1、蜂胶醇提物及其单体的抗氧化、降血糖作用研究 刘雯 文萍 张红梅 卢仁军 何小群 吕武清 江西省中医药研究院 江西中医药大学 摘 要： 目的:考察蜂胶醇提物及从其中分离出的单体化合物 (白杨素、高良姜素、乔松素) 的抗氧化、降血糖作用。方法:将实验动物按体重随机分组, 分为空白对照组、模型对照组、阳性药对照组、蜂胶醇提物组、白杨素组、高良姜素组、乔松素组。通过角叉菜胶致大、小鼠足趾肿胀模型和四氧嘧啶致小鼠高血糖模型的建立, 通过测定动物血清中 MDA 含量和 SOD 活力、血糖值等指标, 观察蜂胶醇提物及其分离单体对大、小鼠炎症模型各项指标及小鼠高血糖模型血糖值的影响。结果:蜂胶醇提物及白杨素、
2、高良姜素、乔松素均能抑制角叉菜胶致大、小鼠足趾肿胀模型中血清 MDA 含量上升、提高 SOD 活性, 抑制四氧嘧啶致小鼠高血糖模型中血糖升高。结论:蜂胶醇提物及其分离单体在抗氧化、降血糖方面具有一定活性。关键词： 蜂胶; 醇提物; 丙二醛; 超氧化物歧化酶; 血糖; 作者简介：刘雯 (1985) , 女, 助理研究员。研究方向:中药药理。E-mail:。作者简介：文萍 (1979) , 女, 副研究员。研究方向:中药分析。E-mail:。收稿日期：2017-06-28基金：江西省科技计划项目 (20141BBG70075) Received： 2017-06-28蜂胶是由蜜蜂从植物新生枝腋芽处
3、、花蕾处、创伤处采集的树脂类物质, 再注入其腺体分泌物, 经加工转化而成的胶状物质。已有研究显示, 蜂胶具有良好的抗氧化活性, 其作用机制主要是通过直接或间接调节机体活性氧 (ROS) 的途径来调节体内氧化-还原平衡, 且通过其他途径调节多种酶的活性及其含量, 发挥抗氧化活性;而蜂胶有效抑制糖尿病动物模型的血糖升高的主要作用机制与其抗氧化、增强免疫力的能力密不可分1-3。蜂胶现已被广泛应用于药品、食品、化妆品及保健品等行业领域, 为进一步研究蜂胶的生物活性, 有效利用蜂胶, 我们在前期研究基础上, 对蜂胶醇提物及其分离单体进行抗氧化、抗炎等方面的初步药效学考察。1 材料1.1 仪器80-2 台
4、式低速离心机 (上海手术器械厂) ;紫外分光光度计 (日本岛津 UV-2401pc/2450) ;HH-4 数显恒温水浴锅 (金坛市江南仪器厂) ;电子天平 (杭州友恒称重设备有限公司 12001) ;ST-360 酶标仪 (上海科华实验系统有限公司MB0703569) ;快速混匀器 (江苏新康医疗器械有限公司 XK80-A) ;One Touch血糖仪 (德国罗氏诊断有限公司 GC01859246) 。1.2 实验药品及试剂蜂胶醇提物, 由江西省中医药研究院新药开发中心提供, 使用前按照 1:1 比例用淀粉混匀, 冷冻, 打粉备用;白杨素, 乔松素, 高良姜素 (均由江西省中医药研究院新药开
5、发中心, 经鉴定纯度均98%) ;角叉菜胶 (福建省绿麒食品胶体有限公司, 批号:LV-R0320) ;MDA 试剂盒、SOD 试剂盒, NO 试剂盒 (南京建成生物工程研究所, 批号分别为 20140901 和 20130418;20140906;20141011) ;阿司匹林 (阿斯利康制药有限公司批号:1206102) ;阿司匹林肠溶片 (拜耳医药保健有限公司, 批号 J20130078) ;拜糖平 (拜耳医药保健有限公司, 批号BJ16338) ;四氧嘧啶 (SIGMA-ALORICH, 批号 BCBK3974V) ;血糖试纸 (德国罗氏诊断有限公司, 批号:23470732) ;氯化
6、钠注射液 (四川科伦药业股份有限公司, 批号 C113050802) ;5%葡萄糖注射液 (四川科伦药业股份有限公司, 批号B13092002) 。2 动物分组及剂量设置昆明种小鼠, 雌雄各半, 清洁级, 体重 1822g, 购于江西省中医药大学动物实验中心, 动物合格证编号 SCXK (赣) 2011-0001。SD 大鼠, 雌雄各半, 清洁级, 体重 170200g, 购于湖南省斯莱克景达实验动物有限公司, 许可证号 SCXK (湘) 2013-0004, 编号 No:43004700009917。昆明种小鼠, 雄性, 清洁级, 体重 1420g, 购于江西省中医药大学动物实验中心, 动物
