作溶剂配制成所需浓度的溶液.1.2 实验动物昆明种小鼠及 SD 大鼠均由四川省抗生素研究
6、所实验动物房提供,动物合格证号分别为川实动质 99.32 和 99-30.1.3 试验菌株鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TATATATA 菌株均来源于中国疾病预防控制中心营养与食品安全所.1.4 小鼠精子畸形试验和小鼠骨髓微核试验试验均设 2500,5000 和 10000mg/kg3 个剂量组及蒸馏水阴性对照组和环磷酰胺(精子畸形试验,60mg/kg;微核试验,40mg/kg)阳性对照组,然后按标准方法进行试验.1.5Ames 试验采用标准平板掺人法,设 8,4o,200,l000,5000/g/llll5 个剂量,另设蒸馏水溶剂对照和阳性对照(一 S:TA 钾和 TA 粥用 2,4,7.三硝基
7、.9-收稿日期:20031202;修订日期:20040115作者简介:蒋中仁(1962 一),男,四川省简阳人,副主任技师,主要从事卫生毒理工作筝 4 期蒋中仁等参茶的致突变性昝致_畸性试一芴酮,0.2g/皿;rA1【x】用 NaN3,1.5g/皿;TAlo2MMC,0.5Vg/皿.+S9:TATA98 和 TA1oo 用2-AF,20g/llll;TA1o2 用 1,8 二羟基蒽醌,50g/皿)在加和不加 S 的条件下,各剂量每个菌株同时作 3个平板,试验重复 1 次.1.6 大鼠传统致畸试验设 1250,2500,5000rag/kg3 个剂量组,蒸馏水阴性对照组和敌枯双阳性对照组(1mg
8、/kg),每组 1215 只受精鼠,于妊娠 716d,每天经口灌胃给予受试物.第 20d 称体重后股动脉放血处死孕鼠,称子宫总重(包括胎鼠),记录总着床数,活胎数,死胎数及吸收胎数,称活胎重并量身长.逐个检查胎鼠外观,将 1/2 活胎经鲍音氏液固定两周后检查内脏,其余胎鼠去内脏后经 80%乙醇固定,茜素红 S 染色以及透明后检查胎鼠骨骼 B】.2 结果2.1 丹参茶的致突变性2.1.1 丹参茶对小鼠精子畸形的影响各剂量组的精子畸形率与阴性对照组比较,经秩和检验差无显着性,而环磷酰胺阳性对照组的精子畸形率明显高于阴性对照组(P0.O1),见表 1.表 1 丹参茶对小鼠精子畸形率的影响(%,S)T
9、able1EffectofDanshenteatofreguencyofmicespermabnor-malityComparedwiththecontrol,*P0.O1;thenumberofanimalineverygroupwas5:thenumberofspermineverygroupWaS5000.2.1.2 丹参茶对小鼠骨髓微核的影响丹参茶 3个剂量组的 PCE 微核率与阴性对照组比较,经泊松布检验差异无显着性,而环磷酰胺阳性对照组的 PCE微核率明显高于阴性对照组(P0.O1),见表 2.表 2 丹参茶对小鼠胸骨髓微核的影响(%.)Table2EffectofDaIlshen
10、teatomiceboneman_owcellmicronu-cleusComparedwiththecontro1.*P0.0l:thenumberofanimalineverygroupWa.S10;thenumberofPCEineverygroupwas10000.2.1.3 丹参茶的 Anles 试验结果无论加或不加表 3 丹参茶的 Allies 试验结果(S)Table3ResultofDanshenteaofAnlestest表 4 丹参茶对母鼠体重及胎鼠发育的影响(S)TabIe4EffectofDanshenteatotheweightofpregnantratandtheg
11、rowthoffoetusS,各剂量组回变菌落数与溶剂对照组接近,均未超过各菌株自发回变菌落数的两倍;而阳性对照组回变菌落数则超过溶剂对照组的两倍以上(见表 3).2.2 丹参茶的致畸性2.2.1 丹参茶对母鼠体重及胎鼠发育的影响剂量组的活胎平均数,平均体重,身长均值及妊娠母鼠增重与阴性对照组比较,经方差分析均差异无显着性(P0.05).而阳性对照组则明显低于阴性对组(P0.05,P0.O1),见表 4.2.3.2 丹参茶对胎鼠外观,内脏和骨骼的影响检查 3 个剂量组及阴性对照组的胎鼠均未见外观,内脏及骨骼畸形,仅可见胸骨骨化不全和缺失,但可在生后赶上正常.阳性对照组则有明显的外观,内脏和骨骼
12、畸形等.3 讨论?234?拒骥.,喳变一?一骞变综上所述,丹参茶各剂量组的微核率和精子畸形率与阴性对照组比较差异无显着性;Anqes 试验结果为阴性;对孕鼠体重,活胎数,活胎体重及身长均无明显的影响,也未见胎鼠外观,内脏及骨骼畸形,说明丹参茶未见母体毒性,胚胎毒性和致畸性.因此本实验条件下,丹参茶未见致突变性和致畸性.(上接 216 页)AP_1【JJ.Biochemistry,2002,32:83978402.【3】张之南,沈娣.血液病诊断及疗效标准【M】.第 2 版.北京:科学出版社,1998.171215.【4】温博贵.末梢血中白血球高分子量 DNA 的制备【J】.汕头大学医学院,199
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15、细胞的生长和诱发 G.期阻滞.本实验在设计过程中由于 PTEN 基因本身基因结构上的特点,在其开放阅读框附近很难筛选出一对合适引物,故作者选取在编码区外侧设计一对引物,该引物扩增的产物长度为 1.4kb,结果出现特异性 PCR 条带,然后克隆 P 咂基因的完整编码序列并构建了两种型 P 陋真核表达载体 .将两种型质粒和 peDNA3.1(+)空载体转染进 FqEN 表达缺失的人胶质瘤 U.细胞进行细胞生长速率和 WesternBlot 检测,结果表明转染野生型质粒的细胞生长速率明显减慢,在细胞中检测到 2 条特异性条带,而在转染空载体细胞及未进行转染细胞中无相应条带出现,表明 FqEN 可能能
16、抑制肿瘤细胞生长.参考文献:2004 年 7 月第 l6 卷参考文献:【1】卫生部.保健食品检验与评价技术规范【S】【2】【3】2o03.177228MaronDM,AmesBN.Revisedmethodsforthesalmonellamutagenicitytest【J 】.MuratRes,1983.113173.李寿棋.毒理学原理与方法【M】.第 2 版.成都:四川大学出版社,2003.423433.19:25ll 一 2522.【9】BiethahnS,AlvesF.WildeS.eto1.Expressionofgranlocytecolony-stimulatedfactora
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