1、现代检验医学与临床,ADICON Clinical Laboratories, Inc.,艾 迪 康 医 学 检 验 中心,诊断时应注意：,除非有显著高血糖伴急性代谢失常或明显症状，否则应在另一日重复试验以确认符合诊断标准。 血糖为静脉血清葡萄糖。 随机是指任何时候，无须考虑与进餐的关系。 空腹指无能量摄入至少8小时。 诊断标准应在非应急状态（如感染、创伤、手术等）下进行。 尿糖测定不能用于诊断。,糖化血红蛋白是血红蛋白与糖类经非酶促结合而成的。它的合成过程是缓慢的，而且是相对不可逆的，持续于红细胞120天生命中，其合成的速率与红细胞所处环境中的糖浓度成正比。因此，糖化血红蛋白能反映测定前12
2、月内平均血糖水平。,糖化血红蛋白（HbA1c）,糖化血清蛋白,其它检验,尿微量白蛋白2微球蛋白(2mG) 1球蛋白,返回,肿瘤标志物 性激素系列 甲状腺功能 病毒性肝病检测,返回,肿瘤标志物（Tumor Marker TM） 定义 肿瘤标志物是指在肿瘤的发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身所产生的或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质，它表示肿瘤的存在并反映其一定的生物特性。(标志肿瘤存在的一些相关性生化物质）,发展史发现时期：1846年Bence-Jones发现MM患者尿中的凝溶蛋白。推广应用时期：1963年Abelev发现AFP 与肝癌的关系，Gold等发现CEA在消化系统肿瘤中的应用价值
3、，加上放免技术的诞生和应用于检查。发展时期：糖类肿瘤抗原发现，1975年Kohler与Milstein首次制备成功单克隆抗体用于肿瘤标志物的研究。,分类 按其本身的化学性质可分为 ：,肿瘤胚胎性抗原标志物（AFP、 CEA） 糖类抗原标志物（ CA-125等） 酶类标志物（AFU、PSA、NSE ） 激素类标志物（HCG、降钙素） 蛋白质类标志物（铜蓝蛋白、铁蛋白） 基因类标志物（ras基因、bcl-2基因）,理想的肿瘤标志物, 灵敏度 (高能早期测出所有肿瘤患者) 特异性好 (鉴别肿瘤和非肿瘤患者应100准确 ) 有器官特异性 血清中浓度与瘤体大小、临床分期相关，可用以判断预后. 能监测肿瘤
4、治疗效果 能监测肿瘤的复发 能预测肿瘤的预后,AFP ( 甲胎蛋白，FP ),1963年由Abele G.T.发现。 用于诊断原发性肝癌（连续3个月大于300ug/L）和睾丸癌，70-90%的原发性肝癌会有AFP增高，并可在症状出现前6-12月检出。,甲胎蛋白（AFP）：是CCH最重要的标志物，目前临床广泛采用400或500g/L作为诊断的临界(cut-off)值。,CEA ( 癌胚抗原 ),CEA是一种酸性糖蛋白，胚胎期在小肠、肝脏、胰腺合成，成人血清含量极低(5g/L ，吸烟者为15-20g/L，)。 CEAl965年被发现时，认为是结肠癌的标志物(60%-90患者升高)，但以后发现胰腺癌
5、(80%)、胃癌(60)、肺癌(75)和乳腺癌(60)也有较高表达。,糖蛋白抗原 CA50,是一种唾液酸糖蛋白，正常组织中一般不存在，当细胞恶变时，糖基化酶被激活，造成细胞表面糖基结构改变而成为CA50标志物。,许多恶性肿瘤患者血中皆可升高，如666的肺癌、882的肝癌、689的胃癌、885的卵巢或子宫颈癌、944胰或胆管癌，其他如直肠癌、膀脏癌等皆有70以上是升高的。,CA19-9,CAl9-9为唾液酸化的乳-N-岩藻戊糖II,异常升高也是在多种肿瘤出现，如79%胰腺癌、58%结肠癌、49肝癌、67胃癌，胆囊癌、肺癌、乳腺癌皆有10左右是升高的,CA72-4,CA72-4是一种高分子量糖蛋白