7、合格证编号 SCXK (赣) 2011-0001。按照体重随机分组, 分为正常对照组 (Normal, N) 、模型对照组 (Model, M) 、阳性药对照组 (Aspirin, A 或 Glucobay, GL) 、蜂胶醇提物组、白杨素组 (Chrysin, C) 、高良姜素组 (Galangin, G) 、乔松素组 (Pinocembrin, P) 共七组, 每组 8 只动物, 正常喂养。蜂胶醇提组、C 组、G 组、P 组均以小鼠 0.6g/kg 为实验剂量, 以上药物均用1%CMC-Na 溶液混匀, 备用。大鼠给药剂量按照折算系数 w=0.7 折算。以上给药量均为生药量, 给药体积为
8、10m L/kg, N 组和 M 组给予等体积蒸馏水, 每天上午 ig.给药。3 实验方法3.1 角叉菜胶致小鼠足趾肿胀模型4选用昆明种小鼠, 雌雄各半。连续给药 7d, 第 6d 禁食不禁水 12h, 第 7d 给药30min 后给小鼠的右足下注射 1%的卡拉胶 0.025m L/只, 4h 后处死动物并眼眶取血, 全血于 4冰箱冷藏静置 4h, 取上清, 按照 MDA 测试盒说明书操作测量吸光度。按照下式计算小鼠血清中 MDA 含量:3.2 角叉菜胶致大鼠足趾肿胀模型5选用 SD 大鼠, 雌雄各半。连续灌胃给药 6 天, 每天 1 次, 实验前用棉线测量各鼠的左后足周长, 末次给药 40m
9、in 后, 在大鼠左后足趾皮下进针, 注射 1%角叉菜胶溶液致炎 (0.05m L/100g) , 尔后处死大鼠, 取血清, 按照 MDA、SOD 试剂盒说明书, 测定大鼠血清中上述生化指标的含量, 根据结果观察蜂胶醇提物及其分离单体对大鼠足趾肿胀模型的影响。3.3 四氧嘧啶致小鼠高血糖模型6选取雄性昆明种小鼠, 按照体重随机选择 8 只作为正常对照组, 其他小鼠禁食 (不禁水) 24h 后, 给予腹腔注射四氧嘧啶 200mg/kg, 注射后 510h 给予 5%葡萄糖水, 24h 给予 5%葡萄糖水各一次;注射后第 4 天, 禁食不禁水 5h, 剪尾取血, 测定小鼠空腹血糖值, 判定其空腹血
10、糖值在 1025mmol/L 范围内的即为高血糖模型小鼠。选取高血糖模型小鼠 48 只, 随机分组。每天灌胃给药 1 次, 正常对照组和模型对照组给以等体积的蒸馏水, 连续给药6 天, 第 4 天禁食不禁水 5h, 给药 20min 后剪尾取血, 测空腹血糖值, 第 6 天禁食不禁水 5h, 给药 20min 后剪尾取血, 测定血糖值。4 统计方法数值用s 表示, 用 SPSS 统计软件进行处理, 组间比较采用 student-T 检验。5 实验结果5.1 蜂胶醇提物及分离单体对角叉菜胶致小鼠足趾肿胀模型的影响实验结果如表 1 所示, M 组与 N 组比较, MDA 含量升高, 且 P0.05
11、, 有差异, 显示模型组因注射角叉菜胶引起血清中 MDA 含量升高, 造模成功;C、P 与蜂胶醇提物组与 M 组比较, MDA 含量明显下降, 且 P0.01, 有显著性差异, G 组与M 组比较, 数值下降且 P0.05, 有差异, 显示白杨素组、高良姜素组、乔松素组与蜂胶醇提物组均能降低模型小鼠血清中的 MDA 含量。以上结果提示, 蜂胶醇提物及其分离单体白杨素、高良姜素、乔松素具有抑制因注射角叉菜胶引起的小鼠足趾肿胀模型中血清 MDA 含量上升的作用。表 1 蜂胶醇提物及分离单体对角叉菜胶致小鼠足趾肿胀模型血清中 MDA 含量的影响 (s, n=8) 下载原表 5.2 蜂胶醇提物及其分离
12、单体对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀模型的影响MDA 含量实验结果如表 2 所示, M 组与 N 组比较, 血清中 MDA 含量升高, 且P0.05, 有差异, 表示模型组因注射角叉菜胶引起血清中 MDA 含量升高, 造模成功;C、G、P 和蜂胶醇提物组与 M 组比较, 血清中 MDA 含量均有下降, 其中C、G 和蜂胶醇提物组 P0.05, 有差异, 而 P 组 P0.01, 有显著性差异, 提示蜂胶醇提物及其分离单体白杨素、高良姜素、乔松素, 均具有抑制大鼠足趾肿胀模型中血清 MDA 含量升高的作用, 其中乔松素的作用更为显著。SOD 活性实验结果如表 2 所示, M 组与 N 组比较, 血清中
13、SOD 活性降低, 且P0.01, 有显著性差异, 表示造模成功;A 组与 M 组比较, 数值升高, 且 P0.05, 有差异, 表示阿司匹林组对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀模型有升高 SOD 酶活性的作用;C、G、P 和蜂胶醇提物组与 M 组比较, 数值均上升, 且 P0.05, 有差异, 表示蜂胶醇提物及其三个分离单体对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀模型均具有升高SOD 酶活性的作用。表 2 蜂胶醇提物及其分离单体对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀模型的影响 (s, n=8) 下载原表 5.3 蜂胶醇提物及分离单体对四氧嘧啶致小鼠高血糖模型的影响实验结果如表 3 所示, M 组与 N 组比较, 空腹血糖值在 4
