1、生物化学与分子生物学专业毕业论文 精品论文 从深海沉积物中分离所得一株产壳聚糖酶的芽孢杆菌及其酶性质的研究关键词：芽孢杆菌 壳聚糖酶 抑菌活性 差异表达 深海沉积物摘要：通过功能平板的筛选，从西太平洋沉积物中获得一株高效降解壳聚糖的菌株。经 16S rDNA 的测序分析，该菌株属于芽孢杆菌属(Bacilli)。它能够分泌组成型胞外壳聚糖酶。其最适生长温度为 30，最适的培养基为不含 Nacl的 2216E 培养基，能够耐受的最大压力为 30Mpa。利用相似菌株的已知序列设计 PCR 引物，成功扩增出一条长约 1.7kb 的 DNA 片段，该片段包含一个编码有453 个氨基酸的壳聚糖酶序列。对该
2、蛋白进行序列分析，其分子量为50.643KDa，N 末端具有 30 个氨基酸的信号肽。将所获得的序列克隆到表达载体 pLLp-OMPA 上，并获得大量纯化蛋白。通过对该酶蛋白性质的研究，其最适的反应温度为 65，最适 pH 为 6.0；该酶为内切酶，能够降解壳聚糖最终产生二糖和三糖；该酶蛋白只对壳聚糖具有降解作用，在一定的聚合度内，其降解能力随着多糖链的增加而增强，它能够降解的最小多糖链为 4 糖。通过对部分酶解壳聚(寡)糖抑菌活性的研究，当壳聚糖的平均分子量大于 45KD 时对芽孢杆菌才具有明显的抑制作用。应激实验结果表明，当培养基中不含有壳聚糖时，在 30Mpa 压力应激 2 小时，壳聚糖
3、酶的表达量明显下降；而当培养基中含有0.5壳聚糖时，同样的压力应激下，壳聚糖酶的表达量基本没有变化。这表明了该菌株对深海环境的适应。为了进一步提高壳聚糖酶的工业化生产价值，我们利用热诱导载体 PBV220 对壳聚糖酶进行表达并获得成功，为进一步的大批量生产壳聚糖酶提供良好的工程菌株。正文内容通过功能平板的筛选，从西太平洋沉积物中获得一株高效降解壳聚糖的菌株。经 16S rDNA 的测序分析，该菌株属于芽孢杆菌属(Bacilli)。它能够分泌组成型胞外壳聚糖酶。其最适生长温度为 30，最适的培养基为不含 Nacl 的2216E 培养基，能够耐受的最大压力为 30Mpa。利用相似菌株的已知序列设计
4、PCR 引物，成功扩增出一条长约 1.7kb 的 DNA 片段，该片段包含一个编码有 453个氨基酸的壳聚糖酶序列。对该蛋白进行序列分析，其分子量为 50.643KDa，N末端具有 30 个氨基酸的信号肽。将所获得的序列克隆到表达载体 pLLp-OMPA 上，并获得大量纯化蛋白。通过对该酶蛋白性质的研究，其最适的反应温度为 65，最适 pH 为 6.0；该酶为内切酶，能够降解壳聚糖最终产生二糖和三糖；该酶蛋白只对壳聚糖具有降解作用，在一定的聚合度内，其降解能力随着多糖链的增加而增强，它能够降解的最小多糖链为 4 糖。通过对部分酶解壳聚(寡)糖抑菌活性的研究，当壳聚糖的平均分子量大于 45KD
5、时对芽孢杆菌才具有明显的抑制作用。应激实验结果表明，当培养基中不含有壳聚糖时，在 30Mpa 压力应激 2小时，壳聚糖酶的表达量明显下降；而当培养基中含有 0.5壳聚糖时，同样的压力应激下，壳聚糖酶的表达量基本没有变化。这表明了该菌株对深海环境的适应。为了进一步提高壳聚糖酶的工业化生产价值，我们利用热诱导载体PBV220 对壳聚糖酶进行表达并获得成功，为进一步的大批量生产壳聚糖酶提供良好的工程菌株。通过功能平板的筛选，从西太平洋沉积物中获得一株高效降解壳聚糖的菌株。经 16S rDNA 的测序分析，该菌株属于芽孢杆菌属(Bacilli)。它能够分泌组成型胞外壳聚糖酶。其最适生长温度为 30，最
