1、动物遗传育种与繁殖专业优秀论文 五龙鹅 IGF-I cDNA 及 5非翻译区的克隆与表达研究关键词：五龙鹅 胰岛素样生长因子 生长发育 组织修复 细胞凋亡 基因克隆 非翻译区摘要：胰岛素样生长因子-(Insulin-like Growth Factor-，IGF-)是胰岛素样生长因子的重要成员，对机体的生长发育、组织修复、营养代谢、细胞凋亡以及细胞分化等方面有重要的生物学作用。本试验以五龙鹅为研究对象，克隆了 IGF-基因 cDNA 和 5非翻译区部分序列，分析了序列的结构、同源性及蛋白的空间结构，对 IGF-进行了原核表达，并检测了 IGF-基因在五龙鹅10 种组织中的表达情况。将为进一步研
2、究 IGF-基因的结构与功能、 IGF-基因对五龙鹅生长发育的调控以及其与生产性能、经济性状之间的关系提供理论依据。结果如下： 1.根据鸡(M32791)、鸭(AB061721)等的 IGF-基因保守序列设计引物，运用 RT-PCR 法从五龙鹅肝脏总 RNA 中克隆了 562bp 的 IGF-基因 cDNA 部分序列(GenBank 登录号为 DQ662932)，其中包括 462bp 的完整编码区。五龙鹅 IGF-基因编码 153 个氨基酸，成熟肽分子量为 7743.8 Daltons，等电点 pI 为 7.78；在第 3639 个氨基酸处存在一个较强的疏水区；在第 37116 个氨基酸处存在
3、一个蛋白质超家族；56.5的 IGF-蛋白可能存在于细胞核；蛋白的空间结构主要有 3 个 螺旋组成。序列与鸭、鸡、火鸡、鸵鸟、鹌鹑的氨基酸同源性分别为100.0、99.3、98、99.3、98.7，进化关系与鸭最近。 2.根据鸡的序列(M74176)，并参照 Kansaku 发表的鸭的 5非翻译区序列设计兼并引物，从五龙鹅基因组 DNA 中克隆了 796bp 的 5非翻译区部分序列(GenBank 登录号为 DQ988932)。获得的序列与鸭相比有 4 处碱基缺失和 7 处碱基插入，同源性为 98.1；与鸡相比有 4 处破基缺失和 3 处碱基插入，同源性为 93.0；共有5 种常见的限制性内切
4、酶的酶切位点 9 处。 3.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的序列(DQ662932)设计引物，克隆了表达 IGF-基因成熟蛋白部分的 IGF- m 序列 228bp。将此片段插入到 pET-32a 质粒中，构建重组质粒 pET-IGF- m，经 PCR 和酶切鉴定为阳性后，转化 E coli.BL21，经 1.0mM IPTG 25诱导4h，目的基因的表达量较高。SDS-PAGE 电泳显示表达产物分子量约为 28KD， Western 印迹试验进一步表明，表达的蛋白为目的蛋白。 4.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的保守区序列设计引物，提取五龙鹅心、脾、肝、肺、肾、胸肌、腿肌、睾丸、脂肪、脑
5、 10 种组织的总 RNA，建立了利用 Real-time PCR 技术检测组织中 IGF-基因表达量的方法。最佳反应条件为：SYBR Green 终浓度为 1x，退火温度为 59，此时，熔解曲线显示单峰且峰值单一。五龙鹅IGF-基因在各组织中的表达量的关系为：肝gt;脑gt;脾gt;腿肌gt;胸肌gt;肺gt;心gt;睾丸gt;脂肪gt;肾。正文内容胰岛素样生长因子-(Insulin-like Growth Factor-，IGF-)是胰岛素样生长因子的重要成员，对机体的生长发育、组织修复、营养代谢、细胞凋亡以及细胞分化等方面有重要的生物学作用。本试验以五龙鹅为研究对象，克隆了 IGF-基因
6、 cDNA 和 5非翻译区部分序列，分析了序列的结构、同源性及蛋白的空间结构，对 IGF-进行了原核表达，并检测了 IGF-基因在五龙鹅10 种组织中的表达情况。将为进一步研究 IGF-基因的结构与功能、 IGF-基因对五龙鹅生长发育的调控以及其与生产性能、经济性状之间的关系提供理论依据。结果如下： 1.根据鸡(M32791)、鸭(AB061721)等的 IGF-基因保守序列设计引物，运用 RT-PCR 法从五龙鹅肝脏总 RNA 中克隆了 562bp 的 IGF-基因 cDNA 部分序列(GenBank 登录号为 DQ662932)，其中包括 462bp 的完整编码区。五龙鹅 IGF-基因编码