6、，正常人血清中含量6 Uml，异常升高在各种消化道肿瘤、卵巢癌。对于胃癌的检测特异性较高，以6Uml为 临界值。良性胃病仅1者升高，而胃癌升高者比例可达426，如与CAl9-9同时检测，阳性率可达56。,鳞状细胞相关抗原(SCC),是由宫颈癌细胞中提纯的，是宫颈癌较好的肿瘤标志物。,肺鳞癌有较高的阳性率，各家报告从40-100不等，而小细胞肺癌阳性率则较低(37)。食道鳞状上皮癌、口腔鳞状上皮癌皆有较高的阳性率，且随肿瘤的分期呈现不同变化(20-80)。,CA242,是一种粘蛋白型糖抗原，可作为胰腺癌和结肠癌校好的肿瘤标志物，其灵敏度与CA19-9相仿，但特异性、诊断效率则优于CA19-9。,
7、细胞角蛋白19（CYFRA21-1）,细胞角蛋白是细胞体的中间丝，根据其分子量和等电点不同可分为20种不同类型，其中细胞角蛋白19在肺癌诊断中有很大价值，是非小细胞肺癌的重要标志物。,2- MG,表达在大多数有核细胞表面，是HLA-A、B和-C抗原的一分子量为11800链。临床上多用于证实淋巴增殖性疾病，如白血病、淋巴瘤及多发性骨髓瘤。其水平与肿瘤细胞数量、生长速率、预后及疾病活动性有关。,CA15-3（糖类抗原15-3）,为高分子量糖蛋白，其基因为MUC-1, 在乳腺癌患者中有60%80%增高，且与临床症状和对治疗的反应有关。大量研究证明，该标志物在监测病患进展和复发是有用的。,CA125（
8、糖类抗原125）,卵巢癌的主要标记,最初认为是卵巢癌特异的，但深入研究，它也是一种广谱的标志物。正常值以35Uml为界，822卵巢癌、58胰腺癌、32肺癌，及其他非妇科肿瘤皆有不同程度的升高，但作为卵巢癌的辅助诊断是个重要的标志物，与病程有关。,（目前没有其他方法可过筛无症状的患者）。,在绝经期后的妇女中，CA125对于在鉴别诊断良恶性盆腔肿块时有用；若CA125大于95kU/L, 应敦促其就诊于在腹腔探查、淋巴结采样、肠系膜探查及细胞复位手术等方面见长的外科医生。,CA125并非卵巢癌的特异性标志物，它也可在输卵管、子宫内膜、子宫颈、胰腺、结肠、乳腺和肺的腺癌中增高。CA125增高亦见于良性
9、妇科疾病（包括子宫内膜异位、子宫肌瘤、腺肌症、盆腔炎、行经期及早孕。CA125可在良性腹水及腹膜、胸膜或心包的炎症中增高，在一些肝病中也增高。,PSA(前列腺特异性抗原),PSA是目前诊断前列腺癌最敏感的指标，可用于前列腺癌的早期诊断、监测治疗及预测复发。PSA是由前列腺上皮细胞产生的一种大分子糖蛋白，它具有极高的组织器官特异性。正常人体血清内PSA 4g/L，这个正常值有随年龄增长的趋势。50岁者一般低于40g/L，50-55岁为44g/L，60-69岁为68g/L，70岁可达77g/L，异常升高预示有患前列腺癌的可能。,以 4g/L为临界值，早期前列腺癌63-70阳性，总阳性率可达69-9
10、25。有报告，PSA值如为40-100g/L，特异性相对较低，只有25确诊前列腺癌；但10Og/L者，往往又是晚期前列腺癌，失去早期治疗时机，这是个急待解决的问题。,前列腺特异性抗原 PSA在血清中以多种形式存在，与蛋白酶抑制物形成复合物总PSA (T- PSA)；不与蛋白酶抑制物结合的另一种PSA即游离PSA(F-PSA) 。测定血清中不同分子形式的PSA对于区别前列腺癌和前列腺增生有重要意义。前列腺癌患者血清中游离PSA/总PSA比值明显较前列腺增生患者低。 当PSA值为415g/L 时，应用游离PSA 总PSA比值来区别癌和增生，可使特异性增加到90，故F-PSA和T-PSA联合检测对诊