6、适的培养基为不含 Nacl 的 2216E培养基，能够耐受的最大压力为 30Mpa。利用相似菌株的已知序列设计 PCR 引物，成功扩增出一条长约 1.7kb 的 DNA 片段，该片段包含一个编码有 453 个氨基酸的壳聚糖酶序列。对该蛋白进行序列分析，其分子量为 50.643KDa，N 末端具有 30 个氨基酸的信号肽。将所获得的序列克隆到表达载体 pLLp-OMPA 上，并获得大量纯化蛋白。通过对该酶蛋白性质的研究，其最适的反应温度为 65，最适 pH 为 6.0；该酶为内切酶，能够降解壳聚糖最终产生二糖和三糖；该酶蛋白只对壳聚糖具有降解作用，在一定的聚合度内，其降解能力随着多糖链的增加而增
7、强，它能够降解的最小多糖链为 4 糖。通过对部分酶解壳聚(寡)糖抑菌活性的研究，当壳聚糖的平均分子量大于 45KD 时对芽孢杆菌才具有明显的抑制作用。应激实验结果表明，当培养基中不含有壳聚糖时，在 30Mpa 压力应激 2小时，壳聚糖酶的表达量明显下降；而当培养基中含有 0.5壳聚糖时，同样的压力应激下，壳聚糖酶的表达量基本没有变化。这表明了该菌株对深海环境的适应。为了进一步提高壳聚糖酶的工业化生产价值，我们利用热诱导载体PBV220 对壳聚糖酶进行表达并获得成功，为进一步的大批量生产壳聚糖酶提供良好的工程菌株。通过功能平板的筛选，从西太平洋沉积物中获得一株高效降解壳聚糖的菌株。经 16S r
8、DNA 的测序分析，该菌株属于芽孢杆菌属(Bacilli)。它能够分泌组成型胞外壳聚糖酶。其最适生长温度为 30，最适的培养基为不含 Nacl 的 2216E培养基，能够耐受的最大压力为 30Mpa。利用相似菌株的已知序列设计 PCR 引物，成功扩增出一条长约 1.7kb 的 DNA 片段，该片段包含一个编码有 453 个氨基酸的壳聚糖酶序列。对该蛋白进行序列分析，其分子量为 50.643KDa，N 末端具有 30 个氨基酸的信号肽。将所获得的序列克隆到表达载体 pLLp-OMPA 上，并获得大量纯化蛋白。通过对该酶蛋白性质的研究，其最适的反应温度为 65，最适 pH 为 6.0；该酶为内切酶
9、，能够降解壳聚糖最终产生二糖和三糖；该酶蛋白只对壳聚糖具有降解作用，在一定的聚合度内，其降解能力随着多糖链的增加而增强，它能够降解的最小多糖链为 4 糖。通过对部分酶解壳聚(寡)糖抑菌活性的研究，当壳聚糖的平均分子量大于 45KD 时对芽孢杆菌才具有明显的抑制作用。应激实验结果表明，当培养基中不含有壳聚糖时，在 30Mpa 压力应激 2小时，壳聚糖酶的表达量明显下降；而当培养基中含有 0.5壳聚糖时，同样的压力应激下，壳聚糖酶的表达量基本没有变化。这表明了该菌株对深海环境的适应。为了进一步提高壳聚糖酶的工业化生产价值，我们利用热诱导载体PBV220 对壳聚糖酶进行表达并获得成功，为进一步的大批
10、量生产壳聚糖酶提供良好的工程菌株。通过功能平板的筛选，从西太平洋沉积物中获得一株高效降解壳聚糖的菌株。经 16S rDNA 的测序分析，该菌株属于芽孢杆菌属(Bacilli)。它能够分泌组成型胞外壳聚糖酶。其最适生长温度为 30，最适的培养基为不含 Nacl 的 2216E培养基，能够耐受的最大压力为 30Mpa。利用相似菌株的已知序列设计 PCR 引物，成功扩增出一条长约 1.7kb 的 DNA 片段，该片段包含一个编码有 453 个氨基酸的壳聚糖酶序列。对该蛋白进行序列分析，其分子量为 50.643KDa，N 末端具有 30 个氨基酸的信号肽。将所获得的序列克隆到表达载体 pLLp-OMP
