1、神经外科学专业优秀论文 人脑瘤裸小鼠原位移植模型的亲本性探索关键词：人脑胶质瘤 裸小鼠模型 原位移植模型 亲本性摘要：目的： （1）通过改良肿瘤组织移植的方法以获得良好的人脑胶质瘤裸小鼠脑内移植模型。在此基础上，去建立人脑多形性胶质母细胞瘤（glioblastoma multiform，GBM）和人肺腺癌脑转移瘤的裸小鼠模型，并探知其生物学特性能否保持其亲本肿瘤的特性。 （2）培育表达绿色荧光蛋白（green fluoresent protein，GFP）的裸小鼠，将其用于人胶质瘤干细胞（human glioma stem cells，HGSCs）移植实验研究，并阐明 HGSCs 在宿主脑组织
2、中具有播散和融合其它细胞的特征，以用于肿瘤组织重构的研究。 方法：（1）先用 SHG44 胶质瘤细胞（1107）注射于裸小鼠皮下，形成皮下移植瘤，再把皮下移植瘤组织通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，并调整肿瘤的体积为 2.0mm3，然后把定量要移植的肿瘤组织块植入裸小鼠右尾状核，制作成裸小鼠脑内移植瘤模型。观察移植后裸小鼠生存状态。30d 后解剖裸小鼠取脑并行病理切片，观察原位移植瘤的形态、病理学特征和成瘤率。 （2）将体外培养高表达表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）的人脑 GBM 细胞，在立体定向仪辅助下行裸小鼠右尾状核
3、接种；继而将致瘤的组织通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，然后将2.0mm3 的肿瘤组织经徒手操作接种子裸小鼠右尾状核，致瘤后即用裸小鼠的瘤组织再进行原位传代接种。接种后观察移植瘤的生长特性，并分析 EGFR 在各代移植瘤中的表达。 （3）取人肺腺癌脑转移瘤组织块，通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，然后将 2.0mm3 的肿瘤组织经徒手操作接种于裸小鼠右尾状核。致瘤后即用裸小鼠的瘤组织再进行原位传代接种，然后观察致瘤率及荷瘤鼠生存期；HE 染色分析各代移植瘤的组织学形态；MRI 观察移植瘤在鼠脑内的大体形态；免疫组化染色观察移植瘤中 CEA 的表达；Alcian blue
4、/PAS特殊染色检测移植瘤中粘液的性质。 （4）将 C57BL/6JGFP 转基因小鼠与NC 系裸小鼠进行交配，在继代时严格挑选都表达 GFP 的无毛雄鼠（）与有毛雌鼠（）交配，通过肉眼和荧光显微镜等方法观察 GFP 在裸小鼠皮肤和脏器中的表达情况，继将 HGSCs 原位移植于表达 GFP 的裸小鼠，以观察移植瘤的生长情况。 结果： （1）通过改良的肿瘤组织块移植后，18 只裸小鼠除 3只接种当日死亡外，其余 15 只于移植后 30d 被处死取脑行冰冻切片，HE 染色在光镜下见移植瘤侵袭性生长。致瘤率为 93%（14/15） 。 （2）人 GBM 移植瘤组织在裸小鼠尾状核已连续传至 13 代，
5、共 130 只鼠，荷瘤鼠生存期为191.33d。移植瘤病理学符合呈高度侵袭性生长、EGFR 过表达的人脑 GBM 的特征。不同时间测得的肿瘤增殖曲线提示，致瘤的潜伏期短（lt;3d） ，持续快速增殖期长（gt;15d） ，进入晚期至死亡时间短（lt;3d） 。 （3）人肺腺癌脑转移瘤组织在裸小鼠右尾状核已连续传至 6 代，共 65 只鼠。荷瘤鼠生存期：原代为 47.61.8d，23 代有所缩短，46 代稳定在38.00.9d；移植瘤病理为低分化腺癌，不向周围正常鼠脑组织侵袭；MRI 示移植瘤类圆形，瘤周无水肿，与临床病例的 MRI 一致；移植瘤中癌胚抗原（carcinoembryonic an
6、tigen，CEA）表达阳性，并有酸性粘液存在。 （4）GFP 荧光裸小鼠已传至 8 代，包括脑在内的全身主要器官和细胞都发绿色荧光。对用于 HGSCs 原位移植的脑，能清晰辨认出不发光的瘤细胞和发光的宿主细胞。而瘤细胞经抗人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）抗体偶联红色荧光剂（PE）的免疫组织化学染色后，在共聚焦显微镜下可清晰显示HGSCs 与宿主脑细胞的组织学关系是：多数播散，个别的发生细胞与细胞融合。结论： （1）通过改良的组织定量移植具有操作简便，对小鼠创伤小，速度快，成瘤率高，便于批量制作原位移植裸小鼠模型。 （2）人 GBM 肿瘤组织于鼠尾状核接
7、种比传统的肿瘤细胞悬液接种，非但接种的细胞量大，还能将支持肿瘤细胞增殖的间质等其它成分一并植入，能较好体现临床上呈侵袭生长和过表达 EGFR 的高度恶性胶质瘤的特征。 （3）人肺腺癌脑转移瘤组织块接种于鼠脑内建立的原位移植模型能更好地模拟临床原发肿瘤呈现低分化的病理学特征，并且具有缺乏侵袭性及 CEA 高表达的生物学特性，说明本方法为研究人肺腺癌脑转移瘤的生物学特性及实验治疗提供了一个可靠的动物模型。 （4）用免疫功能健全、表达 GFP 的转基因鼠与免疫功能缺陷的裸小鼠杂交，可获得脑等组织器官表达 GFP 的裸小鼠。对其进行 HGSCs 原位移植，因可清晰辨认移植瘤与宿主组织的关系而有望用于肿
8、瘤组织重构的研究。正文内容目的： （1）通过改良肿瘤组织移植的方法以获得良好的人脑胶质瘤裸小鼠脑内移植模型。在此基础上，去建立人脑多形性胶质母细胞瘤（glioblastoma multiform，GBM）和人肺腺癌脑转移瘤的裸小鼠模型，并探知其生物学特性能否保持其亲本肿瘤的特性。 （2）培育表达绿色荧光蛋白（green fluoresent protein，GFP）的裸小鼠，将其用于人胶质瘤干细胞（human glioma stem cells，HGSCs）移植实验研究，并阐明 HGSCs 在宿主脑组织中具有播散和融合其它细胞的特征，以用于肿瘤组织重构的研究。 方法：（1）先用 SHG44 胶
9、质瘤细胞（1107）注射于裸小鼠皮下，形成皮下移植瘤，再把皮下移植瘤组织通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，并调整肿瘤的体积为 2.0mm3，然后把定量要移植的肿瘤组织块植入裸小鼠右尾状核，制作成裸小鼠脑内移植瘤模型。观察移植后裸小鼠生存状态。30d 后解剖裸小鼠取脑并行病理切片，观察原位移植瘤的形态、病理学特征和成瘤率。 （2）将体外培养高表达表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）的人脑 GBM 细胞，在立体定向仪辅助下行裸小鼠右尾状核接种；继而将致瘤的组织通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，然后将2.0mm3 的肿
10、瘤组织经徒手操作接种子裸小鼠右尾状核，致瘤后即用裸小鼠的瘤组织再进行原位传代接种。接种后观察移植瘤的生长特性，并分析 EGFR 在各代移植瘤中的表达。 （3）取人肺腺癌脑转移瘤组织块，通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，然后将 2.0mm3 的肿瘤组织经徒手操作接种于裸小鼠右尾状核。致瘤后即用裸小鼠的瘤组织再进行原位传代接种，然后观察致瘤率及荷瘤鼠生存期；HE 染色分析各代移植瘤的组织学形态；MRI 观察移植瘤在鼠脑内的大体形态；免疫组化染色观察移植瘤中 CEA 的表达；Alcian blue/PAS特殊染色检测移植瘤中粘液的性质。 （4）将 C57BL/6JGFP 转基因小鼠与NC
11、 系裸小鼠进行交配，在继代时严格挑选都表达 GFP 的无毛雄鼠（）与有毛雌鼠（）交配，通过肉眼和荧光显微镜等方法观察 GFP 在裸小鼠皮肤和脏器中的表达情况，继将 HGSCs 原位移植于表达 GFP 的裸小鼠，以观察移植瘤的生长情况。 结果： （1）通过改良的肿瘤组织块移植后，18 只裸小鼠除 3只接种当日死亡外，其余 15 只于移植后 30d 被处死取脑行冰冻切片，HE 染色在光镜下见移植瘤侵袭性生长。致瘤率为 93%（14/15） 。 （2）人 GBM 移植瘤组织在裸小鼠尾状核已连续传至 13 代，共 130 只鼠，荷瘤鼠生存期为191.33d。移植瘤病理学符合呈高度侵袭性生长、EGFR
12、过表达的人脑 GBM 的特征。不同时间测得的肿瘤增殖曲线提示，致瘤的潜伏期短（lt;3d） ，持续快速增殖期长（gt;15d） ，进入晚期至死亡时间短（lt;3d） 。 （3）人肺腺癌脑转移瘤组织在裸小鼠右尾状核已连续传至 6 代，共 65 只鼠。荷瘤鼠生存期：原代为 47.61.8d，23 代有所缩短，46 代稳定在38.00.9d；移植瘤病理为低分化腺癌，不向周围正常鼠脑组织侵袭；MRI 示移植瘤类圆形，瘤周无水肿，与临床病例的 MRI 一致；移植瘤中癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）表达阳性，并有酸性粘液存在。 （4）GFP 荧光裸小鼠已传至 8 代，包