7、 153 个氨基酸，成熟肽分子量为 7743.8 Daltons，等电点 pI 为 7.78；在第 3639 个氨基酸处存在一个较强的疏水区；在第 37116 个氨基酸处存在一个蛋白质超家族；56.5的 IGF-蛋白可能存在于细胞核；蛋白的空间结构主要有 3 个 螺旋组成。序列与鸭、鸡、火鸡、鸵鸟、鹌鹑的氨基酸同源性分别为100.0、99.3、98、99.3、98.7，进化关系与鸭最近。 2.根据鸡的序列(M74176)，并参照 Kansaku 发表的鸭的 5非翻译区序列设计兼并引物，从五龙鹅基因组 DNA 中克隆了 796bp 的 5非翻译区部分序列(GenBank 登录号为 DQ98893
8、2)。获得的序列与鸭相比有 4 处碱基缺失和 7 处碱基插入，同源性为 98.1；与鸡相比有 4 处破基缺失和 3 处碱基插入，同源性为 93.0；共有5 种常见的限制性内切酶的酶切位点 9 处。 3.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的序列(DQ662932)设计引物，克隆了表达 IGF-基因成熟蛋白部分的 IGF- m 序列 228bp。将此片段插入到 pET-32a 质粒中，构建重组质粒 pET-IGF- m，经 PCR 和酶切鉴定为阳性后，转化 E coli.BL21，经 1.0mM IPTG 25诱导4h，目的基因的表达量较高。SDS-PAGE 电泳显示表达产物分子量约为 28KD，
9、Western 印迹试验进一步表明，表达的蛋白为目的蛋白。 4.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的保守区序列设计引物，提取五龙鹅心、脾、肝、肺、肾、胸肌、腿肌、睾丸、脂肪、脑 10 种组织的总 RNA，建立了利用 Real-time PCR 技术检测组织中 IGF-基因表达量的方法。最佳反应条件为：SYBR Green 终浓度为 1x，退火温度为 59，此时，熔解曲线显示单峰且峰值单一。五龙鹅IGF-基因在各组织中的表达量的关系为：肝gt;脑gt;脾gt;腿肌gt;胸肌gt;肺gt;心gt;睾丸gt;脂肪gt;肾。胰岛素样生长因子-(Insulin-like Growth Factor-，IG
10、F-)是胰岛素样生长因子的重要成员，对机体的生长发育、组织修复、营养代谢、细胞凋亡以及细胞分化等方面有重要的生物学作用。本试验以五龙鹅为研究对象，克隆了IGF-基因 cDNA 和 5非翻译区部分序列，分析了序列的结构、同源性及蛋白的空间结构，对 IGF-进行了原核表达，并检测了 IGF-基因在五龙鹅 10 种组织中的表达情况。将为进一步研究 IGF-基因的结构与功能、 IGF-基因对五龙鹅生长发育的调控以及其与生产性能、经济性状之间的关系提供理论依据。结果如下： 1.根据鸡(M32791)、鸭(AB061721)等的 IGF-基因保守序列设计引物，运用 RT-PCR 法从五龙鹅肝脏总 RNA
11、中克隆了 562bp 的 IGF-基因 cDNA 部分序列(GenBank 登录号为 DQ662932)，其中包括 462bp 的完整编码区。五龙鹅 IGF-基因编码 153 个氨基酸，成熟肽分子量为 7743.8 Daltons，等电点 pI 为 7.78；在第 3639 个氨基酸处存在一个较强的疏水区；在第 37116个氨基酸处存在一个蛋白质超家族；56.5的 IGF-蛋白可能存在于细胞核；蛋白的空间结构主要有 3 个 螺旋组成。序列与鸭、鸡、火鸡、鸵鸟、鹌鹑的氨基酸同源性分别为 100.0、99.3、98、99.3、98.7，进化关系与鸭最近。 2.根据鸡的序列(M74176)，并参照
12、Kansaku 发表的鸭的 5非翻译区序列设计兼并引物，从五龙鹅基因组 DNA 中克隆了 796bp 的 5非翻译区部分序列(GenBank 登录号为 DQ988932)。获得的序列与鸭相比有 4 处碱基缺失和7 处碱基插入，同源性为 98.1；与鸡相比有 4 处破基缺失和 3 处碱基插入，同源性为 93.0；共有 5 种常见的限制性内切酶的酶切位点 9 处。 3.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的序列(DQ662932)设计引物，克隆了表达 IGF-基因成熟蛋白部分的 IGF- m 序列 228bp。将此片段插入到 pET-32a 质粒中，构建重组质粒 pET-IGF- m，经 PCR 和酶