11、A 上，并获得大量纯化蛋白。通过对该酶蛋白性质的研究，其最适的反应温度为 65，最适 pH 为 6.0；该酶为内切酶，能够降解壳聚糖最终产生二糖和三糖；该酶蛋白只对壳聚糖具有降解作用，在一定的聚合度内，其降解能力随着多糖链的增加而增强，它能够降解的最小多糖链为 4 糖。通过对部分酶解壳聚(寡)糖抑菌活性的研究，当壳聚糖的平均分子量大于 45KD 时对芽孢杆菌才具有明显的抑制作用。应激实验结果表明，当培养基中不含有壳聚糖时，在 30Mpa 压力应激 2小时，壳聚糖酶的表达量明显下降；而当培养基中含有 0.5壳聚糖时，同样的压力应激下，壳聚糖酶的表达量基本没有变化。这表明了该菌株对深海环境的适应。
12、为了进一步提高壳聚糖酶的工业化生产价值，我们利用热诱导载体PBV220 对壳聚糖酶进行表达并获得成功，为进一步的大批量生产壳聚糖酶提供良好的工程菌株。通过功能平板的筛选，从西太平洋沉积物中获得一株高效降解壳聚糖的菌株。经 16S rDNA 的测序分析，该菌株属于芽孢杆菌属(Bacilli)。它能够分泌组成型胞外壳聚糖酶。其最适生长温度为 30，最适的培养基为不含 Nacl 的 2216E培养基，能够耐受的最大压力为 30Mpa。利用相似菌株的已知序列设计 PCR 引物，成功扩增出一条长约 1.7kb 的 DNA 片段，该片段包含一个编码有 453 个氨基酸的壳聚糖酶序列。对该蛋白进行序列分析，
13、其分子量为 50.643KDa，N 末端具有 30 个氨基酸的信号肽。将所获得的序列克隆到表达载体 pLLp-OMPA 上，并获得大量纯化蛋白。通过对该酶蛋白性质的研究，其最适的反应温度为 65，最适 pH 为 6.0；该酶为内切酶，能够降解壳聚糖最终产生二糖和三糖；该酶蛋白只对壳聚糖具有降解作用，在一定的聚合度内，其降解能力随着多糖链的增加而增强，它能够降解的最小多糖链为 4 糖。通过对部分酶解壳聚(寡)糖抑菌活性的研究，当壳聚糖的平均分子量大于 45KD 时对芽孢杆菌才具有明显的抑制作用。应激实验结果表明，当培养基中不含有壳聚糖时，在 30Mpa 压力应激 2小时，壳聚糖酶的表达量明显下降
14、；而当培养基中含有 0.5壳聚糖时，同样的压力应激下，壳聚糖酶的表达量基本没有变化。这表明了该菌株对深海环境的适应。为了进一步提高壳聚糖酶的工业化生产价值，我们利用热诱导载体PBV220 对壳聚糖酶进行表达并获得成功，为进一步的大批量生产壳聚糖酶提供良好的工程菌株。通过功能平板的筛选，从西太平洋沉积物中获得一株高效降解壳聚糖的菌株。经 16S rDNA 的测序分析，该菌株属于芽孢杆菌属(Bacilli)。它能够分泌组成型胞外壳聚糖酶。其最适生长温度为 30，最适的培养基为不含 Nacl 的 2216E培养基，能够耐受的最大压力为 30Mpa。利用相似菌株的已知序列设计 PCR 引物，成功扩增出
15、一条长约 1.7kb 的 DNA 片段，该片段包含一个编码有 453 个氨基酸的壳聚糖酶序列。对该蛋白进行序列分析，其分子量为 50.643KDa，N 末端具有 30 个氨基酸的信号肽。将所获得的序列克隆到表达载体 pLLp-OMPA 上，并获得大量纯化蛋白。通过对该酶蛋白性质的研究，其最适的反应温度为 65，最适 pH 为 6.0；该酶为内切酶，能够降解壳聚糖最终产生二糖和三糖；该酶蛋白只对壳聚糖具有降解作用，在一定的聚合度内，其降解能力随着多糖链的增加而增强，它能够降解的最小多糖链为 4 糖。通过对部分酶解壳聚(寡)糖抑菌活性的研究，当壳聚糖的平均分子量大于 45KD 时对芽孢杆菌才具有明