13、括脑在内的全身主要器官和细胞都发绿色荧光。对用于 HGSCs 原位移植的脑，能清晰辨认出不发光的瘤细胞和发光的宿主细胞。而瘤细胞经抗人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）抗体偶联红色荧光剂（PE）的免疫组织化学染色后，在共聚焦显微镜下可清晰显示HGSCs 与宿主脑细胞的组织学关系是：多数播散，个别的发生细胞与细胞融合。结论： （1）通过改良的组织定量移植具有操作简便，对小鼠创伤小，速度快，成瘤率高，便于批量制作原位移植裸小鼠模型。 （2）人 GBM 肿瘤组织于鼠尾状核接种比传统的肿瘤细胞悬液接种，非但接种的细胞量大，还能将支持肿瘤细胞增殖的间质等其它成分一并植
14、入，能较好体现临床上呈侵袭生长和过表达 EGFR 的高度恶性胶质瘤的特征。 （3）人肺腺癌脑转移瘤组织块接种于鼠脑内建立的原位移植模型能更好地模拟临床原发肿瘤呈现低分化的病理学特征，并且具有缺乏侵袭性及 CEA 高表达的生物学特性，说明本方法为研究人肺腺癌脑转移瘤的生物学特性及实验治疗提供了一个可靠的动物模型。 （4）用免疫功能健全、表达 GFP 的转基因鼠与免疫功能缺陷的裸小鼠杂交，可获得脑等组织器官表达 GFP 的裸小鼠。对其进行 HGSCs 原位移植，因可清晰辨认移植瘤与宿主组织的关系而有望用于肿瘤组织重构的研究。目的： （1）通过改良肿瘤组织移植的方法以获得良好的人脑胶质瘤裸小鼠脑内移
15、植模型。在此基础上，去建立人脑多形性胶质母细胞瘤（glioblastoma multiform，GBM）和人肺腺癌脑转移瘤的裸小鼠模型，并探知其生物学特性能否保持其亲本肿瘤的特性。 （2）培育表达绿色荧光蛋白（green fluoresent protein，GFP）的裸小鼠，将其用于人胶质瘤干细胞（human glioma stem cells，HGSCs）移植实验研究，并阐明 HGSCs 在宿主脑组织中具有播散和融合其它细胞的特征，以用于肿瘤组织重构的研究。 方法： （1）先用 SHG44 胶质瘤细胞（1107）注射于裸小鼠皮下，形成皮下移植瘤，再把皮下移植瘤组织通过自制的组织挤压装置放入
16、 24#无菌套管针，并调整肿瘤的体积为 2.0mm3，然后把定量要移植的肿瘤组织块植入裸小鼠右尾状核，制作成裸小鼠脑内移植瘤模型。观察移植后裸小鼠生存状态。30d 后解剖裸小鼠取脑并行病理切片，观察原位移植瘤的形态、病理学特征和成瘤率。 （2）将体外培养高表达表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）的人脑 GBM 细胞，在立体定向仪辅助下行裸小鼠右尾状核接种；继而将致瘤的组织通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，然后将2.0mm3 的肿瘤组织经徒手操作接种子裸小鼠右尾状核，致瘤后即用裸小鼠的瘤组织再进行原位传代接种。接种后观察移植瘤
17、的生长特性，并分析 EGFR 在各代移植瘤中的表达。 （3）取人肺腺癌脑转移瘤组织块，通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，然后将 2.0mm3 的肿瘤组织经徒手操作接种于裸小鼠右尾状核。致瘤后即用裸小鼠的瘤组织再进行原位传代接种，然后观察致瘤率及荷瘤鼠生存期；HE 染色分析各代移植瘤的组织学形态；MRI 观察移植瘤在鼠脑内的大体形态；免疫组化染色观察移植瘤中 CEA 的表达；Alcian blue/PAS特殊染色检测移植瘤中粘液的性质。 （4）将 C57BL/6JGFP 转基因小鼠与NC 系裸小鼠进行交配，在继代时严格挑选都表达 GFP 的无毛雄鼠（）与有毛雌鼠（）交配，通过肉眼和荧
18、光显微镜等方法观察 GFP 在裸小鼠皮肤和脏器中的表达情况，继将 HGSCs 原位移植于表达 GFP 的裸小鼠，以观察移植瘤的生长情况。 结果： （1）通过改良的肿瘤组织块移植后，18 只裸小鼠除 3只接种当日死亡外，其余 15 只于移植后 30d 被处死取脑行冰冻切片，HE 染色在光镜下见移植瘤侵袭性生长。致瘤率为 93%（14/15） 。 （2）人 GBM 移植瘤组织在裸小鼠尾状核已连续传至 13 代，共 130 只鼠，荷瘤鼠生存期为191.33d。移植瘤病理学符合呈高度侵袭性生长、EGFR 过表达的人脑 GBM 的特征。不同时间测得的肿瘤增殖曲线提示，致瘤的潜伏期短（lt;3d） ，持续