13、切鉴定为阳性后，转化 E coli.BL21，经 1.0mM IPTG 25诱导 4h，目的基因的表达量较高。SDS-PAGE 电泳显示表达产物分子量约为 28KD， Western 印迹试验进一步表明，表达的蛋白为目的蛋白。4.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的保守区序列设计引物，提取五龙鹅心、脾、肝、肺、肾、胸肌、腿肌、睾丸、脂肪、脑 10 种组织的总 RNA，建立了利用 Real-time PCR 技术检测组织中 IGF-基因表达量的方法。最佳反应条件为：SYBR Green 终浓度为 1x，退火温度为 59，此时，熔解曲线显示单峰且峰值单一。五龙鹅 IGF-基因在各组织中的表达量的关系
14、为：肝gt;脑gt;脾gt;腿肌gt;胸肌gt;肺gt;心gt;睾丸gt;脂肪gt;肾。胰岛素样生长因子-(Insulin-like Growth Factor-，IGF-)是胰岛素样生长因子的重要成员，对机体的生长发育、组织修复、营养代谢、细胞凋亡以及细胞分化等方面有重要的生物学作用。本试验以五龙鹅为研究对象，克隆了IGF-基因 cDNA 和 5非翻译区部分序列，分析了序列的结构、同源性及蛋白的空间结构，对 IGF-进行了原核表达，并检测了 IGF-基因在五龙鹅 10 种组织中的表达情况。将为进一步研究 IGF-基因的结构与功能、 IGF-基因对五龙鹅生长发育的调控以及其与生产性能、经济性状
15、之间的关系提供理论依据。结果如下： 1.根据鸡(M32791)、鸭(AB061721)等的 IGF-基因保守序列设计引物，运用 RT-PCR 法从五龙鹅肝脏总 RNA 中克隆了 562bp 的 IGF-基因 cDNA 部分序列(GenBank 登录号为 DQ662932)，其中包括 462bp 的完整编码区。五龙鹅 IGF-基因编码 153 个氨基酸，成熟肽分子量为 7743.8 Daltons，等电点 pI 为 7.78；在第 3639 个氨基酸处存在一个较强的疏水区；在第 37116个氨基酸处存在一个蛋白质超家族；56.5的 IGF-蛋白可能存在于细胞核；蛋白的空间结构主要有 3 个 螺旋
16、组成。序列与鸭、鸡、火鸡、鸵鸟、鹌鹑的氨基酸同源性分别为 100.0、99.3、98、99.3、98.7，进化关系与鸭最近。 2.根据鸡的序列(M74176)，并参照 Kansaku 发表的鸭的 5非翻译区序列设计兼并引物，从五龙鹅基因组 DNA 中克隆了 796bp 的 5非翻译区部分序列(GenBank 登录号为 DQ988932)。获得的序列与鸭相比有 4 处碱基缺失和7 处碱基插入，同源性为 98.1；与鸡相比有 4 处破基缺失和 3 处碱基插入，同源性为 93.0；共有 5 种常见的限制性内切酶的酶切位点 9 处。 3.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的序列(DQ662932)设计引
17、物，克隆了表达 IGF-基因成熟蛋白部分的 IGF- m 序列 228bp。将此片段插入到 pET-32a 质粒中，构建重组质粒 pET-IGF- m，经 PCR 和酶切鉴定为阳性后，转化 E coli.BL21，经 1.0mM IPTG 25诱导 4h，目的基因的表达量较高。SDS-PAGE 电泳显示表达产物分子量约为 28KD， Western 印迹试验进一步表明，表达的蛋白为目的蛋白。4.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的保守区序列设计引物，提取五龙鹅心、脾、肝、肺、肾、胸肌、腿肌、睾丸、脂肪、脑 10 种组织的总 RNA，建立了利用 Real-time PCR 技术检测组织中 IGF-
18、基因表达量的方法。最佳反应条件为：SYBR Green 终浓度为 1x，退火温度为 59，此时，熔解曲线显示单峰且峰值单一。五龙鹅 IGF-基因在各组织中的表达量的关系为：肝gt;脑gt;脾gt;腿肌gt;胸肌gt;肺gt;心gt;睾丸gt;脂肪gt;肾。胰岛素样生长因子-(Insulin-like Growth Factor-，IGF-)是胰岛素样生长因子的重要成员，对机体的生长发育、组织修复、营养代谢、细胞凋亡以及细胞分化等方面有重要的生物学作用。本试验以五龙鹅为研究对象，克隆了IGF-基因 cDNA 和 5非翻译区部分序列，分析了序列的结构、同源性及蛋白的空间结构，对 IGF-进行了原核
