1、中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B 5 0 0 9.1 4 92 0 1 6食 品 安 全 国 家 标 准食 品 中 栀 子 黄 的 测 定2 0 1 6-1 2-2 3发 布2 0 1 7-0 6-2 3实 施中 华 人 民 共 和 国 国 家 卫 生 和 计 划 生 育 委 员 会国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 总 局发 布G B 5 0 0 9.1 4 92 0 1 6 前 言 本 标 准 代 替GB5009.1492003 食 品 中 栀 子 黄 的 测 定。本 标 准 与GB5009.1492003相 比,主 要 变 化 如 下:标 准 名 称 修 改 为“食
2、品 安 全 国 家 标 准 食 品 中 栀 子 黄 的 测 定”;原 标 准 第 一 法 高 效 液 相 色 谱 法 测 定 栀 子 苷 修 改 为 高 效 液 相 色 谱 法 测 定 藏 花 素 和 藏 花 酸;改 进 了 样 品 前 处 理 分 析 方 法;扩 大 了 方 法 适 用 范 围;删 除 了 第 二 法 薄 层 色 谱 法。G B 5 0 0 9.1 4 92 0 1 61 食 品 安 全 国 家 标 准食 品 中 栀 子 黄 的 测 定1 范 围本 标 准 规 定 了 食 品 中 栀 子 黄 的 代 表 性 成 分:藏 花 素、藏 花 酸 的 测 定 方 法。本 标 准 适
3、用 于 冰 淇 淋、蜜 饯、腌 菜、干 杏 仁、巧 克 力、糕 点、熟 肉、酱 油、果 汁、配 制 酒、果 冻、薯 片 中 藏花 素 和 藏 花 酸 的 测 定。2 原 理试 样 用 甲 醇 超 声 提 取 后,通 过C 18反 相 色 谱 柱 分 离,用 高 效 液 相 色 谱/可 见 光 检 测 器 于440nm下 检测 栀 子 黄 的 主 要 显 色 成 分 藏 花 素 和 藏 花 酸,以 保 留 时 间 定 性,外 标 法 定 量。3 试 剂 和 材 料除 非 另 有 说 明,本 方 法 所 用 试 剂 均 为 分 析 纯,水 为GB/T6682规 定 的 一 级 水。3.1 试 剂3
4、.1.1 甲 醇(CH3OH):色 谱 纯。3.1.2 乙 腈(CH3CN):色 谱 纯。3.1.3 冰 乙 酸(CH3COOH)。3.1.4 乙 酸 铵(CH3COONH4)。3.2 试 剂 配 制3.2.1 乙 酸-乙 酸 铵 溶 液(pH=4):准 确 称 取0.77g乙 酸 铵 置 于1L容 量 瓶 内,加900mL水 溶 解,用 冰乙 酸 调 节pH=4.0,加 水 定 容 至1L,混 匀,经0.45m微 孔 滤 膜 过 滤 后 使 用。3.3 标 准 品3.3.1 藏 花 素 标 准 品(C 44H64O24,CAS号:42553-65-1),纯 度90.0%。3.3.2 藏 花
5、酸 标 准 品(C 20H24O4,CAS号:27876-94-4),纯 度90.0%。3.4 标 准 溶 液 配 制3.4.1 藏 花 素 标 准 储 备 液:准 确 称 取5.00mg(精 确 至0.01mg)藏 花 素 标 准 品,用 甲 醇 溶 解,转 移 到10mL容 量 瓶 中,用 甲 醇 定 容,混 匀,藏 花 素 浓 度 为0.5mg/mL,于4保 存。3.4.2 藏 花 酸 标 准 储 备 液:准 确 称 取1.00mg(精 确 至0.01mg)藏 花 酸 标 准 品,用 甲 醇 溶 解,转 移 到10mL容 量 瓶 中,用 甲 醇 定 容,混 匀,藏 花 酸 浓 度 为0.