19、快速增殖期长（gt;15d） ，进入晚期至死亡时间短（lt;3d） 。 （3）人肺腺癌脑转移瘤组织在裸小鼠右尾状核已连续传至 6 代，共 65 只鼠。荷瘤鼠生存期：原代为 47.61.8d，23 代有所缩短，46 代稳定在38.00.9d；移植瘤病理为低分化腺癌，不向周围正常鼠脑组织侵袭；MRI 示移植瘤类圆形，瘤周无水肿，与临床病例的 MRI 一致；移植瘤中癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）表达阳性，并有酸性粘液存在。 （4）GFP 荧光裸小鼠已传至 8 代，包括脑在内的全身主要器官和细胞都发绿色荧光。对用于 HGSCs 原位移植的脑，能清晰辨认出不发光的瘤
20、细胞和发光的宿主细胞。而瘤细胞经抗人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）抗体偶联红色荧光剂（PE）的免疫组织化学染色后，在共聚焦显微镜下可清晰显示HGSCs 与宿主脑细胞的组织学关系是：多数播散，个别的发生细胞与细胞融合。结论： （1）通过改良的组织定量移植具有操作简便，对小鼠创伤小，速度快，成瘤率高，便于批量制作原位移植裸小鼠模型。 （2）人 GBM 肿瘤组织于鼠尾状核接种比传统的肿瘤细胞悬液接种，非但接种的细胞量大，还能将支持肿瘤细胞增殖的间质等其它成分一并植入，能较好体现临床上呈侵袭生长和过表达 EGFR 的高度恶性胶质瘤的特征。 （3）人肺腺癌脑转移瘤
21、组织块接种于鼠脑内建立的原位移植模型能更好地模拟临床原发肿瘤呈现低分化的病理学特征，并且具有缺乏侵袭性及 CEA 高表达的生物学特性，说明本方法为研究人肺腺癌脑转移瘤的生物学特性及实验治疗提供了一个可靠的动物模型。 （4）用免疫功能健全、表达 GFP 的转基因鼠与免疫功能缺陷的裸小鼠杂交，可获得脑等组织器官表达 GFP 的裸小鼠。对其进行 HGSCs 原位移植，因可清晰辨认移植瘤与宿主组织的关系而有望用于肿瘤组织重构的研究。目的： （1）通过改良肿瘤组织移植的方法以获得良好的人脑胶质瘤裸小鼠脑内移植模型。在此基础上，去建立人脑多形性胶质母细胞瘤（glioblastoma multiform，G
22、BM）和人肺腺癌脑转移瘤的裸小鼠模型，并探知其生物学特性能否保持其亲本肿瘤的特性。 （2）培育表达绿色荧光蛋白（green fluoresent protein，GFP）的裸小鼠，将其用于人胶质瘤干细胞（human glioma stem cells，HGSCs）移植实验研究，并阐明 HGSCs 在宿主脑组织中具有播散和融合其它细胞的特征，以用于肿瘤组织重构的研究。 方法： （1）先用 SHG44 胶质瘤细胞（1107）注射于裸小鼠皮下，形成皮下移植瘤，再把皮下移植瘤组织通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，并调整肿瘤的体积为 2.0mm3，然后把定量要移植的肿瘤组织块植入裸小鼠右尾状
23、核，制作成裸小鼠脑内移植瘤模型。观察移植后裸小鼠生存状态。30d 后解剖裸小鼠取脑并行病理切片，观察原位移植瘤的形态、病理学特征和成瘤率。 （2）将体外培养高表达表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）的人脑 GBM 细胞，在立体定向仪辅助下行裸小鼠右尾状核接种；继而将致瘤的组织通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，然后将2.0mm3 的肿瘤组织经徒手操作接种子裸小鼠右尾状核，致瘤后即用裸小鼠的瘤组织再进行原位传代接种。接种后观察移植瘤的生长特性，并分析 EGFR 在各代移植瘤中的表达。 （3）取人肺腺癌脑转移瘤组织块，通过自制的组
24、织挤压装置放入 24#无菌套管针，然后将 2.0mm3 的肿瘤组织经徒手操作接种于裸小鼠右尾状核。致瘤后即用裸小鼠的瘤组织再进行原位传代接种，然后观察致瘤率及荷瘤鼠生存期；HE 染色分析各代移植瘤的组织学形态；MRI 观察移植瘤在鼠脑内的大体形态；免疫组化染色观察移植瘤中 CEA 的表达；Alcian blue/PAS特殊染色检测移植瘤中粘液的性质。 （4）将 C57BL/6JGFP 转基因小鼠与NC 系裸小鼠进行交配，在继代时严格挑选都表达 GFP 的无毛雄鼠（）与有毛雌鼠（）交配，通过肉眼和荧光显微镜等方法观察 GFP 在裸小鼠皮肤和脏器中的表达情况，继将 HGSCs 原位移植于表达 GF
25、P 的裸小鼠，以观察移植瘤的生长情况。 结果： （1）通过改良的肿瘤组织块移植后，18 只裸小鼠除 3只接种当日死亡外，其余 15 只于移植后 30d 被处死取脑行冰冻切片，HE 染色在光镜下见移植瘤侵袭性生长。致瘤率为 93%（14/15） 。 （2）人 GBM 移植瘤组织在裸小鼠尾状核已连续传至 13 代，共 130 只鼠，荷瘤鼠生存期为191.33d。移植瘤病理学符合呈高度侵袭性生长、EGFR 过表达的人脑 GBM 的特征。不同时间测得的肿瘤增殖曲线提示，致瘤的潜伏期短（lt;3d） ，持续快速增殖期长（gt;15d） ，进入晚期至死亡时间短（lt;3d） 。 （3）人肺腺癌脑转移瘤组织
