1、妇产科学专业毕业论文 精品论文 Stat3 信号转导通路调控宫颈癌细胞系增殖凋亡的体外研究关键词：宫颈癌 信号转导通路 细胞增殖 细胞凋亡摘要：目的：研究宫颈癌细胞系中 Stat3、p-Stat3、Cyclin D1 与 Survivin 蛋白的表达，及 p-Stat3 与 CyclinD1、Survivin 表达的关系，应用该通路的特异性阻滞剂 AG490 作用于宫颈癌细胞系，观察其对宫颈癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响，检测 JAK2、P-Stat3、Stat3 蛋白表达及与下游靶基因产物CyclinD1、Survivin 蛋白表达的关系，探讨 Stat3 信号传导通路在宫颈癌发生发展中的
2、调控机制，寻找宫颈癌早期诊治的标志物，进一步分析通过药物阻断Stat3 信号通路在治疗宫颈癌中的作用。 方法：1.对人宫颈癌细胞系 Hela细胞进行体外培养。2.采用 Western-blot 技术检测宫颈癌细胞系中 Stat3、p-Stat3 蛋白及其下游靶基因产物 CyclinD1、Survivin 蛋白的表达。3.用不同浓度 AG490 处理 Hela 细胞，作为实验组，将加入无血清培养基的 Hela 细胞作为对照组，同时设不接种细胞的空白对照组。4.MTT 法检测不同浓度(25mol/L、50mol/L、100mol/L)AG490 对 Hela 细胞作用 24h、48h 及 72h后
3、细胞的增殖情况。5.流式细胞技术检测加入25mol/L、50mol/L、100mol/LAG490 作用 48h 后细胞周期的变化。6.流式细胞技术检测加入 25mol/L、50mol/L、100mol/L AG490 对 Hela 细胞作用 24h、48h 及 72h 后细胞的凋亡情况。7.Western Blot 法检测25mol/L、50mol/L、100mol/L AG490 作用 48h 后，Hela 细胞JAK2、Stat3 p-Stat3 表达情况及下游靶基因产物细胞周期素(CyclinD1)及生存素(Survivin)的表达水平，并分析 p-Stat3 与 CyclinD1 及
4、 Survivin 表达的相关性。 结果：1.宫颈癌细胞系 Hela 细胞中存在着组成性激活的 Stat3 信号。2.p-Stat3 与 CyclinD1 及 Survivin 表达趋势一致。3.Hela 细胞经 AG490处理后，细胞增殖水平下降，有浓度依赖效应。AG490 处理后 48d，时，各浓度组与对照组比较有统计学差异(Plt;0.01)。AG490 加入浓度在25mol/L100mol/L 范围内时，AG490 浓度越高，其对 Hela 细胞增殖抑制效应越强(Plt;0.05)。对 AG490 处理 Hela 细胞不同时间长度后细胞增殖状态的检测表明，25mol/L AG490 处
5、理 Hela 细胞 24 小时就开始表现出增殖抑制效应，72 小时后表现出明显的抑制效应，细胞生存率持续下降(Plt;0.05)，有时间依赖性。4.阻断 Star3 信号传导通路使宫颈癌细胞系细胞周期阻滞。50mol/L AG490 作用细胞 48h 后 G0/G1 期从(65.371.18)上升至(74.673.13)(Plt;0.05)，S 期从(22.540.78)下降至(17.451.45)(Plt;0.05)，细胞基本阻滞于 G0/G1 期。同时，AG490对 Hela 细胞周期的阻滞作用有剂量依赖性。5.AG490 促进宫颈癌细胞系凋亡。25umol/L AG490 作用于 Hel
6、a 细胞 24h 后，流式细胞检测结果显示细胞凋亡率为(8.432.57)。25mol/L、50mol/L、100mol/LAG490 处理 Hela 细胞48h 后，凋亡率分别为(13.581.42)，(23.441.55)，(31.052.09)，与对照组检测结果(2.990.75)比较有统计学差异(Plt;0.05)，且各浓度组之间比较有统计学差异(F=131.15，Plt;0.05)，表明 AG490 促进Hela 细胞凋亡并有浓度依赖效应。6.不同浓度 AG490 处理细胞后，Western blot 检测发现各处理组 JAK2 及 P-Stat3 蛋白表达水平降低(Plt;0.05
7、)，Stat3 蛋白表达与对照组之间变化不大(Pgt;0.05)。7.不同浓度 AG490 作用于 Hela 细胞后 Stat3 信号通路下游靶基因产物 CyclinD1 及 Survivin 表达下调。经 Pearsons 相关性分析显示，在宫颈癌细胞中 p-Stat3 与 CyclinD1 及Survivin 表达呈线性相关(r=0.901，Plt;0.01；r=0.844，Plt;0.01)，提示 CyclinD1 及Sunrivin 作为 STAT3 信号转导通路的重要下游基因产物，参与了 Hela 细胞的细胞周期、增殖及凋亡的调控。 结论：1.从蛋白水平证实宫颈癌中存在着组成性激活的
