1、海洋生物学专业毕业论文 精品论文 三种弧菌外膜蛋白 K 基因的克隆、表达及其潜在应用的研究关键词：弧菌外膜蛋白 K 基因表达 免疫荧光 大菱鲆 活疫苗 注射免疫摘要：本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加2(w/v)的半乳糖
2、诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构建了哈维氏弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆菌，IPTG 诱导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接
3、 ELISA 对大菱鲆特异抗体检测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。正文内容本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加2(w/v)的半乳糖诱导 36 h 后，
4、利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构建了哈维氏弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆菌，IPTG 诱导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱
5、鲆特异抗体检测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜
6、下检测到了展示在酵母菌细胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构建了哈维氏弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆菌，IPTG 诱导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆特异抗体检测结果表明，实
7、验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细胞
8、表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构建了哈维氏弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆菌，IPTG 诱导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆特异抗体检测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精
9、酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细胞表面上的外膜蛋白。 同时利
10、用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构建了哈维氏弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆菌，IPTG 诱导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆特异抗体检测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激
11、鱼类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE
12、-30，构建了哈维氏弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆菌，IPTG 诱导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆特异抗体检测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼类产生一定得抗体，但其平
13、均效价却很低。本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构建了哈维氏弧菌，
14、副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆菌，IPTG 诱导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆特异抗体检测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。本研究根据哈
15、维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构建了哈维氏弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种
16、弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆菌，IPTG 诱导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆特异抗体检测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序
17、列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构建了哈维氏弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大
18、肠杆菌，IPTG 诱导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆特异抗体检测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(
19、GAPDH)基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构建了哈维氏弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆菌，IPTG 诱导 4
20、h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆特异抗体检测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列和酒精
21、酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构建了哈维氏弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆菌，IPTG 诱导 4h 后能够在大肠杆菌 M1
22、5 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆特异抗体检测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址
23、为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258 ，提供原格式文档。“垐垯櫃 换烫梯葺铑?endstreamendobj2x 滌?U 閩 AZ箾 FTP 鈦X 飼?狛P? 燚?琯嫼 b?袍*甒?颙嫯?4)=r 宵?i?j 彺帖 B3 锝檡骹笪 yLrQ#?0 鯖 l 壛枒l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛渓?擗#?“?# 綫 G 刿#K 芿$?7. 耟?Wa 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 皗 E|?pDb 癳$Fb 癳$Fb癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$F?責鯻 0 橔 C,f 薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵秾腵薍秾腵%?秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍
