1、 壮督方对强直性脊柱炎T辅助细胞亚群的影响王建明阎小萍周童亮中日友好医院 100029摘要：目的：通过检测壮督方治疗前后强直性脊柱炎患者及正常人外周血中Th1和Th2细胞水平，探讨T淋巴细胞亚群与强直性脊柱炎发病的关系以及壮督方对强直性脊柱炎患者T辅助细胞亚群的调节作用。方法：采用酶联免疫斑点法(Elispot)对强直性脊柱炎患者和健康志愿者外周血中T辅助淋巴细胞进行分析。结果：AS患者外周血中以Th1型细胞为主，患者组外周血中Th1细胞比正常组明显升高，AS患者外周血中Th1、Th2水平与炎症活动指标ESR、CRP具有一定的相关性。经用壮督方治疗前后AS患者外周血中Th1细胞数下降而Th2细
2、胞数上升。结论：经壮督方治疗后，患者外周血中Th1细胞有下降趋势、Th2细胞有上升趋势，壮督方对强直性脊柱炎患者T辅助细胞亚群有一定的改善作用。关键词：壮督方；脊柱炎，强直性；Th1细胞；Th2细胞Impact on Th cell subsets in ankylosing spodylitis of zhuangdu recipeWang JianmingYan XiaopingZhoutongliangChina-Japan Freindship Hospital, Beijing 100029Abastract Objective: To investigate Inpact on T
3、h cell subsets in ankylosing spodylitis (AS) of zhuangdu recipe. Methods: Elispot method was employed for Th cell subsets in the peripheral blood of AS patients befoe and after treatment by zhuang du recipe and healthy volunteens. Results: There is a dominant Th1 subset in the peripheral blood of th
4、e AS patients. There is certain relativity between the level of Th cell subsets and indice of active inflammation ( ESR/CRP) . After treatment by zhuangdu recipe, the number of Thl cell discreases and the number of Th2 cell increases.Conclusion: Zhuangdu recipe is impacting on Th cell subsets in the
5、 peripheral blood of the AS patients.Key words Zhuangdu recipe; spondylitis, ankylosing; Th1 cell; Th2 cell实验研究篇 391105个左右。每份标本涂3片，分别用于IF、IL-4和空白测定。44染色：先用固定液将细胞涂片固定，室温下放8min，用01M PBS冲洗2次，甩去水珠；加1滴通透液，室温下放810rain，用01M PBS冲洗1次，甩去水珠；加1滴封闭液，室温下放5min(如果时间超过10rain，将影响后面的显色)，用01M PBS冲洗2次，甩去水珠；加入IFN、单抗20一和儿
6、一420一单抗，轻轻摇匀，在密闭的湿盒内46C过夜，用01M PBS冲洗5次；加生物素抗25m，轻轻摇匀，室温放40min，用01M PBS冲洗5次；在染色区，加05皂素液6一，链霉亲和素一碱性磷酸酶25心，轻轻摇匀，室温放40min，用01M PBS冲洗5次；每片加05皂素液10一，坚固红萘酚液40一，混匀，室温染色20min，用蒸馏水冲洗；加复染液l滴室温复染15rain后，用蒸馏水冲洗；封片；在油镜下计数300400 PBMC细胞中的阳性细胞数，减去空白阳性细胞数，计算成百分比。5统计分析所有资料均采用Spssl00统计软件进行统计，治疗前后及患者组与对照组采用配对资料的t检验，T辅助细
7、胞亚群与炎症活动指标相关性采用相关系数分析。结果1AS患者外周血中Thl、Th2水平与炎症活动指标相关性分析结果见表l表1 AS患者外周血中Thl、Th2水平与炎症活动指标相关性分析从表l中可以看出，AS患者外周血中Thl、Th2水平与炎症活动指标ESR、CRP具有一定的相关性，但没有显著性差异，PO05。2As患者与正常对照组外周血中Thl、Th2变化情况结果见表2襄2 AS患者与正常对照组外周血中Thl、Th2变化情况从表2中可以看出，AS患者外周血中以Thl型细胞为主，患者组与正常组外周血中Thl细胞差异有显著性意义。P005。3治疗前后AS患者外周血中Thl、Th2变化情况表3治疗前后
8、AS患者外周血中1M、Th2变化情况从表3中可以看出，治疗前后患者外周血中Thl细胞数下降而Th2细胞数上升，变化有显著性差异，P005。讨论本研究显示，As患者外周血中以Thl型细胞为主，患者组外周血中Thl细胞比正常组明显升高，As患者外周血中Thl、Th2水平与炎症活动指标ESR、CRP具有一定的相关性。说明ThlTh2细胞的失衡在强直性脊柱炎的发病和病情进展中起着重要的作用。经用壮督方治疗前后As患者外周血中Thl细胞数下降而Th2细胞数上升。说明壮督方对AS患者细胞免疫功能的改变有着较好的调节作用。同时我们在进行壮督方治疗AS患者临床观察中发现，壮督方对改善患者的症状和炎症指标方面，
