1、胃癌的HER2检测,胃癌的HER2检测,胃癌和HER2 胃癌中的HER2表达 ToGA 研究 胃癌HER2检测方法推荐,胃癌和HER2,1 = 基因拷贝数 2 = mRNA 转录 3 = 细胞表面受体蛋白表达 4 = 细胞外受体功能域释放,A = HER2 DNA B = HER2 信使RNA C = HER2 受体蛋白,正常,过度表达/扩增,细胞核,细胞质,细胞膜,1,2,3,4,C,B,A,HER2阳性的细胞存在于身体各处,大部分研究认为：胃癌中HER2过表达可提示差的预后。 Yonemura Y, et al. Cancer Res 1991; 51: 10341038:260例胃癌中研
2、究发现，HER2表达与肿瘤大小、浆膜面浸润、淋巴结转移相关。 Uchino S, et al. Cancer 1993; 72: 31793184.108例胃癌中研究发现，HER2过表达与差的10年生存率相关。 Mizutani T, et al. cancer. Cancer 1993; 72: 20832088.226例胃癌中研究发现，HER2阳性的早期胃癌患者预后显著差于阴性者。 Nakajima M, et al. Cancer 1999; 85: 18941902.在早期胃癌中，HER2过表达是仅次于淋巴结状态的提示预后差的第二大指标。,胃癌中HER2的表达与预后,胃癌中HER2的表
3、达与预后,Ross JS, McKenna BJ. Cancer Investigation 2001; 19: 554-568.HER2基因与胃肠道肿瘤：在中晚期胃腺癌中可提示差的预后Tanner M, Hollmen M, Junttila TT et al. Annals Oncol. 2005; 16: 273-278.胃癌中的HER2扩增与肠型，差的预后以及对赫赛汀敏感性的研究Charoin JE, Jacqmin P, Banken L et al. Abstract, Population Approach Group (PAGE) 2004, Uppsala.含赫赛汀的治疗方案
4、的长期性观察研究Allgayer H, Babic R, Gruetzner KU, et al. J Clin Oncol; 2000; 18:2201-2209.HER2是独立的胃癌预测因子,芬兰研究 -131患者HER2扩增情况与OS(总生存率)的关系,Month,Tanner, et al. Annals of Oncology 16: 273278, 2005,CISH检测,德国研究 -全部189例患者HER2表达与DFS(无病生存率)的关系,0,1,2,3:IHC检测,Heike Allgayer, et al. Journal of Clinical Oncology, Vol
5、18, No 11 (June), 2000: pp 2201-2209,德国研究 -139例R0根治的患者HER2表达与OS(总生存率)的关系,0,1,2,3:IHC检测,Heike Allgayer, et al. Journal of Clinical Oncology, Vol 18, No 11 (June), 2000: pp 2201-2209,胃癌中HER2的表达,Hofmann M, Stoss O, Shi D, et al. Histopathology. 2008 Jun;52(7):797-805.,胃癌中HER2的表达：IHC,Hofmann M, Stoss O,
6、 Shi D, et al. Histopathology. 2008 Jun;52(7):797-805.,胃癌中HER2的表达：FISH/CISH,胃癌中HER2表达的阳性率：IHC：阳性率报道集中在10-40%，平均近20% FISH/CISH：阳性率道集中在10-40%，平均近20% ToGA研究中的阳性率 22.1%,胃癌中HER2的表达,ToGA 研究,ToGA 研究,全球例数最多的HER2检测研究 3807例 覆盖24个国家 赫赛汀三期临床研究 第一个大型的生物靶向药物胃癌研究 中国筛选病人614例，15家医院,由于胃癌和乳腺癌病理组织染色方面的区别 (如肿瘤异质性高, 因蛋白水