14、天、6 天均明显高于 N组, 且 P0.01, 有显著差异, 表示模型组因注射四氧嘧啶引起高血糖, 造模成功;GL 组与 M 组比较, 血糖值在 4 天、6 天均明显下降, 且 P0.05、P0.01, 有比较差异, 表示拜糖平组对四氧嘧啶所致高血糖有抑制作用;C、G、P 及蜂胶醇提物组与 M 组比较, 血糖值在 4 天、6 天均明显下降, 且 C、G、蜂胶醇提物组的 P0.05, 有差异, 其中 P 组的 P0.01, 有显著性差异, 表示蜂胶醇提物及其分离单体白杨素、高良姜素、乔松素均具有抑制四氧嘧啶所致高血糖的作用, 其中乔松素的作用更为明显。表 3 蜂胶醇提物及分离单体对四氧嘧啶致小鼠
15、高血糖模型的影响 (s, n=8) 下载原表 6 讨论前期研究结果显示7, 在蜂胶提取国标 GB/T24283-2009 的基础上增加乔松素定量测定指标, 并经过不断优化的蜂胶制备新工艺条件稳定、方法可行, 浸膏得率高, 总黄酮及白杨素、高良姜素和乔松素的量高。在此基础上, 我们对使用该提取工艺得到的蜂胶醇提物及分离单体白杨素、高良姜素、乔松素, 在抗氧化、降血糖方面进行初步的药效学探讨, 实验结果讨论如下。实验结果显示, 蜂胶醇提物及其三个分离单体白杨素、高良姜素和乔松素均能够不同程度的抑制炎症动物模型中脂质过氧化产物 MDA 含量升高、升高超氧化物歧化酶 SOD 的活力, 降低高血糖动物模
16、型的空腹血糖值, 其中乔松素降低空腹血糖值的作用较蜂胶醇提物及其他两个单体更为强烈。上述结果说明新工艺下的蜂胶醇提物及其分离单体均具有一定的抗氧化活性和降血糖作用, 且乔松素在降血糖方面的作用较其他两个单体成分作用更为显著, 这进一步肯定了在原有蜂胶提取国标上增加乔松素作为含量测定指标的必要性, 并为将来对蜂胶醇提物及其分离单体的深入研究提供了实验基础。目前对蜂胶单体成分的研究多集中在阿替匹林 C、咖啡酸苯乙酯、白杨素、高良姜素、槲皮素、染料木素等等物质上, 对乔松素的研究较少, 而值得注意的是, 蜂胶中成分的含量与种类具有极其明显的地域特性, 如阿替匹林 C 就是巴西蜂胶的特有标志性成分,
17、现有研究显示其具有良好的抗氧化活性和抗炎活性8。我国国土广阔, 各个地区的气候条件、森林资源都天差地别, 各个地区的蜂胶所含成分也会因此有所差别, 因此, 研究国产蜂胶中的主要成分, 制定其标准提取工艺流程, 有利于蜂胶的规范化使用及进一步开发利用。参考文献1张江临, 王凯, 胡福良.蜂胶的抗氧化活性及其分子机制研究进展J.中国中药杂志, 2013, 38 (16) :2 645-2 652. 2王爱霞, 缪晓青.蜂胶的降血糖作用研究现状J.中国蜂业, 2010, 61 (5) :31-33. 3李东山.蜂胶复方降糖含片的研制及其降血糖作用的实验研究D.福州:福建农林大学, 2005:23-2
18、7. 4Park E H, Kahng J H.Suppressive effects of propolis in rat adjuvant arthritisJ.Arch Pharm Res, 1999, 22 (6) :554-558. 5徐叔云, 卞如濂, 陈修.药理实验方法学 (第 2 版) M.北京:人民卫生出版社, 1991:1 428-1 432. 6杨润军, 李青旺, 赵蕊.四氧嘧啶与链脲佐菌素诱导小鼠糖尿病模型的效果比较J.西北农林科技大学学报 (自然科学版) , 2006, 34 (2) :17-20. 7吕武清, 文萍, 姚剑平, 等.蜂胶提取物制备工艺研究J.中草药, 2014, 45 (6) :791-794. 8Azevedo Bentes Monteiro Neto M, Souza Lima I M, Furtado R A, et al.Antigenotoxicity of artepillin C in vivo evaluated by the micronucleus and comet assaysJ.J Appl Toxicol, 2011, 31 (8) :714.