26、在裸小鼠右尾状核已连续传至 6 代，共 65 只鼠。荷瘤鼠生存期：原代为 47.61.8d，23 代有所缩短，46 代稳定在38.00.9d；移植瘤病理为低分化腺癌，不向周围正常鼠脑组织侵袭；MRI 示移植瘤类圆形，瘤周无水肿，与临床病例的 MRI 一致；移植瘤中癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）表达阳性，并有酸性粘液存在。 （4）GFP 荧光裸小鼠已传至 8 代，包括脑在内的全身主要器官和细胞都发绿色荧光。对用于 HGSCs 原位移植的脑，能清晰辨认出不发光的瘤细胞和发光的宿主细胞。而瘤细胞经抗人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，
27、HLA）抗体偶联红色荧光剂（PE）的免疫组织化学染色后，在共聚焦显微镜下可清晰显示HGSCs 与宿主脑细胞的组织学关系是：多数播散，个别的发生细胞与细胞融合。结论： （1）通过改良的组织定量移植具有操作简便，对小鼠创伤小，速度快，成瘤率高，便于批量制作原位移植裸小鼠模型。 （2）人 GBM 肿瘤组织于鼠尾状核接种比传统的肿瘤细胞悬液接种，非但接种的细胞量大，还能将支持肿瘤细胞增殖的间质等其它成分一并植入，能较好体现临床上呈侵袭生长和过表达 EGFR 的高度恶性胶质瘤的特征。 （3）人肺腺癌脑转移瘤组织块接种于鼠脑内建立的原位移植模型能更好地模拟临床原发肿瘤呈现低分化的病理学特征，并且具有缺乏侵
28、袭性及 CEA 高表达的生物学特性，说明本方法为研究人肺腺癌脑转移瘤的生物学特性及实验治疗提供了一个可靠的动物模型。 （4）用免疫功能健全、表达 GFP 的转基因鼠与免疫功能缺陷的裸小鼠杂交，可获得脑等组织器官表达 GFP 的裸小鼠。对其进行 HGSCs 原位移植，因可清晰辨认移植瘤与宿主组织的关系而有望用于肿瘤组织重构的研究。目的： （1）通过改良肿瘤组织移植的方法以获得良好的人脑胶质瘤裸小鼠脑内移植模型。在此基础上，去建立人脑多形性胶质母细胞瘤（glioblastoma multiform，GBM）和人肺腺癌脑转移瘤的裸小鼠模型，并探知其生物学特性能否保持其亲本肿瘤的特性。 （2）培育表达
29、绿色荧光蛋白（green fluoresent protein，GFP）的裸小鼠，将其用于人胶质瘤干细胞（human glioma stem cells，HGSCs）移植实验研究，并阐明 HGSCs 在宿主脑组织中具有播散和融合其它细胞的特征，以用于肿瘤组织重构的研究。 方法： （1）先用 SHG44 胶质瘤细胞（1107）注射于裸小鼠皮下，形成皮下移植瘤，再把皮下移植瘤组织通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，并调整肿瘤的体积为 2.0mm3，然后把定量要移植的肿瘤组织块植入裸小鼠右尾状核，制作成裸小鼠脑内移植瘤模型。观察移植后裸小鼠生存状态。30d 后解剖裸小鼠取脑并行病理切片，观
30、察原位移植瘤的形态、病理学特征和成瘤率。 （2）将体外培养高表达表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）的人脑 GBM 细胞，在立体定向仪辅助下行裸小鼠右尾状核接种；继而将致瘤的组织通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，然后将2.0mm3 的肿瘤组织经徒手操作接种子裸小鼠右尾状核，致瘤后即用裸小鼠的瘤组织再进行原位传代接种。接种后观察移植瘤的生长特性，并分析 EGFR 在各代移植瘤中的表达。 （3）取人肺腺癌脑转移瘤组织块，通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，然后将 2.0mm3 的肿瘤组织经徒手操作接种于裸小鼠右尾状核。
31、致瘤后即用裸小鼠的瘤组织再进行原位传代接种，然后观察致瘤率及荷瘤鼠生存期；HE 染色分析各代移植瘤的组织学形态；MRI 观察移植瘤在鼠脑内的大体形态；免疫组化染色观察移植瘤中 CEA 的表达；Alcian blue/PAS特殊染色检测移植瘤中粘液的性质。 （4）将 C57BL/6JGFP 转基因小鼠与NC 系裸小鼠进行交配，在继代时严格挑选都表达 GFP 的无毛雄鼠（）与有毛雌鼠（）交配，通过肉眼和荧光显微镜等方法观察 GFP 在裸小鼠皮肤和脏器中的表达情况，继将 HGSCs 原位移植于表达 GFP 的裸小鼠，以观察移植瘤的生长情况。 结果： （1）通过改良的肿瘤组织块移植后，18 只裸小鼠除