9、有着令人满意的效果。壮督方是阎小萍老师根据多年临床经验总结的治疗AS的方剂，方中以补肾强督、活血祛湿通络之药为主。392 焦树德诞辰九十月年纪念论文集熟地补肾填精；淫羊藿温壮肾阳、除冷风劳气；金狗脊坚肾益血，强督脉、利仰俯。制附片温肾助阳逐风寒湿，并治脊强拘挛；鹿角胶(或片或霜)益肾生精，壮督强腰；杜仲补肝肾能直达下部气血，使骨健筋强；骨碎补坚骨壮骨、行血补伤；补骨脂补肾阳暖丹田；羌活散风祛湿治督脉为病、脊强而厥。独活搜肾经伏风；桂枝温太阳经而通血脉；续断补肝肾、强筋骨；赤芍散血滞；白芍和血脉、缓筋急；知母润肾滋阴以防桂附之燥热；防风祛风胜湿，善治脊痛项强；牛膝活瘀益肾，引药入肾治腰膝骨痛；炙
10、山甲散瘀、通经、活络、引药直达病所“。Thl型细胞因子和Th2细胞因子之间存在错综复杂的关系，如IIJ一4可促进Th2细胞增生，IL一4、IL10等分泌增多，同时抑制Thl细胞的活性。IIJ一12则可激活Thl细胞，对Th2细胞分泌细胞因子有抑制作用H1。也有国外学者认为，在不同疾病中，这种相互作用不尽相同Hj。强细胞在关节炎中到底发挥怎样的作用?一般认为，Thl是一种炎症介质，起致病作用，而Th2细胞主要出现于炎症的恢复期，对关节炎有保护作用。Kanik等发现：在早期RA患者的外周血中，同慢性患者相比，IIJ一2和IFNly明显增多。随着关节炎的好转，Thl细胞逐渐减少。有学者发现M】，妊娠
11、时随着雌激素水平的上升，Thl细胞减少而Th2细胞增多，RA患者的关节炎症状常常得到缓解；但在分娩后雌激素水平回到原来水平，Thl细胞则增多，病人的关节炎症状加重。【_”使用抗CD4单抗治疗RA，患者的病情明显改善，且m一2和IFN一水平显著下降。Masuko等观察到，ThlTh2值低的类风湿关节炎患者关节炎活动程度较低，且对改善病程药物的反应要比ThlTh2值高的患者好。1动物实验发现，IFNlr在胶原关节炎中起破坏作用，在早期注射抗IFN一1单抗后小鼠的关节炎发病率和程度均下降。使用抗IL一4和几一10抗体治疗小鼠可使关节炎加重，而使用IL一4和m一10则可使之减轻。以上证据均表明一JTh
12、l细胞在关节炎中的致病作用和Th2细胞的保护作用。笔者在研究中发现，少数AS患者外周血中Thl、Th2水平与上述结果呈现相反的情形，Thl细胞表现下降趋势，Th2细胞表现上升趋势，但因例数太少故未纳入本文中分析讨论。结合国外有文献报道，不同的关节炎中存在截然相反的ThlTh2细胞因子类型，而且IFNY基因敲除小鼠的胶原关节非但没有减轻反而显著加重。垆。这可能提示我们，在强直性脊柱炎患者体内，n细胞亚群并不只表现单一的一种变化，可能存在更为复杂的情形。故我们目前尚不能简单认为对于AS患者来说，Thl细胞一定有益而Th2细胞一定有害，而因从ThlTh2失衡方面去进行更为深入的研究。这对目前中医药治
13、疗AS的研究也提供更为有力的假设，中药作用于机体是通过对体内多靶点作用的综合结果，而非单一的作用，这对中医药的科研或许是一个有益的启示，也对我们以后的研究拓宽了思路。参考文献1朱剑，刘湘源，黄烽强直性脊柱炎患者外周血ThlTn2淋巴细胞类塑中华风湿病学杂志2000；4(4)：2022张乃睁临床风湿病学上海上海科学技术出版社。1999：1653同小萍，王吴，孔维萍强直性脊柱炎与大中国医药学报2002；17(10)：6124Ldame JJThe role 0f蜘T cell subsetin autoimmune diseaseCytokfine Grow&Factor Rev 1998，9：1
14、395】YinZ，Braun J，Neure L，et a1clwi|lrole afinterleuknlOinterleukin一12 balanceinthe聘弘k嘲ofthetype2Thelpercy妇respemein弛衄6他arthritisArthritis Rheum 1997。加：17886Kani,KS，Hagi恤E，YarboroCH，etlL Districtpenerm 0fq协kine S浏OII characterize嘲olmet synovifis v嘲壕chronic rheemato越越th小血J Rheumatol 1998。25：16【7Oateme
15、n托Sex hormones emt pregnancy in rheumatobt arthritis sad Syllbc lupIlI qr凼衄哦值睢Ann NY Ac矗d Sci 1999，22：131【8Mamko IlK，Kato T，Nishioka K Piugno耐c value 0fThlTh2 ratio in rlmmmoid irthritiI|n瞅1998，352：9889地I硼町sB。ChiccchiaG，BessisN。et a1Highmsceptibilityto11弹一induced arthritisinmicelac血ingIFNgamma reeelmmL Jlmmunol1997。158：5501壮督方对强直性脊柱炎T辅助细胞亚群的影响作者： 王建明， 阎小萍， 周童亮作者单位： 中日友好医院 100029引用本文格式：王建明.阎小萍.周童亮 壮督方对强直性脊柱炎T辅助细胞亚群的影响会议论文 2012