11、断前列腺癌更有意义。,美国癌症协会推荐：50岁开始的男性（具有平均风险，并还有10年预期寿命）应每年做直肠指检（DRE）和血清PSA测定。对于风险大的人群筛查的年龄可放宽到4540岁。PSA大于10g/L，需要作前列腺活检. 在美国，前列腺癌是除皮肤癌外最常见的男性恶性肿瘤，其死亡率位居男性恶性肿瘤的第二位。,.,神经原特异性烯醇化酶(NSE),血清NSE是神经内分泌肿瘤的特异性标志，如神经母细胞瘤、甲状腺髓质癌和小细胞肺癌(70升高)。正常人血清NSE水平125Uml目前，NSE已作为小细胞肺癌重要标志物之一。,-HCG,是一存在于胎盘中的糖蛋白激素，当怀孕时血与尿中水平上升，正常血中只含微
12、量。由于60以上的非精原细胞瘤患者体内HCG上升，所以-HCG的测定可监视非精原细胞瘤的治疗反应及复发状况，甚至有些肿瘤复发可在临床体征出现前几周或几个月通过测定HCG查出。,铁蛋白( SF),1965年由Richter等人从肿瘤组织中分离出，为铁储存蛋白，分子量460550kD，肝癌中约有76%的患者增高，与AFP联合，肝癌检出率可增高到93.6%辅助诊断肺癌，31%的患者增高，早期较低参考值：男20250 g/L，女10120 g/L假阳性：输血、铁剂治疗或肝功能紊乱,临床应用,肿瘤筛查（男）,CEA、AFP、CA19-9、TPSA,肿瘤筛查（女）,CEA、AFP、CA19-9、CA125
13、,临床应用肝癌,标志物 AFP、SF、CEA、CA19-9,肝癌四项,胃癌：,CA72-4 CEACA19-9CA242,肺癌：,CYFRA21-1-细胞角质素片段抗原,CEA、NSE、CYFRA21-1CA125、SCC,前列腺癌,T-PSA 、F-PSA,结肠、直肠癌,CEA 、CA19-9CA50,胰腺癌,CEA 、CA19-9 CA50、CA125,卵巢癌,CA125、CEA、HCG AFP、CA19-9,乳腺癌,CA15-3、CEAHCG、SF,子宫肿瘤,CEA、CA125、SCC、HCG,鼻咽癌,EB病毒抗体,骨髓瘤,2-MG 、Ig 轻链 、,肿瘤标志物临床应用注意事项：1、特异
14、性 2、交叉性 3、联合检验与动态观察4、术前检查（找到标志）5、正常参考值的确定,返回,二、性激素系列定义 参与调节生殖功能的激素称生殖激素。,垂体生成泌乳素（PRL）促黄体生成素（ LH ）促卵泡刺激素（FSH ） 卵巢生成雌二醇（E2）孕酮（PGN） 睾丸生成睾酮（TTE),垂体的激素PRL 、LH、 FSH,男性一生睾酮水平曲线,女性不同时期的 E2水平,性激素联合测定的应用,1、辅助诊断月经紊乱、闭经的原因。（1）泌乳素（PRL）升高，同时伴有雌二醇（E2）孕酮（PGN)水平减低,高PRL血症引起的 卵泡发育与排卵障碍,（2）PRL正常; LH、FSH 增高; LH增高明显; LH/
15、FSH3; E2正常 ; P持续低水平，排卵障碍。提示：,多囊卵巢综合症,（3）PRL正常，LH 、FSH、E2、P 均减低。,垂体或下丘脑功能障碍,（4）PRL正常，E2、P减低，LH、FSH均高于40IU/L。,卵巢功能衰竭,2、判断体内激素水平是否真正处于绝经期：对疑为更年期综合症的患者，应联合测定生殖激素。绝经初期E2、P持续低水平，而LH、FSH增高，均大于40IU/L，60岁以后随着垂体的老化，LH、FSH开始减低。,3、,性早熟青春期前儿童LH、FSH同时增高提示真性性早熟;假性性早熟是由于垂体以外部位病变（卵巢肿瘤、肾上腺肿瘤）、使用性激素、食物、药品、化妆品等，反馈性地抑制