32、 3只接种当日死亡外，其余 15 只于移植后 30d 被处死取脑行冰冻切片，HE 染色在光镜下见移植瘤侵袭性生长。致瘤率为 93%（14/15） 。 （2）人 GBM 移植瘤组织在裸小鼠尾状核已连续传至 13 代，共 130 只鼠，荷瘤鼠生存期为191.33d。移植瘤病理学符合呈高度侵袭性生长、EGFR 过表达的人脑 GBM 的特征。不同时间测得的肿瘤增殖曲线提示，致瘤的潜伏期短（lt;3d） ，持续快速增殖期长（gt;15d） ，进入晚期至死亡时间短（lt;3d） 。 （3）人肺腺癌脑转移瘤组织在裸小鼠右尾状核已连续传至 6 代，共 65 只鼠。荷瘤鼠生存期：原代为 47.61.8d，23
33、代有所缩短，46 代稳定在38.00.9d；移植瘤病理为低分化腺癌，不向周围正常鼠脑组织侵袭；MRI 示移植瘤类圆形，瘤周无水肿，与临床病例的 MRI 一致；移植瘤中癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）表达阳性，并有酸性粘液存在。 （4）GFP 荧光裸小鼠已传至 8 代，包括脑在内的全身主要器官和细胞都发绿色荧光。对用于 HGSCs 原位移植的脑，能清晰辨认出不发光的瘤细胞和发光的宿主细胞。而瘤细胞经抗人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）抗体偶联红色荧光剂（PE）的免疫组织化学染色后，在共聚焦显微镜下可清晰显示HGSCs 与宿
34、主脑细胞的组织学关系是：多数播散，个别的发生细胞与细胞融合。结论： （1）通过改良的组织定量移植具有操作简便，对小鼠创伤小，速度快，成瘤率高，便于批量制作原位移植裸小鼠模型。 （2）人 GBM 肿瘤组织于鼠尾状核接种比传统的肿瘤细胞悬液接种，非但接种的细胞量大，还能将支持肿瘤细胞增殖的间质等其它成分一并植入，能较好体现临床上呈侵袭生长和过表达 EGFR 的高度恶性胶质瘤的特征。 （3）人肺腺癌脑转移瘤组织块接种于鼠脑内建立的原位移植模型能更好地模拟临床原发肿瘤呈现低分化的病理学特征，并且具有缺乏侵袭性及 CEA 高表达的生物学特性，说明本方法为研究人肺腺癌脑转移瘤的生物学特性及实验治疗提供了一
35、个可靠的动物模型。 （4）用免疫功能健全、表达 GFP 的转基因鼠与免疫功能缺陷的裸小鼠杂交，可获得脑等组织器官表达 GFP 的裸小鼠。对其进行 HGSCs 原位移植，因可清晰辨认移植瘤与宿主组织的关系而有望用于肿瘤组织重构的研究。目的： （1）通过改良肿瘤组织移植的方法以获得良好的人脑胶质瘤裸小鼠脑内移植模型。在此基础上，去建立人脑多形性胶质母细胞瘤（glioblastoma multiform，GBM）和人肺腺癌脑转移瘤的裸小鼠模型，并探知其生物学特性能否保持其亲本肿瘤的特性。 （2）培育表达绿色荧光蛋白（green fluoresent protein，GFP）的裸小鼠，将其用于人胶质瘤
36、干细胞（human glioma stem cells，HGSCs）移植实验研究，并阐明 HGSCs 在宿主脑组织中具有播散和融合其它细胞的特征，以用于肿瘤组织重构的研究。 方法： （1）先用 SHG44 胶质瘤细胞（1107）注射于裸小鼠皮下，形成皮下移植瘤，再把皮下移植瘤组织通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，并调整肿瘤的体积为 2.0mm3，然后把定量要移植的肿瘤组织块植入裸小鼠右尾状核，制作成裸小鼠脑内移植瘤模型。观察移植后裸小鼠生存状态。30d 后解剖裸小鼠取脑并行病理切片，观察原位移植瘤的形态、病理学特征和成瘤率。 （2）将体外培养高表达表皮生长因子受体（epiderma
37、l growth factor receptor，EGFR）的人脑 GBM 细胞，在立体定向仪辅助下行裸小鼠右尾状核接种；继而将致瘤的组织通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，然后将2.0mm3 的肿瘤组织经徒手操作接种子裸小鼠右尾状核，致瘤后即用裸小鼠的瘤组织再进行原位传代接种。接种后观察移植瘤的生长特性，并分析 EGFR 在各代移植瘤中的表达。 （3）取人肺腺癌脑转移瘤组织块，通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，然后将 2.0mm3 的肿瘤组织经徒手操作接种于裸小鼠右尾状核。致瘤后即用裸小鼠的瘤组织再进行原位传代接种，然后观察致瘤率及荷瘤鼠生存期；HE 染色分析各代移植瘤