7、解活性增加导致蛋白降解增加，及HER2受体对IHC亲和性较差等)，在ToGA研究中同时使用IHC和FISH检测，这也使研究者获得了关于蛋白过表达和基因扩增的完整的信息。,ToGA中HER2检测方法,ToGA 研究的设计,HER2-阳性 晚期胃癌患者 (n=584),5-FU 或 卡培他滨a + 顺铂 (n=290),R,5-FU 或 卡培他滨a + 顺铂 + 赫赛汀 (n=294),全球、多中心、随机、开放III期临床研究,1Bang et al; Abstract 4556, ASCO 2009,3807 位患者接受筛选1810 HER2-阳性 (22.1%),HER2检测：进行IHC 和
8、FISH,ToGA中HER2 阳性的定义,ToGA研究同时用IHC和FISH对入组病人进行筛选，有一项阳性即可入组。 IHC检测-3+表示阳性; FISH检测-HER2:CEP17扩增 2表示阳性。 研究中3667例病人成功进行了IHC和FISH检测，并根据以上标准分为以下五个亚组： IHC 0/FISH+ IHC 1+/FISH+ IHC 2+/FISH+ IHC 3+/FISH+ IHC 3+/FISH 或未知,Bang YJ, et al. J Clin Oncol 2009; 27:Abstract 4556.,ToGA 中HER2 筛选 : 最终结果,IHC和FISH HER2检测结
9、果 (n=3280),2519 例IHC 0/1+ 病例中: 7.5% FISH+ 761例IHC 2+/3+ 病例中: 74.4% FISH+,HER2检测成功的病人,Bang YJ, et al. J Clin Oncol 2009; 27:Abstract 4556.,ToGA 3667例 HER2检测成功的病例中， 810 例 HER2阳性 (22%) 610 例 HER2 蛋白高表达 (16%) 594 例符合ToGA入选标准，随即分组入ToGA,HER2阳性的病例 (n=810),Bang YJ, et al. J Clin Oncol 2009; 27:Abstract 4556
10、.,不同国家的HER2 阳性率,胃食管结合部的HER2阳性率更高,肠型的HER2阳性率更高,手术标本和胃镜标本HER2阳性率相当,赫赛汀可延长生存 -主要研究终点: OS（总生存）,时间 (月),294 290,277 266,246 223,209 185,173 143,147 117,113 90,90 64,71 47,56 32,43 24,30 16,21 14,13 7,12 6,6 5,4 0,1 0,0 0,处于风险的患者数,11.1,13.8,0.0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,1.0,0,2,4,6,8,10,12,14,16,
11、18,20,22,24,26,28,30,32,34,36,事件,FC + T,FC,事件 167 182,HR 0.74,95% CI 0.60, 0.91,p 值 0.0046,中位 OS 13.8 11.1,T, 赫赛汀,第一个生存超过12个月的研究,亚组,中位 OS (月),全部,11.1 vs 13.8,初步分析,IHC 0 / FISH+ IHC 1+ / FISH+ IHC 2+ / FISH+ IHC 3+ / FISH+ IHC 3+ / FISH,7.2 vs 10.6 10.2 vs 8.7 10.8 vs 12.3 12.3 vs 17.9 17.7 vs 17.5,探