16、显的抑制作用。应激实验结果表明，当培养基中不含有壳聚糖时，在 30Mpa 压力应激 2小时，壳聚糖酶的表达量明显下降；而当培养基中含有 0.5壳聚糖时，同样的压力应激下，壳聚糖酶的表达量基本没有变化。这表明了该菌株对深海环境的适应。为了进一步提高壳聚糖酶的工业化生产价值，我们利用热诱导载体PBV220 对壳聚糖酶进行表达并获得成功，为进一步的大批量生产壳聚糖酶提供良好的工程菌株。通过功能平板的筛选，从西太平洋沉积物中获得一株高效降解壳聚糖的菌株。经 16S rDNA 的测序分析，该菌株属于芽孢杆菌属(Bacilli)。它能够分泌组成型胞外壳聚糖酶。其最适生长温度为 30，最适的培养基为不含 N
17、acl 的 2216E培养基，能够耐受的最大压力为 30Mpa。利用相似菌株的已知序列设计 PCR 引物，成功扩增出一条长约 1.7kb 的 DNA 片段，该片段包含一个编码有 453 个氨基酸的壳聚糖酶序列。对该蛋白进行序列分析，其分子量为 50.643KDa，N 末端具有 30 个氨基酸的信号肽。将所获得的序列克隆到表达载体 pLLp-OMPA 上，并获得大量纯化蛋白。通过对该酶蛋白性质的研究，其最适的反应温度为 65，最适 pH 为 6.0；该酶为内切酶，能够降解壳聚糖最终产生二糖和三糖；该酶蛋白只对壳聚糖具有降解作用，在一定的聚合度内，其降解能力随着多糖链的增加而增强，它能够降解的最小
18、多糖链为 4 糖。通过对部分酶解壳聚(寡)糖抑菌活性的研究，当壳聚糖的平均分子量大于 45KD 时对芽孢杆菌才具有明显的抑制作用。应激实验结果表明，当培养基中不含有壳聚糖时，在 30Mpa 压力应激 2小时，壳聚糖酶的表达量明显下降；而当培养基中含有 0.5壳聚糖时，同样的压力应激下，壳聚糖酶的表达量基本没有变化。这表明了该菌株对深海环境的适应。为了进一步提高壳聚糖酶的工业化生产价值，我们利用热诱导载体PBV220 对壳聚糖酶进行表达并获得成功，为进一步的大批量生产壳聚糖酶提供良好的工程菌株。通过功能平板的筛选，从西太平洋沉积物中获得一株高效降解壳聚糖的菌株。经 16S rDNA 的测序分析，
19、该菌株属于芽孢杆菌属(Bacilli)。它能够分泌组成型胞外壳聚糖酶。其最适生长温度为 30，最适的培养基为不含 Nacl 的 2216E培养基，能够耐受的最大压力为 30Mpa。利用相似菌株的已知序列设计 PCR 引物，成功扩增出一条长约 1.7kb 的 DNA 片段，该片段包含一个编码有 453 个氨基酸的壳聚糖酶序列。对该蛋白进行序列分析，其分子量为 50.643KDa，N 末端具有 30 个氨基酸的信号肽。将所获得的序列克隆到表达载体 pLLp-OMPA 上，并获得大量纯化蛋白。通过对该酶蛋白性质的研究，其最适的反应温度为 65，最适 pH 为 6.0；该酶为内切酶，能够降解壳聚糖最终
20、产生二糖和三糖；该酶蛋白只对壳聚糖具有降解作用，在一定的聚合度内，其降解能力随着多糖链的增加而增强，它能够降解的最小多糖链为 4 糖。通过对部分酶解壳聚(寡)糖抑菌活性的研究，当壳聚糖的平均分子量大于 45KD 时对芽孢杆菌才具有明显的抑制作用。应激实验结果表明，当培养基中不含有壳聚糖时，在 30Mpa 压力应激 2小时，壳聚糖酶的表达量明显下降；而当培养基中含有 0.5壳聚糖时，同样的压力应激下，壳聚糖酶的表达量基本没有变化。这表明了该菌株对深海环境的适应。为了进一步提高壳聚糖酶的工业化生产价值，我们利用热诱导载体PBV220 对壳聚糖酶进行表达并获得成功，为进一步的大批量生产壳聚糖酶提供良