38、的组织学形态；MRI 观察移植瘤在鼠脑内的大体形态；免疫组化染色观察移植瘤中 CEA 的表达；Alcian blue/PAS特殊染色检测移植瘤中粘液的性质。 （4）将 C57BL/6JGFP 转基因小鼠与NC 系裸小鼠进行交配，在继代时严格挑选都表达 GFP 的无毛雄鼠（）与有毛雌鼠（）交配，通过肉眼和荧光显微镜等方法观察 GFP 在裸小鼠皮肤和脏器中的表达情况，继将 HGSCs 原位移植于表达 GFP 的裸小鼠，以观察移植瘤的生长情况。 结果： （1）通过改良的肿瘤组织块移植后，18 只裸小鼠除 3只接种当日死亡外，其余 15 只于移植后 30d 被处死取脑行冰冻切片，HE 染色在光镜下见移
39、植瘤侵袭性生长。致瘤率为 93%（14/15） 。 （2）人 GBM 移植瘤组织在裸小鼠尾状核已连续传至 13 代，共 130 只鼠，荷瘤鼠生存期为191.33d。移植瘤病理学符合呈高度侵袭性生长、EGFR 过表达的人脑 GBM 的特征。不同时间测得的肿瘤增殖曲线提示，致瘤的潜伏期短（lt;3d） ，持续快速增殖期长（gt;15d） ，进入晚期至死亡时间短（lt;3d） 。 （3）人肺腺癌脑转移瘤组织在裸小鼠右尾状核已连续传至 6 代，共 65 只鼠。荷瘤鼠生存期：原代为 47.61.8d，23 代有所缩短，46 代稳定在38.00.9d；移植瘤病理为低分化腺癌，不向周围正常鼠脑组织侵袭；MR
40、I 示移植瘤类圆形，瘤周无水肿，与临床病例的 MRI 一致；移植瘤中癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）表达阳性，并有酸性粘液存在。 （4）GFP 荧光裸小鼠已传至 8 代，包括脑在内的全身主要器官和细胞都发绿色荧光。对用于 HGSCs 原位移植的脑，能清晰辨认出不发光的瘤细胞和发光的宿主细胞。而瘤细胞经抗人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）抗体偶联红色荧光剂（PE）的免疫组织化学染色后，在共聚焦显微镜下可清晰显示HGSCs 与宿主脑细胞的组织学关系是：多数播散，个别的发生细胞与细胞融合。结论： （1）通过改良的组织定量移植具
41、有操作简便，对小鼠创伤小，速度快，成瘤率高，便于批量制作原位移植裸小鼠模型。 （2）人 GBM 肿瘤组织于鼠尾状核接种比传统的肿瘤细胞悬液接种，非但接种的细胞量大，还能将支持肿瘤细胞增殖的间质等其它成分一并植入，能较好体现临床上呈侵袭生长和过表达 EGFR 的高度恶性胶质瘤的特征。 （3）人肺腺癌脑转移瘤组织块接种于鼠脑内建立的原位移植模型能更好地模拟临床原发肿瘤呈现低分化的病理学特征，并且具有缺乏侵袭性及 CEA 高表达的生物学特性，说明本方法为研究人肺腺癌脑转移瘤的生物学特性及实验治疗提供了一个可靠的动物模型。 （4）用免疫功能健全、表达 GFP 的转基因鼠与免疫功能缺陷的裸小鼠杂交，可获
42、得脑等组织器官表达 GFP 的裸小鼠。对其进行 HGSCs 原位移植，因可清晰辨认移植瘤与宿主组织的关系而有望用于肿瘤组织重构的研究。目的： （1）通过改良肿瘤组织移植的方法以获得良好的人脑胶质瘤裸小鼠脑内移植模型。在此基础上，去建立人脑多形性胶质母细胞瘤（glioblastoma multiform，GBM）和人肺腺癌脑转移瘤的裸小鼠模型，并探知其生物学特性能否保持其亲本肿瘤的特性。 （2）培育表达绿色荧光蛋白（green fluoresent protein，GFP）的裸小鼠，将其用于人胶质瘤干细胞（human glioma stem cells，HGSCs）移植实验研究，并阐明 HGSC
43、s 在宿主脑组织中具有播散和融合其它细胞的特征，以用于肿瘤组织重构的研究。 方法： （1）先用 SHG44 胶质瘤细胞（1107）注射于裸小鼠皮下，形成皮下移植瘤，再把皮下移植瘤组织通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，并调整肿瘤的体积为 2.0mm3，然后把定量要移植的肿瘤组织块植入裸小鼠右尾状核，制作成裸小鼠脑内移植瘤模型。观察移植后裸小鼠生存状态。30d 后解剖裸小鼠取脑并行病理切片，观察原位移植瘤的形态、病理学特征和成瘤率。 （2）将体外培养高表达表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）的人脑 GBM 细胞，在立体定向仪辅助