19、表达，并检测了 IGF-基因在五龙鹅 10 种组织中的表达情况。将为进一步研究 IGF-基因的结构与功能、 IGF-基因对五龙鹅生长发育的调控以及其与生产性能、经济性状之间的关系提供理论依据。结果如下： 1.根据鸡(M32791)、鸭(AB061721)等的 IGF-基因保守序列设计引物，运用 RT-PCR 法从五龙鹅肝脏总 RNA 中克隆了 562bp 的 IGF-基因 cDNA 部分序列(GenBank 登录号为 DQ662932)，其中包括 462bp 的完整编码区。五龙鹅 IGF-基因编码 153 个氨基酸，成熟肽分子量为 7743.8 Daltons，等电点 pI 为 7.78；在第
20、 3639 个氨基酸处存在一个较强的疏水区；在第 37116个氨基酸处存在一个蛋白质超家族；56.5的 IGF-蛋白可能存在于细胞核；蛋白的空间结构主要有 3 个 螺旋组成。序列与鸭、鸡、火鸡、鸵鸟、鹌鹑的氨基酸同源性分别为 100.0、99.3、98、99.3、98.7，进化关系与鸭最近。 2.根据鸡的序列(M74176)，并参照 Kansaku 发表的鸭的 5非翻译区序列设计兼并引物，从五龙鹅基因组 DNA 中克隆了 796bp 的 5非翻译区部分序列(GenBank 登录号为 DQ988932)。获得的序列与鸭相比有 4 处碱基缺失和7 处碱基插入，同源性为 98.1；与鸡相比有 4 处
21、破基缺失和 3 处碱基插入，同源性为 93.0；共有 5 种常见的限制性内切酶的酶切位点 9 处。 3.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的序列(DQ662932)设计引物，克隆了表达 IGF-基因成熟蛋白部分的 IGF- m 序列 228bp。将此片段插入到 pET-32a 质粒中，构建重组质粒 pET-IGF- m，经 PCR 和酶切鉴定为阳性后，转化 E coli.BL21，经 1.0mM IPTG 25诱导 4h，目的基因的表达量较高。SDS-PAGE 电泳显示表达产物分子量约为 28KD， Western 印迹试验进一步表明，表达的蛋白为目的蛋白。4.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的
22、保守区序列设计引物，提取五龙鹅心、脾、肝、肺、肾、胸肌、腿肌、睾丸、脂肪、脑 10 种组织的总 RNA，建立了利用 Real-time PCR 技术检测组织中 IGF-基因表达量的方法。最佳反应条件为：SYBR Green 终浓度为 1x，退火温度为 59，此时，熔解曲线显示单峰且峰值单一。五龙鹅 IGF-基因在各组织中的表达量的关系为：肝gt;脑gt;脾gt;腿肌gt;胸肌gt;肺gt;心gt;睾丸gt;脂肪gt;肾。胰岛素样生长因子-(Insulin-like Growth Factor-，IGF-)是胰岛素样生长因子的重要成员，对机体的生长发育、组织修复、营养代谢、细胞凋亡以及细胞分化等
23、方面有重要的生物学作用。本试验以五龙鹅为研究对象，克隆了IGF-基因 cDNA 和 5非翻译区部分序列，分析了序列的结构、同源性及蛋白的空间结构，对 IGF-进行了原核表达，并检测了 IGF-基因在五龙鹅 10 种组织中的表达情况。将为进一步研究 IGF-基因的结构与功能、 IGF-基因对五龙鹅生长发育的调控以及其与生产性能、经济性状之间的关系提供理论依据。结果如下： 1.根据鸡(M32791)、鸭(AB061721)等的 IGF-基因保守序列设计引物，运用 RT-PCR 法从五龙鹅肝脏总 RNA 中克隆了 562bp 的 IGF-基因 cDNA 部分序列(GenBank 登录号为 DQ662
24、932)，其中包括 462bp 的完整编码区。五龙鹅 IGF-基因编码 153 个氨基酸，成熟肽分子量为 7743.8 Daltons，等电点 pI 为 7.78；在第 3639 个氨基酸处存在一个较强的疏水区；在第 37116个氨基酸处存在一个蛋白质超家族；56.5的 IGF-蛋白可能存在于细胞核；蛋白的空间结构主要有 3 个 螺旋组成。序列与鸭、鸡、火鸡、鸵鸟、鹌鹑的氨基酸同源性分别为 100.0、99.3、98、99.3、98.7，进化关系与鸭最近。 2.根据鸡的序列(M74176)，并参照 Kansaku 发表的鸭的 5非翻译区序列设计兼并引物，从五龙鹅基因组 DNA 中克隆了 796
