1、 Ar.A4 Chemically Competent Cell 产品说明书 产品规格（CAT#：AC1050） Ar.A4 Competent Cell 100l10 pK7WGF2 (control vector, 10ng/l) 10l 保存条件（保质期）： -80（12个月） 基因型 Agrobacterium rhizogenes(kanR ) Ar A4 Ri(agropine type) 产品说明 发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染 大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4
2、发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒，具 有广泛的宿主范围（玉米，烟草，胡萝卜，甘草等），同时具有卡那霉素抗性。本公司生产的Ar.A4化学 转化感受态细胞经特殊工艺制作，pK7WGF2质粒（壮观霉素抗性）检测，转化效率104cfu/g DNA。 常规操作方法 1.取-80保存的Ar.A4发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。 2. 每100l感受态加入0.01-1 g质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37水浴5分钟、冰浴5分钟。 3. 冰浴中拿出放
3、室温，加入700l 无抗生素的TY 液体培养基，于 28振荡培养 2小时。 4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 l 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上，倒置放于 28培养箱培养 2-3 天 农杆菌相关抗生素配方： 抗生素 配方 原液 工作液 羧苄青霉素 (carb) 双蒸水溶解，0.22 m滤膜过滤除菌 50 mg/ml 50 g/ml 硫酸卡那霉素 (kan) 双蒸水溶解，0.22 m滤膜过滤除菌 50 mg/ml 50 g/ml 链霉素 (strep) 双蒸水溶解，0.22 m滤膜过滤除菌 10 mg/ml 50 g/ml 利福平 (rif) DMS
4、O溶解，0.22 m滤膜过滤除菌 10 mg/ml 20 g/ml 庆大霉素 (gent) 双蒸水溶解，0.22 m滤膜过滤除菌 20 mg/ml 40 g/ml 氯霉素（cam） 无水乙醇溶解，0.22 m滤膜过滤除菌 34 mg/ml 34 ug/ml 常用农杆菌抗性： (R：抗；S：敏感。) 农杆菌菌株 羧苄青霉素(carb) 链霉素(strep) 利福平(rif) 氯霉素(gent) 硫酸卡那霉素(kan) Ar.A4 S S S S R MSU440 S R S S S Ar.Qual S R S R S TY配方（1L）： Tryptone 5g Yeast extract 3g
5、补水到1L体积，完全溶解后，121度、20分钟高温灭菌 配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌 每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。 若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。 注意事项 1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。 2. 混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。 4. Ar.A4具有卡那霉素抗性，不可用于具有卡那霉素抗性质粒的转化。