12、索性分析,IHC 0 or 1+ / FISH+ IHC 2+ / FISH+ or IHC 3+,8.7 vs 10.0 11.8 vs 16.0,0.2,0.4,0.6,1,2,3,4,5,0.92 1.24 0.75 0.58 0.83,0.48, 1.76 0.70, 2.20 0.51, 1.11 0.41, 0.81 0.20, 3.38,HR,95% CI,0.74,0.60, 0.91,1.07 0.65,0.70, 1.62 0.51, 0.83,相对危险度,倾向赫赛汀,倾向无赫赛汀,584,61 70 159 256 15,131 446,N,根据 HER2状态决定治疗的效
13、果评价, p=0.0368,van Cutsem E, et al. J Clin Oncol 2009; 27:Abstract 4509.,HER2 状态对OS的影响,IHC 2+/FISH+ 或IHC 3+ 病人获益更多,1.0,0.8,0.6,0.4,0.2,0.0,36,34,32,30,28,26,24,22,20,18,16,14,12,10,8,6,4,2,0,11.8,16.0,FC + T,FC,Events 120 136,HR 0.65,95% CI 0.51, 0.83,中位 OS 16.0 11.8 4.2,0.1,0.3,0.5,0.7,0.9,月,11 3,21
14、8 198,4 0,5 3,12 4,20 11,228 218,196 170,170 141,142 112,122 96,100 75,84 53,65 39,51 28,1 0,0 0,39 20,28 13,高危病人,生存率,探索性分析,van Cutsem E, et al. J Clin Oncol 2009; 27:Abstract 4509.,赫赛汀增强了肿瘤对药物的敏感性 - 肿瘤缓解率,2.4%,5.4%,32.1%,41.8%,34.5%,47.3%,意向治疗人群（ITT）,总缓解率(ORR)=完全缓解率(CR)+部分缓解率(PR),p=0.0599,p=0.0145,
15、F+C + 赫赛汀,F+C,p=0.0017,患者数 (%),CR,PR,ORR,赫赛汀联合化疗治疗 HER2阳性进展性胃癌/胃食管交界癌,赫赛汀是第一个使病人生存获益的生物靶向制剂,ToGA 研究,HER2状态有必要整合到胃癌患者诊断和治疗中去,胃癌HER2检测方法推荐,始于1986年： Sakai K, et al. J Natl Cancer Inst 1986; 77: 104752. 90年代，使用多克隆抗体，阳性率为9-38%： Yonemura Y, et al. Cancer Res 1991; 51: 10341038. Ishida T, et al. Scand J Im
16、munol 1994; 39: 459466. Tokunaga A, et al. Cancer 1995;75: 14181425. 近年来，使用单克隆抗体(eg, HercepTest) ，阳性率集中在10-40%，平均近20%。,胃癌中HER2表达的检测方法： IHC,近年来开展了CISH和FISH的方法：,胃癌中HER2表达的检测方法： CISH/FISH,IHC与FISH/CISH检测符合率较高,Liang Z et al. BMC Cancer 2008, 8:363,IHC仍可能作为HER2相关靶向治疗的患者初步筛选检查。,中华消化杂志 2006年 第26卷 第10期,前瞻性研
17、究中HER-2/neu蛋白CISH和IHC检测结果符合率为89.2%。,中国的研究-O485试剂盒检测胃癌中HER2的表达,中华消化杂志 2006年 第26卷 第10期,回顾性研究中HER-2/neu蛋白CISH和IHC检测结果符合率为77.0%。,中国的研究-O485试剂盒检测胃癌中HER2的表达,汇总后HER-2/neu蛋白CISH和IHC检测结果符合率为77.0%。,胃癌中HER-2/neu基因扩增和蛋白表达的多中心研究. 中华消化杂志, 2006, 6(10):657-660.,中国的研究-O485试剂盒检测胃癌中HER2的表达,回顾性、前瞻性研究及汇总后总病例中HER2 IHC评分+