16、LH、FSH的分泌。,4、不孕不育的诊断和治疗（1）高PRL血症的诊断 PRL升高是不孕不育的常见原因。上午810点采血为宜。,（2）卵巢储备功能的检测：在月经的第3天测定FSH/LH的比值来估计卵巢储备功能。FSH/LH1FSH/LH1,卵巢功能正常,卵巢功能衰退,（3）了解卵泡发育和黄体功能：E2不足，反映卵泡发育不佳；月经第1826天作3次以上的孕酮测定，了解黄体的功能。,睾酮的临床意义,1、增高： （1）睾丸良性间质细胞瘤； （2）垂体功能亢进； （3）畸胎瘤； （4）女性多毛症。 （5）卵巢肿瘤、多囊卵巢综合症,2、减低： （1）性功能减退； （2）无睾症； （3）垂体功能减退； （
17、4）男性更年期。 （5）男性Turner综合症：为常染色体显性遗传性疾病。,返回,三、甲状腺疾病的 实验室诊断,0,0,5,5,10,10,15,15,20,20,病例数 (百万),25,25,胃溃疡,抑郁症,丘脑下部,垂体,甲状腺,性腺,肾上腺皮质,不受丘脑下部-垂体控制的内分泌腺体：,甲状旁腺 肾上腺髓质 胰腺,内分泌系统,甲状腺病理学,下丘脑/垂体病变 99%,80 % 自身免疫,桥本氏甲 状腺炎,Graves 病,甲状腺机能亢进,甲状腺机能减退,20 % 非自身免疫,甲状腺肿（Goiter） 亚急性甲状腺炎 甲状腺结节病 甲状腺癌,认识甲状腺疾病,发病过程通常缓慢而不易觉察 其症状常被
18、患者疏忽 该病有可能被误诊为其他疾病（例如高脂血症、月经失调、更年期或抑郁症）,甲状腺疾病： 甲状腺机能减退,甲状腺机能减退的定义：系由于甲状腺丧失分泌足够量的甲状腺激素而导致紊乱的各种过程 原发性甲状腺机能减退（常见）是由于疾病或治疗导致甲状腺组织破坏或妨碍甲状腺激素合成 中枢或继发性甲状腺机能减退是由于下丘脑和垂体病变的结果,甲状腺功能减退的广泛影响,原发性甲状腺机能减退:原因,先天性甲状腺机能失调-发育不全-甲状腺激素生物合成缺陷 以下情况导致甲状腺组织破坏-慢性自身免疫性甲状腺炎（桥本氏病）-放射性伤害（I-131治疗、其他放射性治疗）-甲状腺次全或完全切除-甲状腺的浸润性病变（病毒或
19、细菌） 抗甲状腺药物（锂、碘、含碘药物、干扰素等）,甲状腺机能减退的临床特征,疲劳 健忘/思维缓慢 抑郁症 注意力难以集中 头发稀疏/脱发 体毛脱落 皮肤干燥皱缀 体重增加 怕冷 血清胆固醇增高,眼睑浮肿 甲状腺肿大 失音/嗓音低沉 长期咽喉干燥或疼痛 吞咽困难 心搏减慢 月经失调 不育 便秘 肌无力/肌麻痹,甲状腺功能亢进,由于甲状腺激素过量引起的特征性症状，常导致：,神经过敏 心悸 脉搏增快 易疲劳 肌无力,体重减轻 腹泻 不耐高温 皮肤发热 出汗,颤抖 眼睛的变化 各种甲状腺肿大,甲亢的常见原因,弥漫性毒性增生-Graves病（自身免疫性变异）-抗原特异性T抑制细胞先天性缺乏-美国人发病
20、率为4%，女:男比为5:1（3050岁） 弥漫性及多节结甲状腺肿（女:男比为5:1, 50%为毒性增生） 毒性（单节结）腺瘤,甲亢的不常见原因,急性或亚急性甲状腺炎（病毒或细菌引起的）桥本氏（自身免疫性）甲状腺炎淋巴细胞/浆细胞浸润抑制性T细胞缺陷年龄3050岁的病人，女:男之比为10:1De Quervans病（亚急性拇指腱鞘纤维化）淋巴细胞性甲状腺炎（无疼痛，亚急性）产后甲状腺炎,甲状腺功能亢进的广泛影响,甲状腺过氧化物酶（TPO) 抗体 ：推荐采用特异性的免疫学方法测定，为最敏感的自身免疫性甲状腺病变的指标甲状腺球蛋白（TG) 抗体：很少提高TPO抗体的灵敏度，因为若只检出TG抗体，而无