25、bp 的 5非翻译区部分序列(GenBank 登录号为 DQ988932)。获得的序列与鸭相比有 4 处碱基缺失和7 处碱基插入，同源性为 98.1；与鸡相比有 4 处破基缺失和 3 处碱基插入，同源性为 93.0；共有 5 种常见的限制性内切酶的酶切位点 9 处。 3.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的序列(DQ662932)设计引物，克隆了表达 IGF-基因成熟蛋白部分的 IGF- m 序列 228bp。将此片段插入到 pET-32a 质粒中，构建重组质粒 pET-IGF- m，经 PCR 和酶切鉴定为阳性后，转化 E coli.BL21，经 1.0mM IPTG 25诱导 4h，目的基因
26、的表达量较高。SDS-PAGE 电泳显示表达产物分子量约为 28KD， Western 印迹试验进一步表明，表达的蛋白为目的蛋白。4.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的保守区序列设计引物，提取五龙鹅心、脾、肝、肺、肾、胸肌、腿肌、睾丸、脂肪、脑 10 种组织的总 RNA，建立了利用 Real-time PCR 技术检测组织中 IGF-基因表达量的方法。最佳反应条件为：SYBR Green 终浓度为 1x，退火温度为 59，此时，熔解曲线显示单峰且峰值单一。五龙鹅 IGF-基因在各组织中的表达量的关系为：肝gt;脑gt;脾gt;腿肌gt;胸肌gt;肺gt;心gt;睾丸gt;脂肪gt;肾。胰岛素样
27、生长因子-(Insulin-like Growth Factor-，IGF-)是胰岛素样生长因子的重要成员，对机体的生长发育、组织修复、营养代谢、细胞凋亡以及细胞分化等方面有重要的生物学作用。本试验以五龙鹅为研究对象，克隆了IGF-基因 cDNA 和 5非翻译区部分序列，分析了序列的结构、同源性及蛋白的空间结构，对 IGF-进行了原核表达，并检测了 IGF-基因在五龙鹅 10 种组织中的表达情况。将为进一步研究 IGF-基因的结构与功能、 IGF-基因对五龙鹅生长发育的调控以及其与生产性能、经济性状之间的关系提供理论依据。结果如下： 1.根据鸡(M32791)、鸭(AB061721)等的 IG
28、F-基因保守序列设计引物，运用 RT-PCR 法从五龙鹅肝脏总 RNA 中克隆了 562bp 的 IGF-基因 cDNA 部分序列(GenBank 登录号为 DQ662932)，其中包括 462bp 的完整编码区。五龙鹅 IGF-基因编码 153 个氨基酸，成熟肽分子量为 7743.8 Daltons，等电点 pI 为 7.78；在第 3639 个氨基酸处存在一个较强的疏水区；在第 37116个氨基酸处存在一个蛋白质超家族；56.5的 IGF-蛋白可能存在于细胞核；蛋白的空间结构主要有 3 个 螺旋组成。序列与鸭、鸡、火鸡、鸵鸟、鹌鹑的氨基酸同源性分别为 100.0、99.3、98、99.3、
29、98.7，进化关系与鸭最近。 2.根据鸡的序列(M74176)，并参照 Kansaku 发表的鸭的 5非翻译区序列设计兼并引物，从五龙鹅基因组 DNA 中克隆了 796bp 的 5非翻译区部分序列(GenBank 登录号为 DQ988932)。获得的序列与鸭相比有 4 处碱基缺失和7 处碱基插入，同源性为 98.1；与鸡相比有 4 处破基缺失和 3 处碱基插入，同源性为 93.0；共有 5 种常见的限制性内切酶的酶切位点 9 处。 3.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的序列(DQ662932)设计引物，克隆了表达 IGF-基因成熟蛋白部分的 IGF- m 序列 228bp。将此片段插入到 pE
30、T-32a 质粒中，构建重组质粒 pET-IGF- m，经 PCR 和酶切鉴定为阳性后，转化 E coli.BL21，经 1.0mM IPTG 25诱导 4h，目的基因的表达量较高。SDS-PAGE 电泳显示表达产物分子量约为 28KD， Western 印迹试验进一步表明，表达的蛋白为目的蛋白。4.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的保守区序列设计引物，提取五龙鹅心、脾、肝、肺、肾、胸肌、腿肌、睾丸、脂肪、脑 10 种组织的总 RNA，建立了利用 Real-time PCR 技术检测组织中 IGF-基因表达量的方法。最佳反应条件为：SYBR Green 终浓度为 1x，退火温度为 59，此时，