21、好的工程菌株。通过功能平板的筛选，从西太平洋沉积物中获得一株高效降解壳聚糖的菌株。经 16S rDNA 的测序分析，该菌株属于芽孢杆菌属(Bacilli)。它能够分泌组成型胞外壳聚糖酶。其最适生长温度为 30，最适的培养基为不含 Nacl 的 2216E培养基，能够耐受的最大压力为 30Mpa。利用相似菌株的已知序列设计 PCR 引物，成功扩增出一条长约 1.7kb 的 DNA 片段，该片段包含一个编码有 453 个氨基酸的壳聚糖酶序列。对该蛋白进行序列分析，其分子量为 50.643KDa，N 末端具有 30 个氨基酸的信号肽。将所获得的序列克隆到表达载体 pLLp-OMPA 上，并获得大量纯
22、化蛋白。通过对该酶蛋白性质的研究，其最适的反应温度为 65，最适 pH 为 6.0；该酶为内切酶，能够降解壳聚糖最终产生二糖和三糖；该酶蛋白只对壳聚糖具有降解作用，在一定的聚合度内，其降解能力随着多糖链的增加而增强，它能够降解的最小多糖链为 4 糖。通过对部分酶解壳聚(寡)糖抑菌活性的研究，当壳聚糖的平均分子量大于 45KD 时对芽孢杆菌才具有明显的抑制作用。应激实验结果表明，当培养基中不含有壳聚糖时，在 30Mpa 压力应激 2小时，壳聚糖酶的表达量明显下降；而当培养基中含有 0.5壳聚糖时，同样的压力应激下，壳聚糖酶的表达量基本没有变化。这表明了该菌株对深海环境的适应。为了进一步提高壳聚糖
23、酶的工业化生产价值，我们利用热诱导载体PBV220 对壳聚糖酶进行表达并获得成功，为进一步的大批量生产壳聚糖酶提供良好的工程菌株。通过功能平板的筛选，从西太平洋沉积物中获得一株高效降解壳聚糖的菌株。经 16S rDNA 的测序分析，该菌株属于芽孢杆菌属(Bacilli)。它能够分泌组成型胞外壳聚糖酶。其最适生长温度为 30，最适的培养基为不含 Nacl 的 2216E培养基，能够耐受的最大压力为 30Mpa。利用相似菌株的已知序列设计 PCR 引物，成功扩增出一条长约 1.7kb 的 DNA 片段，该片段包含一个编码有 453 个氨基酸的壳聚糖酶序列。对该蛋白进行序列分析，其分子量为 50.6
24、43KDa，N 末端具有 30 个氨基酸的信号肽。将所获得的序列克隆到表达载体 pLLp-OMPA 上，并获得大量纯化蛋白。通过对该酶蛋白性质的研究，其最适的反应温度为 65，最适 pH 为 6.0；该酶为内切酶，能够降解壳聚糖最终产生二糖和三糖；该酶蛋白只对壳聚糖具有降解作用，在一定的聚合度内，其降解能力随着多糖链的增加而增强，它能够降解的最小多糖链为 4 糖。通过对部分酶解壳聚(寡)糖抑菌活性的研究，当壳聚糖的平均分子量大于 45KD 时对芽孢杆菌才具有明显的抑制作用。应激实验结果表明，当培养基中不含有壳聚糖时，在 30Mpa 压力应激 2小时，壳聚糖酶的表达量明显下降；而当培养基中含有
25、0.5壳聚糖时，同样的压力应激下，壳聚糖酶的表达量基本没有变化。这表明了该菌株对深海环境的适应。为了进一步提高壳聚糖酶的工业化生产价值，我们利用热诱导载体PBV220 对壳聚糖酶进行表达并获得成功，为进一步的大批量生产壳聚糖酶提供良好的工程菌株。特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258 ，提供原格式文档。“垐垯櫃 换烫梯葺铑?endstreamendobj2x 滌?U 閩 AZ箾 FTP 鈦X 飼?狛P? 燚?琯嫼 b?袍*甒?颙嫯?4)=r 宵
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