44、下行裸小鼠右尾状核接种；继而将致瘤的组织通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，然后将2.0mm3 的肿瘤组织经徒手操作接种子裸小鼠右尾状核，致瘤后即用裸小鼠的瘤组织再进行原位传代接种。接种后观察移植瘤的生长特性，并分析 EGFR 在各代移植瘤中的表达。 （3）取人肺腺癌脑转移瘤组织块，通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，然后将 2.0mm3 的肿瘤组织经徒手操作接种于裸小鼠右尾状核。致瘤后即用裸小鼠的瘤组织再进行原位传代接种，然后观察致瘤率及荷瘤鼠生存期；HE 染色分析各代移植瘤的组织学形态；MRI 观察移植瘤在鼠脑内的大体形态；免疫组化染色观察移植瘤中 CEA 的表达；Al
45、cian blue/PAS特殊染色检测移植瘤中粘液的性质。 （4）将 C57BL/6JGFP 转基因小鼠与NC 系裸小鼠进行交配，在继代时严格挑选都表达 GFP 的无毛雄鼠（）与有毛雌鼠（）交配，通过肉眼和荧光显微镜等方法观察 GFP 在裸小鼠皮肤和脏器中的表达情况，继将 HGSCs 原位移植于表达 GFP 的裸小鼠，以观察移植瘤的生长情况。 结果： （1）通过改良的肿瘤组织块移植后，18 只裸小鼠除 3只接种当日死亡外，其余 15 只于移植后 30d 被处死取脑行冰冻切片，HE 染色在光镜下见移植瘤侵袭性生长。致瘤率为 93%（14/15） 。 （2）人 GBM 移植瘤组织在裸小鼠尾状核已连
46、续传至 13 代，共 130 只鼠，荷瘤鼠生存期为191.33d。移植瘤病理学符合呈高度侵袭性生长、EGFR 过表达的人脑 GBM 的特征。不同时间测得的肿瘤增殖曲线提示，致瘤的潜伏期短（lt;3d） ，持续快速增殖期长（gt;15d） ，进入晚期至死亡时间短（lt;3d） 。 （3）人肺腺癌脑转移瘤组织在裸小鼠右尾状核已连续传至 6 代，共 65 只鼠。荷瘤鼠生存期：原代为 47.61.8d，23 代有所缩短，46 代稳定在38.00.9d；移植瘤病理为低分化腺癌，不向周围正常鼠脑组织侵袭；MRI 示移植瘤类圆形，瘤周无水肿，与临床病例的 MRI 一致；移植瘤中癌胚抗原（carcinoemb
47、ryonic antigen，CEA）表达阳性，并有酸性粘液存在。 （4）GFP 荧光裸小鼠已传至 8 代，包括脑在内的全身主要器官和细胞都发绿色荧光。对用于 HGSCs 原位移植的脑，能清晰辨认出不发光的瘤细胞和发光的宿主细胞。而瘤细胞经抗人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）抗体偶联红色荧光剂（PE）的免疫组织化学染色后，在共聚焦显微镜下可清晰显示HGSCs 与宿主脑细胞的组织学关系是：多数播散，个别的发生细胞与细胞融合。结论： （1）通过改良的组织定量移植具有操作简便，对小鼠创伤小，速度快，成瘤率高，便于批量制作原位移植裸小鼠模型。 （2）人 GBM 肿
48、瘤组织于鼠尾状核接种比传统的肿瘤细胞悬液接种，非但接种的细胞量大，还能将支持肿瘤细胞增殖的间质等其它成分一并植入，能较好体现临床上呈侵袭生长和过表达 EGFR 的高度恶性胶质瘤的特征。 （3）人肺腺癌脑转移瘤组织块接种于鼠脑内建立的原位移植模型能更好地模拟临床原发肿瘤呈现低分化的病理学特征，并且具有缺乏侵袭性及 CEA 高表达的生物学特性，说明本方法为研究人肺腺癌脑转移瘤的生物学特性及实验治疗提供了一个可靠的动物模型。 （4）用免疫功能健全、表达 GFP 的转基因鼠与免疫功能缺陷的裸小鼠杂交，可获得脑等组织器官表达 GFP 的裸小鼠。对其进行 HGSCs 原位移植，因可清晰辨认移植瘤与宿主组织
49、的关系而有望用于肿瘤组织重构的研究。目的： （1）通过改良肿瘤组织移植的方法以获得良好的人脑胶质瘤裸小鼠脑内移植模型。在此基础上，去建立人脑多形性胶质母细胞瘤（glioblastoma multiform，GBM）和人肺腺癌脑转移瘤的裸小鼠模型，并探知其生物学特性能否保持其亲本肿瘤的特性。 （2）培育表达绿色荧光蛋白（green fluoresent protein，GFP）的裸小鼠，将其用于人胶质瘤干细胞（human glioma stem cells，HGSCs）移植实验研究，并阐明 HGSCs 在宿主脑组织中具有播散和融合其它细胞的特征，以用于肿瘤组织重构的研究。 方法： （1）先用 SHG44 胶质瘤细胞（1107）注射于裸小鼠皮下，形成皮下移植瘤，再把皮下移植瘤组织通过自制的组织挤压装置放入 24#无菌套管针，并调整肿瘤的体积为 2.0mm3，然后把定量要移植的肿瘤组织块植入裸小