6、1mg/mL,于4保 存。3.4.3 藏 花 素、藏 花 酸 混 合 标 准 曲 线 工 作 液:分 别 均 吸 取 藏 花 素 标 准 储 备 液、藏 花 酸 标 准 储 备 液0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL于10mL容 量 瓶 中,用 甲 醇 定 容,混 匀,藏 花 素 系 列 标 准 工 作 液 浓 度 分G B 5 0 0 9.1 4 92 0 1 62 别 均 为2.5g/mL、5g/mL、10g/mL、25g/mL、50g/mL,藏 花 酸 系 列 标 准 工 作 液 浓 度 分 别 均 为0.5g/mL、1g/mL、2g/mL、5g/mL、10g/m
7、L,于4保 存。4 仪 器 和 设 备4.1 高 效 液 相 色 谱 仪,配 置 可 见 检 测 器。4.2 分 析 天 平:感 量 为0.01mg和0.01g。4.3 离 心 机:转 速5000r/mi n。4.4 酸 度 计。4.5 超 声 波 清 洗 仪。4.6 食 品 粉 碎 机。4.7 有 机 相 型 微 孔 滤 膜:孔 径0.45m。5 分 析 步 骤5.1 试 样 制 备 及 保 存5.1.1 液 体 样 品将 饮 料、酒 类、酱 油 等 样 品 摇 匀 分 装,密 闭 常 温 或 冷 藏 保 存。5.1.2 半 固 态 样 品对 果 冻 等 样 品 取 可 食 部 分 匀 浆
8、后,搅 拌 均 匀,分 装,密 闭 冷 藏 或 冷 冻 保 存。5.1.3 固 体 样 品饼 干、糕 点、熟 肉 制 品、可 可 制 品 等 低 含 水 量 样 品,经 高 速 粉 碎 机 粉 碎、分 装,于 室 温 下 避 光 密 闭保 存。5.2 试 样 处 理5.2.1 液 体 样 品称 取2g(精 确 至0.01g)均 匀 试 样(若 试 样 中 含 二 氧 化 碳 应 先 超 声 除 去)置 于 烧 杯 中,用 适 量 甲 醇 溶解 并 转 移 至25mL容 量 瓶 中,加 甲 醇 定 容,摇 匀。吸 取1mL溶 液 过0.45m有 机 滤 膜,待 测。5.2.2 半 固 体 试 样
9、 及 固 体 试 样称 取2g(精 确 至0.01g)均 匀 试 样 于50mL离 心 管 中,准 确 量 取25mL甲 醇 溶 液 加 入 其 中,超 声20mi n后 涡 旋2mi n,4000r/mi n离 心10mi n,吸 取1mL上 清 液 过0.45m有 机 滤 膜,待 测。5.2.3 酱 油称 取1g(精 确 至0.01g)均 匀 试 样 置 于 烧 杯 中,用 适 量 甲 醇 溶 解 并 转 移 至50mL容 量 瓶 中,加 甲 醇定 容,摇 匀。吸 取1mL溶 液 过0.45m有 机 滤 膜,待 测。注:5.2过 程 应 在 避 免 强 光 照 射 的 环 境 下 进 行。
10、5.3 仪 器 参 考 条 件仪 器 参 考 条 件 列 出 如 下:G B 5 0 0 9.1 4 92 0 1 63 a)色 谱 柱:C 18色 谱 柱,柱 长250mm,内 径4.6mm,粒 径5m,或 同 等 性 能 的 色 谱 柱;b)流 动 相:A:乙 酸-乙 酸 铵 缓 冲 溶 液,B:乙 腈,梯 度 洗 脱 见 表1;c)进 样 量:10L;d)流 速:1.0mL/mi n;e)检 测 波 长:440nm。表1 流 动 相 及 梯 度 洗 脱 条 件时 间mi n流 速mL/mi n流 动 相A%流 动 相B%0 1.0 80 201 1.0 80 208 1.0 40 608
11、.1 1.0 30 7013 1.0 2 9815 1.0 80 2020 1.0 80 205.4 标 准 曲 线 的 制 作将 混 合 标 准 工 作 液 分 别 注 入 高 效 液 相 色 谱 仪 中,测 定 藏 花 素 和 藏 花 酸 相 应 的 峰 面 积,以 标 准 工 作 液的 浓 度 为 横 坐 标,以 色 谱 峰 面 积 为 纵 坐 标,绘 制 标 准 曲 线(标 准 图 谱 见 图A.1)。5.5 试 样 溶 液 的 测 定将 试 样 溶 液 注 入 高 效 液 相 色 谱 仪 中,得 到 藏 花 素 和 藏 花 酸 的 峰 面 积,根 据 标 准 曲 线 得 到 待 测
12、液 中 藏花 素 和 藏 花 酸 的 浓 度。6 分 析 结 果 的 表 述试 样 中 藏 花 素 和 藏 花 酸 的 含 量 按 式(1)计 算:X=V 1000m 1000 1000 F(1)式 中:X 试 样 中 藏 花 素 或 藏 花 酸 的 含 量,单 位 为 克 每 千 克(g/kg);由 标 准 曲 线 求 得 试 样 溶 液 中 藏 花 素 或 藏 花 酸 的 浓 度,单 位 为 微 克 每 毫 升(g/mL);V 样 品 溶 液 定 容 体 积,单 位 为(mL);1000 换 算 系 数;m 最 终 样 液 代 表 的 试 样 质 量,单 位 为 克(g);F 标 准 品
13、的 纯 度 折 算 系 数。计 算 结 果 保 留 两 位 有 效 数 字。7 精 密 度在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 绝 对 差 值 不 得 超 过 算 术 平 均 值 的15%。G B 5 0 0 9.1 4 92 0 1 64 8 其 他方 法 检 出 限(LOD):酱 油 样 品 当 称 样 量 为1.0g时,藏 花 素 为50mg/kg,藏 花 酸 为10.0mg/kg,其他 样 品 取 样 量 为2.0g时,藏 花 素 为12.5mg/kg,藏 花 酸 为2.5mg/kg。方 法 定 量 限(LOQ):酱 油 样 品 当 称 样 量 为1.0g时,藏 花 素 为250mg/kg,藏 花 酸 为50.0mg/kg,其他 样 品 取 样 量 为2.0g时,藏 花 素 为62.5mg/kg,藏 花 酸 为12.5mg/kg。G B 5 0 0 9.1 4 92 0 1 65 附 录 A藏 花 素 和 藏 花 酸 的 标 准 色 谱 图 藏 花 素 和 藏 花 酸 标 准 色 谱 图 见 图A.1。图A.1 藏 花 素 和 藏 花 酸 的 标 准 色 谱 图(藏 花 素 浓 度5 0 g/m L,藏 花 酸 浓 度1 0 g/m L)