31、熔解曲线显示单峰且峰值单一。五龙鹅 IGF-基因在各组织中的表达量的关系为：肝gt;脑gt;脾gt;腿肌gt;胸肌gt;肺gt;心gt;睾丸gt;脂肪gt;肾。胰岛素样生长因子-(Insulin-like Growth Factor-，IGF-)是胰岛素样生长因子的重要成员，对机体的生长发育、组织修复、营养代谢、细胞凋亡以及细胞分化等方面有重要的生物学作用。本试验以五龙鹅为研究对象，克隆了IGF-基因 cDNA 和 5非翻译区部分序列，分析了序列的结构、同源性及蛋白的空间结构，对 IGF-进行了原核表达，并检测了 IGF-基因在五龙鹅 10 种组织中的表达情况。将为进一步研究 IGF-基因的结
32、构与功能、 IGF-基因对五龙鹅生长发育的调控以及其与生产性能、经济性状之间的关系提供理论依据。结果如下： 1.根据鸡(M32791)、鸭(AB061721)等的 IGF-基因保守序列设计引物，运用 RT-PCR 法从五龙鹅肝脏总 RNA 中克隆了 562bp 的 IGF-基因 cDNA 部分序列(GenBank 登录号为 DQ662932)，其中包括 462bp 的完整编码区。五龙鹅 IGF-基因编码 153 个氨基酸，成熟肽分子量为 7743.8 Daltons，等电点 pI 为 7.78；在第 3639 个氨基酸处存在一个较强的疏水区；在第 37116个氨基酸处存在一个蛋白质超家族；56
33、.5的 IGF-蛋白可能存在于细胞核；蛋白的空间结构主要有 3 个 螺旋组成。序列与鸭、鸡、火鸡、鸵鸟、鹌鹑的氨基酸同源性分别为 100.0、99.3、98、99.3、98.7，进化关系与鸭最近。 2.根据鸡的序列(M74176)，并参照 Kansaku 发表的鸭的 5非翻译区序列设计兼并引物，从五龙鹅基因组 DNA 中克隆了 796bp 的 5非翻译区部分序列(GenBank 登录号为 DQ988932)。获得的序列与鸭相比有 4 处碱基缺失和7 处碱基插入，同源性为 98.1；与鸡相比有 4 处破基缺失和 3 处碱基插入，同源性为 93.0；共有 5 种常见的限制性内切酶的酶切位点 9 处
34、。 3.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的序列(DQ662932)设计引物，克隆了表达 IGF-基因成熟蛋白部分的 IGF- m 序列 228bp。将此片段插入到 pET-32a 质粒中，构建重组质粒 pET-IGF- m，经 PCR 和酶切鉴定为阳性后，转化 E coli.BL21，经 1.0mM IPTG 25诱导 4h，目的基因的表达量较高。SDS-PAGE 电泳显示表达产物分子量约为 28KD， Western 印迹试验进一步表明，表达的蛋白为目的蛋白。4.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的保守区序列设计引物，提取五龙鹅心、脾、肝、肺、肾、胸肌、腿肌、睾丸、脂肪、脑 10 种组织的总
35、RNA，建立了利用 Real-time PCR 技术检测组织中 IGF-基因表达量的方法。最佳反应条件为：SYBR Green 终浓度为 1x，退火温度为 59，此时，熔解曲线显示单峰且峰值单一。五龙鹅 IGF-基因在各组织中的表达量的关系为：肝gt;脑gt;脾gt;腿肌gt;胸肌gt;肺gt;心gt;睾丸gt;脂肪gt;肾。胰岛素样生长因子-(Insulin-like Growth Factor-，IGF-)是胰岛素样生长因子的重要成员，对机体的生长发育、组织修复、营养代谢、细胞凋亡以及细胞分化等方面有重要的生物学作用。本试验以五龙鹅为研究对象，克隆了IGF-基因 cDNA 和 5非翻译区部
36、分序列，分析了序列的结构、同源性及蛋白的空间结构，对 IGF-进行了原核表达，并检测了 IGF-基因在五龙鹅 10 种组织中的表达情况。将为进一步研究 IGF-基因的结构与功能、 IGF-基因对五龙鹅生长发育的调控以及其与生产性能、经济性状之间的关系提供理论依据。结果如下： 1.根据鸡(M32791)、鸭(AB061721)等的 IGF-基因保守序列设计引物，运用 RT-PCR 法从五龙鹅肝脏总 RNA 中克隆了 562bp 的 IGF-基因 cDNA 部分序列(GenBank 登录号为 DQ662932)，其中包括 462bp 的完整编码区。五龙鹅 IGF-基因编码 153 个氨基酸，成熟肽
