1、遗 传 学 报 !“#$ % ?“ $:;%9A B#“D 18 ECF9 G9“% HD“# /:9=C“D I99“%=8 H%;J%“K9 ;L68C#“（ 0;M1356(5(+5(1） 作 者 简 介 ： 陈 巧 林 （ +1,4 2 ） ， 男 ， 硕 士 。 现 在 北 京 大 学 人 民 医 院 风 湿 病 学 与 免 疫 学 系 攻 读 博 士 学 位 。!现 在 地 址 ： N9:“%K9# ;L H“8;D;JL P%Q“#“ L;% R9AC=“D /=C9#=9， PI,(4， O/P“通 讯 作 者 。 79D： (+(53,4+S)； E“T： (+(53,4+S
2、)； U5K“CD： %$D“BV:Q$M9A$M=#!“#$%5YC#+， ZP0 XC“;5W$“+， !， IU0 W;#J59C+， “#J ;#J5G$“#， IO C#J59#+， “（ +_ *,.#%A9% ; 9T“KC#9 89 9D$CF9 L$#=C;#“D K9=8“#CK ;L .E（ 09$%;#“D J%;?8 C#8CBC;%， .E） “#A 9D$=CA“9 89:;CBD9 %9D“C;#8C: B9?99# .E “#A PD89CK9% AC9“9， ?9 =;#%$=9A B“C+ :D“KCA（ :W#C#J .E =N0P AC5%9=D58
3、=%99# PD89CK9% AC9“9 8$K“# B%“C# =N0P DC5B%“%$#A 89 .E5C#9%“=C#J :%;9C#M789 LC#“D %9$D L%;K =;CKK$#;:%9=C:C“C;# “#A ?99%# BD;C#J 9T:9%CK9# =;#5LC%K9A 8“ C#9%“=C#J :%;9C# :9=CLC=“DD .EM PL9% 9a$9#=C#J 89 #$=D9;CA9 ;L 89 :$“CF9 :;CCF9 :D“KCA “#A9“%=8C#J L;% 8;K;D;J$9， ?9 L;$#A 8“ ;#9 ;L 899 C 89 :“% ;
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5、# C# FC%;M789 C#8CBC;% 89 .EM. :;CBD9 8“ AO7H“9 C ;#9 ;L 89 :%;9C# C#9%“=C#J ?C8 .E C# PD89CK9% AC9“9 8$K“# B%“C#9T%“=M:$4 ;“(-8： .E； PD89CK9% AC9“9； 89 58#； H6+神 经 生 长 抑 制 因 子 相 互 作 用 蛋 白 的 分 子 克 隆 、鉴 定 及 其 生 物 学 特 性陈 巧 林+， 康 巧 华+，!， 任 宏 伟+， 王 宗 元， 茹 炳 根+，“（ +_ 北 京 大 学 生 命 科 学 学 院 生 物 化 学 与 分 子 生 物
6、 学 系 ， 蛋 白 质 工 程 国 家 重 点 实 验 室 ， 北 京 +(S,+；_ 扬 州 大 学 畜 牧 兽 医 学 院 ， 扬 州 4(1）摘 要 ： 为 了 探 讨 神 经 生 长 抑 制 因 子 （ 09$%;#“D J%;?8 C#8CBC;%， .E） 与 PD89CK9% 病 （ PD89CK9% AC9“9， PN）的 关 系 ， 将 .E 的 =N0P 全 基 因 克 隆 到 载 体 :W9 ) 亲 和 层 析 、 凝 血 酶 酶 切 和 /9:8“=%=8%;K;=K“） H6+， 对 细 胞 的 生 长 产 生 抑 制 作 用 。关 键 词 ： 生 长 抑 制 因
7、子 ； PD89CK9% 症 ； 酵 母 双 杂 交 系 统 ； AO7H“9； 基 因 表 达 ； 嗜 铬 细 胞 瘤 株中 图 分 类 号 ： X,) 文 献 标 识 码 ： P 文 章 编 号 ： (*,15)+,（ ()） (+5(,5(3!“#$%(“%6-AB: 共 转 化 MXR 酵 母 细 胞 ，检 测 在 OKU-9 克 隆 于 带 ? 标签 的 真 核 表 达 载 体 58“? 中 ， 获 得 表 达 ?“2343:融 合 蛋 白 的 真 核 重 组 表 达 载 体 2343:958“?。 使 用AB51C+;-$DB/+ 将 234954%$#“678“( 和 2343:
8、958“?共 同 转 染 (EF 细 胞 ， 更 换 完 全 培 养 液 G H 后 加 入6I6%(至 终 浓 度 为 )“D1%9A， 加 入 7#6%(至 终 浓 度 为(J“D1%9A； 继 续 培 养 FK H 后 ， 收 集 细 胞 经 洗 涤 后 在.L%“CN） ， 保 证 了 基 因 文 库 筛 选 的 全 面性 。 挑 选 了 缺 省 培 养 基 上 较 大 的 KU 个 ?B,克 隆 ，经!“半 乳 糖 苷 酶 活 性 分 析 ， 其 中 N%$. 6%1/B/# $/I 3I+/-BCB;$-B1/ $/I MB1%1#B;$% ;-BaB-L 1C 234“B/-+.