21、TPO 抗体的人很少有甲状腺功能障碍TSH受体抗体（Graves病）,用于鉴别诊断的自身抗体,甲状腺功能的诊断程序,TSH,正常,FT4,FT4,甲亢,FT3,正常,亚临床甲减,继发甲减,正常,亚临床甲亢,原发甲减,垂体瘤？ 或 T3、T4不敏感综合征,以上甲状腺功能测定结果判读规律可以推广到所有下丘脑-垂体调节的激素 垂体激素的异常与内分泌腺激素的异常一致时，病变在垂体。(上下一致，问题在上） 内分泌腺激素的异常与垂体激素的异常不一致时，病变在内分泌腺。（上下不一致，问题在下面）,下丘脑-垂体-内分泌腺轴 激素测定的判读规律,促甲状腺激素（TSH） TSH能促进甲状腺激素的合成与释放，是诊断
22、甲亢和亚甲亢最灵敏的标志物，是甲状腺功能试验的首选指标。,TSH的检测方法第一代TSH ：RIA 法，最低检测下限为0.5-1.0mu/L 第二代TSH或超灵敏TSH（STSH） ：免疫放射分析法（IRMA），其灵敏度提高10-100倍，最低检测下限可达0.08-0.01mu/L。第三代TSH ：非同位素标记超敏TSH测定法 ，最低 检测下限可达0.004mu/L，对甲亢诊断的准确率近100%。,住院病人的甲状腺机能试验,住院病人的甲状腺试验结果多受住院期间各种因素的影响，比如，疾病的严重程度、用药或治疗等。NACB建议对于非甲状腺疾病住院患者（NTI）应推迟到现有病变消除以后再进行甲状腺试验
23、，除非患者的病史和症状提示存在甲状腺机能障碍。医师应认识到对于病重或接受多种治疗的患者，有些甲状腺试验的结果本来就无法解释。对于住院病人单凭测定TSH判断甲状腺机能是不可靠的，因为这些人存在其他疾病和药物影响。,甲亢的实验室检查,TT3 TT4 FT3 FT4 TSH 甲亢 亚临床甲亢 T4型甲亢 T3型甲亢 / ,甲减的实验室检查,TT3 TT4 FT3 FT4 TSH 原发性甲减 继发性甲减 亚临床甲减 ,甲状腺激素的测定不仅是诊断甲状腺疾病所必须，也是甲状腺疾病治疗过程所必要的。,返回,PCR技术介绍 Introduction to PCR Technology,DNA结构和复制,聚合酶
24、链反应（PCR）的发明,1985年，美国PE-Cetus公司的Mullis等人发明了聚合酶链反应（PCR） 基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制 最初采用E-coli DNA聚合酶进行PCR，由于该酶不耐热，使这一过程耗时，费力，且易出错 耐热DNA聚合酶的应用使得PCR能高效率的进行，随后PE-Cetus公司推出了第一台PCR自动化热循环仪 1993年，Mullis等因此项技术获诺贝尔化学奖,PCR 基本概念,聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)简称，是一项在短时间内大量扩增特定的片段的分子生物学技术。,模板DNA,引物2,引物1,Taq酶,Taq酶,第1轮
25、结束,第2轮开始,PCR反应基本过程,重复13步 2530轮,目的DNA片段 扩增100万倍以上,DNA双螺旋,DNA单链 与引物复性,DNA变性 形成2条单链,子链延伸 DNA加倍,ADICON PCR实验室,ADICON PCR实验室分区管理平面图,荧光定量PCR的应用,1. 传染性疾病：了解病原体对人体的感染情况，判断病情或对某一种药物的疗效进行评估2. 肿瘤研究：通过对癌基因或抑癌基因mRNA的表达数量进行检测，来判断肿瘤的发病情况，还可以通过查找基因的表达差异，推断发病机理3. 其他（遗传病、环境监测等）,YMDD突变株,YMDD: 酪氨酸蛋氨酸天门冬氨酸天门冬氨酸 YIDD 突变：蛋氨酸 亮氨酸YVDD突变：蛋氨酸 缬氨酸,HBV-DNA报告方式,HBV-DNA: 1000 copies/mlHBV-DNA: 4.312E+06 copies/ml,谢谢大家！,