37、分子量为 7743.8 Daltons，等电点 pI 为 7.78；在第 3639 个氨基酸处存在一个较强的疏水区；在第 37116个氨基酸处存在一个蛋白质超家族；56.5的 IGF-蛋白可能存在于细胞核；蛋白的空间结构主要有 3 个 螺旋组成。序列与鸭、鸡、火鸡、鸵鸟、鹌鹑的氨基酸同源性分别为 100.0、99.3、98、99.3、98.7，进化关系与鸭最近。 2.根据鸡的序列(M74176)，并参照 Kansaku 发表的鸭的 5非翻译区序列设计兼并引物，从五龙鹅基因组 DNA 中克隆了 796bp 的 5非翻译区部分序列(GenBank 登录号为 DQ988932)。获得的序列与鸭相比有
38、 4 处碱基缺失和7 处碱基插入，同源性为 98.1；与鸡相比有 4 处破基缺失和 3 处碱基插入，同源性为 93.0；共有 5 种常见的限制性内切酶的酶切位点 9 处。 3.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的序列(DQ662932)设计引物，克隆了表达 IGF-基因成熟蛋白部分的 IGF- m 序列 228bp。将此片段插入到 pET-32a 质粒中，构建重组质粒 pET-IGF- m，经 PCR 和酶切鉴定为阳性后，转化 E coli.BL21，经 1.0mM IPTG 25诱导 4h，目的基因的表达量较高。SDS-PAGE 电泳显示表达产物分子量约为 28KD， Western 印迹试验
39、进一步表明，表达的蛋白为目的蛋白。4.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的保守区序列设计引物，提取五龙鹅心、脾、肝、肺、肾、胸肌、腿肌、睾丸、脂肪、脑 10 种组织的总 RNA，建立了利用 Real-time PCR 技术检测组织中 IGF-基因表达量的方法。最佳反应条件为：SYBR Green 终浓度为 1x，退火温度为 59，此时，熔解曲线显示单峰且峰值单一。五龙鹅 IGF-基因在各组织中的表达量的关系为：肝gt;脑gt;脾gt;腿肌gt;胸肌gt;肺gt;心gt;睾丸gt;脂肪gt;肾。胰岛素样生长因子-(Insulin-like Growth Factor-，IGF-)是胰岛素样生长因子
40、的重要成员，对机体的生长发育、组织修复、营养代谢、细胞凋亡以及细胞分化等方面有重要的生物学作用。本试验以五龙鹅为研究对象，克隆了IGF-基因 cDNA 和 5非翻译区部分序列，分析了序列的结构、同源性及蛋白的空间结构，对 IGF-进行了原核表达，并检测了 IGF-基因在五龙鹅 10 种组织中的表达情况。将为进一步研究 IGF-基因的结构与功能、 IGF-基因对五龙鹅生长发育的调控以及其与生产性能、经济性状之间的关系提供理论依据。结果如下： 1.根据鸡(M32791)、鸭(AB061721)等的 IGF-基因保守序列设计引物，运用 RT-PCR 法从五龙鹅肝脏总 RNA 中克隆了 562bp 的
41、 IGF-基因 cDNA 部分序列(GenBank 登录号为 DQ662932)，其中包括 462bp 的完整编码区。五龙鹅 IGF-基因编码 153 个氨基酸，成熟肽分子量为 7743.8 Daltons，等电点 pI 为 7.78；在第 3639 个氨基酸处存在一个较强的疏水区；在第 37116个氨基酸处存在一个蛋白质超家族；56.5的 IGF-蛋白可能存在于细胞核；蛋白的空间结构主要有 3 个 螺旋组成。序列与鸭、鸡、火鸡、鸵鸟、鹌鹑的氨基酸同源性分别为 100.0、99.3、98、99.3、98.7，进化关系与鸭最近。 2.根据鸡的序列(M74176)，并参照 Kansaku 发表的鸭
42、的 5非翻译区序列设计兼并引物，从五龙鹅基因组 DNA 中克隆了 796bp 的 5非翻译区部分序列(GenBank 登录号为 DQ988932)。获得的序列与鸭相比有 4 处碱基缺失和7 处碱基插入，同源性为 98.1；与鸡相比有 4 处破基缺失和 3 处碱基插入，同源性为 93.0；共有 5 种常见的限制性内切酶的酶切位点 9 处。 3.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的序列(DQ662932)设计引物，克隆了表达 IGF-基因成熟蛋白部分的 IGF- m 序列 228bp。将此片段插入到 pET-32a 质粒中，构建重组质粒 pET-IGF- m，经 PCR 和酶切鉴定为阳性后，转化 E