9、$;-B/# :.1-+B/（ ,）图 ! 双 杂 交 筛 选 “#$% 文 库 得 到 的 部 分 阳 性 克 隆!,:.0 (0?=/:3.8/!“#$ %,“?$%2(4(“,.(3: 34 .=/ “#$% 34 DEF+,0/C： CDD E8 FG H+“+* $%,-E“$Q 共 转 化 酵 母 1RD， 结 果 共 转 化 子 既 能 在 ()缺 省 培 养 基 上 生 长 ， 亦 能 使 S0L+“ 变 蓝 （ 图 R） 。图 N 转 化 酵 母!/D -E“$QT 89:;K-E“$Q0NOPT 89:;K-E“$Q0NOPT 89:;KG0*JK5+)$，8P“+L06V
10、W0VK0B T ;5W0G 及 8;W0G0*JK5+)$ T8P“+L06VW。 细 胞 裂 解 后 ， 用 抗 P1GN 抗 体 免 疫 沉 淀*JK5+)$蛋 白 ， 用 抗 G 抗 体 进 行 免 疫 印 迹 ， 可 检 测到 *JK5+)$0G（ 图 A， G） ， 或 用 抗 G 抗 体 免 疫 沉 淀*JK5+)$ 蛋 白 ， 用 抗 P1GN 抗 体 进 行 免 疫 印 迹 ， 可 检测 到 *JK5+)$0P1GN（ 图 A， !） 。 结 果 均 表 明 *JK5+)$可 在 哺 乳 动 物 细 胞 内 与 NOP 特 异 性 结 合 。A*N LM 与 DEF+,0/
11、的 表 达 及 纯 化O5KN 诱 导 表 达 产 物 经 谷 胱 甘 肽 0;$8/+5?. AB?CD? (5?BE$F。.678! 9+ 1+*:40* 5; 1+60)0652 )2% /+*0+12 34500627 5; 1+4)06?+ 154+*609 %(F (5?BE$F H I*)?*5 E.?B5/，+： ,630#!0$%(. /A?C ;(, H 1+7 N*； 8： :A?C H 1+7 N*AB?C :A?C H 1+7 N* AB?C :150+62*09B5 !“ #$“： 2.*ND.( 1.5B5/ (5$ 5 (5$ 8B./BN(. !N?BSB?F H :?*B5（ )）亡 !“。 研 究 证 明 在 #$ 病 人 脑 组 织 中 ， 除 了 有 #!蛋白 的 沉 积 和 神 经 纤 维 损 伤 外 ， 还 有 明 显 的 $%# 损伤 ， 这 种 $%# 损 伤 是 导 致 #$ 神 经 病 变 的 早 期 行为 !。 我 们 克 隆 到 的 ()*+,- 与 8+9，!;2 !0%#， !3“（ “） ： “I T “3“A（ 责 任 编 辑 ： 李 绍 武 ）“! 遗 传 学 报 #7+ .-2-A&! %=A! “3