18、的病例CISH基因扩增符合率均90%。,中国的研究-O485试剂盒检测胃癌中HER2的表达,目前尚无公认统一的针对胃癌建立的 HER2 IHC阳性评判标准,胃癌HER2免疫组化评分标准的初步探讨,ToGA研究评分标准来源,（一）材料与方法,病例：不同种族人群的168例胃癌或食道胃交界腺癌手术标本 组织学采用Lauren分型,（一）材料与方法,标本：中性福尔马林固定，石蜡包埋 IHC： HercepTest（DAKO） 判断标准：参照乳腺癌，DAKO, 10% FISH： HER2 FISH pharmDx (DAKO) 判断标准：参照乳腺癌， DAKO, HER2/CEP172%,（二）结果分
19、析,IHC和FISH 符合率达93.5%，与乳腺癌的相应符合率（82-100%）接近,11例FISH+/IHC 0-2+ 病例分析按HER2染色强度、膜染色完整性和被染色细胞的比例分别分析所有病例的IHC结果，并与FISH对照列表 肿瘤异质性（染色细胞比例）？ 基底侧面型表达（不完整膜阳性）？,肿瘤异质性,胃腺癌肿瘤异质性(4.8%)：比乳腺癌更常见(1.4%) 对胃镜活检标本可能的影响 强阳性细胞比例10%是否视为IHC3+？,肠型,印戒细胞型,高度扩增,不扩增,胃癌中肿瘤异质性更常见,基底侧面型表达,部分胃癌，尤其低级别者，仍可见腺上皮的极性分布，腔面的瘤细胞保留分泌功能而不被标记染色，形
20、成U型（基底和侧面）不完整膜染色 胃癌腺腔形成更多见，故此现象比乳腺癌多见 此型表达是否应相当于乳腺癌的完整膜阳性？,用IHC法处理腺癌细胞，膜染色不完全,乳腺癌与胃癌HER2检测的不同点,由于胃癌及乳腺癌病理组织的差别，对胃癌HER2的评分系统需要进行修正,胃癌中肿瘤异质性更常见,用IHC法处理腺癌细胞，外膜染色不完全,Hofmann M, et al. Histopathology 2008; 52:797805.,（三）结论,HER2的乳腺癌IHC评分标准基本可用于胃腺癌的评判， 但鉴于肿瘤异质性和分化好的腺腔结构导致HER2不完整膜表达在胃癌更常见， 故需作适当调整。,图片来自 TAR
21、GOS,IHC 阴性 (0) 不染色或 10% 的细胞膜染色,IHC阴性 (1+) 10% 的细胞膜染色较浅或仅有部分膜染色,IHC 可疑 (2+) 10%的细胞膜或外膜轻到中度染色,IHC 阳性 (3+) 在以下细胞膜或外膜中高度染色 切除标本中10% 的细胞 IHC 3+ 的活检标本,胃癌HER2 的IHC评分标准（推荐）,ToGA 研究中54.6% FISH阳性,胃癌HER2 的IHC评分标准（推荐）,与乳腺癌不同，在胃癌标准中，IHC 2+ 或IHC 3+不需要完全的细胞膜染色，在胃癌中U形染色(即部分细胞外膜中、高度染色) 即为阳性。另一项重要的修正即在活检标本的分析中取消了细胞染色
22、百分比的临界值。然而，10% 的临界值仍适用于外科标本。,本研究结果（评分标准）已用于赫赛汀联合化疗药物治疗胃癌的临床三期试验（ToGA）的患者入组筛选 IHC 3+（无论FISH状态）都从赫赛汀的治疗中获益,IHC 评分标准和临床试验相关性良好,胃癌HER2检测推荐,胃癌检测首先使用IHC基于以下两个原因： IHC较FISH更有预后预测价值（IHC 3+/FISH 病人也能很好收益） 胃癌肿瘤异质性更为常见，只有通过明视野显微镜才能准确检测到肿瘤组织内的局部HER2阳性。（对于异质性，只要一个视野有阳性，进行治疗，效果良好） IHC 3+患者在医生的推荐下直接使用赫赛汀治疗,胃癌HER2检测推荐,由于不能观察肿瘤形态，FISH 不能作为首次或唯一检测决定胃癌患者是否适合赫赛汀治疗。 IHC 2+需再行ISH (FISH, CISH，SISH)， IHC 2+/FISH+ 使用赫赛汀治疗仍然收益。 HER2 检测需在有能力的实验室进行 IHC检测3+表示阳性，FISH检测HER2:CEP17(17号染色体着丝粒探针)扩增 2表示阳性。,ISH,+,接受赫赛汀治疗获益最大,评分系统基于: Hofmann M, et al. Histopathology 2008; 52:797805.,胃癌HER2 检测标准流程,0/+1,+2,+3,IHC,肿瘤标本,ISH,+,Thanks！,