43、 coli.BL21，经 1.0mM IPTG 25诱导 4h，目的基因的表达量较高。SDS-PAGE 电泳显示表达产物分子量约为 28KD， Western 印迹试验进一步表明，表达的蛋白为目的蛋白。4.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的保守区序列设计引物，提取五龙鹅心、脾、肝、肺、肾、胸肌、腿肌、睾丸、脂肪、脑 10 种组织的总 RNA，建立了利用 Real-time PCR 技术检测组织中 IGF-基因表达量的方法。最佳反应条件为：SYBR Green 终浓度为 1x，退火温度为 59，此时，熔解曲线显示单峰且峰值单一。五龙鹅 IGF-基因在各组织中的表达量的关系为：肝gt;脑gt;脾g
44、t;腿肌gt;胸肌gt;肺gt;心gt;睾丸gt;脂肪gt;肾。胰岛素样生长因子-(Insulin-like Growth Factor-，IGF-)是胰岛素样生长因子的重要成员，对机体的生长发育、组织修复、营养代谢、细胞凋亡以及细胞分化等方面有重要的生物学作用。本试验以五龙鹅为研究对象，克隆了IGF-基因 cDNA 和 5非翻译区部分序列，分析了序列的结构、同源性及蛋白的空间结构，对 IGF-进行了原核表达，并检测了 IGF-基因在五龙鹅 10 种组织中的表达情况。将为进一步研究 IGF-基因的结构与功能、 IGF-基因对五龙鹅生长发育的调控以及其与生产性能、经济性状之间的关系提供理论依据。
45、结果如下： 1.根据鸡(M32791)、鸭(AB061721)等的 IGF-基因保守序列设计引物，运用 RT-PCR 法从五龙鹅肝脏总 RNA 中克隆了 562bp 的 IGF-基因 cDNA 部分序列(GenBank 登录号为 DQ662932)，其中包括 462bp 的完整编码区。五龙鹅 IGF-基因编码 153 个氨基酸，成熟肽分子量为 7743.8 Daltons，等电点 pI 为 7.78；在第 3639 个氨基酸处存在一个较强的疏水区；在第 37116个氨基酸处存在一个蛋白质超家族；56.5的 IGF-蛋白可能存在于细胞核；蛋白的空间结构主要有 3 个 螺旋组成。序列与鸭、鸡、火鸡
46、、鸵鸟、鹌鹑的氨基酸同源性分别为 100.0、99.3、98、99.3、98.7，进化关系与鸭最近。 2.根据鸡的序列(M74176)，并参照 Kansaku 发表的鸭的 5非翻译区序列设计兼并引物，从五龙鹅基因组 DNA 中克隆了 796bp 的 5非翻译区部分序列(GenBank 登录号为 DQ988932)。获得的序列与鸭相比有 4 处碱基缺失和7 处碱基插入，同源性为 98.1；与鸡相比有 4 处破基缺失和 3 处碱基插入，同源性为 93.0；共有 5 种常见的限制性内切酶的酶切位点 9 处。 3.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的序列(DQ662932)设计引物，克隆了表达 IGF-
47、基因成熟蛋白部分的 IGF- m 序列 228bp。将此片段插入到 pET-32a 质粒中，构建重组质粒 pET-IGF- m，经 PCR 和酶切鉴定为阳性后，转化 E coli.BL21，经 1.0mM IPTG 25诱导 4h，目的基因的表达量较高。SDS-PAGE 电泳显示表达产物分子量约为 28KD， Western 印迹试验进一步表明，表达的蛋白为目的蛋白。4.根据已测得的五龙鹅 IGF-基因的保守区序列设计引物，提取五龙鹅心、脾、肝、肺、肾、胸肌、腿肌、睾丸、脂肪、脑 10 种组织的总 RNA，建立了利用 Real-time PCR 技术检测组织中 IGF-基因表达量的方法。最佳反
48、应条件为：SYBR Green 终浓度为 1x，退火温度为 59，此时，熔解曲线显示单峰且峰值单一。五龙鹅 IGF-基因在各组织中的表达量的关系为：肝gt;脑gt;脾gt;腿肌gt;胸肌gt;肺gt;心gt;睾丸gt;脂肪gt;肾。特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258 ，提供原格式文档。我们还可提供代笔服务，价格优惠，服务周到，包您通过。“垐垯櫃 换烫梯葺铑?endstreamendobj2x 滌甸?*U 躆 跦?l, 墀 VGi?o 嫅#4K 錶 c#x 刔 彟 2Z 皙笜?D 剧珞 H 鏋 Kx 時 k,褝仆? 稀?i 攸闥-) 荮vJ 釔絓|?殢 D 蘰厣?籶(柶胊?07 姻Rl 遜 ee 醳 B?苒?甊袝 t