8、 Stat3 信号通路。2.AG490 可以特异地阻断 Hela 细胞中组成性激活的 Stat3 信号通路。3.AG490 阻断 Stat3 转导通路后，宫颈癌细胞系 Hela 细胞的 G0/G1 期比例明显增高，S 期细胞比率降低，细胞周期阻滞，细胞的增殖水平显著下降，该效应主要是通过调节 Stat3 信号通路下游靶基因产物 CyclinD1来实现。4.AG490 能够抑制宫颈癌细胞的增殖，促进细胞凋亡，主要是通过下调 Stat3 信号通路下游产物 Survivin 来实现。5.AG490 可使 JAK2，p-Stat3 及下游靶基因产物 CyclinD1、Survivin 表达下调，同时
9、p-Stat3 与 CyclinD1 及Survivin 表达呈正相关。6.Stag 信号转导通路通过调控下游靶基因产物CyclinD1、Survivin 来促进人宫颈癌细胞系的细胞周期进行，加快细胞增殖，抑制细胞凋亡，参与宫颈癌的发生发展，通过阻断该通路来进行分子靶向治疗。7.p-Stat3 蛋白可作为宫颈癌早期诊断、观察病情的一种生物学指标。正文内容目的：研究宫颈癌细胞系中 Stat3、p-Stat3、Cyclin D1 与 Survivin 蛋白的表达，及 p-Stat3 与 CyclinD1、Survivin 表达的关系，应用该通路的特异性阻滞剂 AG490 作用于宫颈癌细胞系，观察其
10、对宫颈癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响，检测 JAK2、P-Stat3、Stat3 蛋白表达及与下游靶基因产物CyclinD1、Survivin 蛋白表达的关系，探讨 Stat3 信号传导通路在宫颈癌发生发展中的调控机制，寻找宫颈癌早期诊治的标志物，进一步分析通过药物阻断Stat3 信号通路在治疗宫颈癌中的作用。 方法：1.对人宫颈癌细胞系 Hela细胞进行体外培养。2.采用 Western-blot 技术检测宫颈癌细胞系中 Stat3、p-Stat3 蛋白及其下游靶基因产物 CyclinD1、Survivin 蛋白的表达。3.用不同浓度 AG490 处理 Hela 细胞，作为实验组，将加入无
11、血清培养基的 Hela 细胞作为对照组，同时设不接种细胞的空白对照组。4.MTT 法检测不同浓度(25mol/L、50mol/L、100mol/L)AG490 对 Hela 细胞作用 24h、48h 及 72h后细胞的增殖情况。5.流式细胞技术检测加入25mol/L、50mol/L、100mol/LAG490 作用 48h 后细胞周期的变化。6.流式细胞技术检测加入 25mol/L、50mol/L、100mol/L AG490 对 Hela 细胞作用 24h、48h 及 72h 后细胞的凋亡情况。7.Western Blot 法检测25mol/L、50mol/L、100mol/L AG490
12、作用 48h 后，Hela 细胞JAK2、Stat3 p-Stat3 表达情况及下游靶基因产物细胞周期素(CyclinD1)及生存素(Survivin)的表达水平，并分析 p-Stat3 与 CyclinD1 及 Survivin 表达的相关性。 结果：1.宫颈癌细胞系 Hela 细胞中存在着组成性激活的 Stat3 信号。2.p-Stat3 与 CyclinD1 及 Survivin 表达趋势一致。3.Hela 细胞经 AG490处理后，细胞增殖水平下降，有浓度依赖效应。AG490 处理后 48d，时，各浓度组与对照组比较有统计学差异(Plt;0.01)。AG490 加入浓度在25mol/L
13、100mol/L 范围内时，AG490 浓度越高，其对 Hela 细胞增殖抑制效应越强(Plt;0.05)。对 AG490 处理 Hela 细胞不同时间长度后细胞增殖状态的检测表明，25mol/L AG490 处理 Hela 细胞 24 小时就开始表现出增殖抑制效应，72 小时后表现出明显的抑制效应，细胞生存率持续下降(Plt;0.05)，有时间依赖性。4.阻断 Star3 信号传导通路使宫颈癌细胞系细胞周期阻滞。50mol/L AG490 作用细胞 48h 后 G0/G1 期从(65.371.18)上升至(74.673.13)(Plt;0.05)，S 期从(22.540.78)下降至(17.
14、451.45)(Plt;0.05)，细胞基本阻滞于 G0/G1 期。同时，AG490对 Hela 细胞周期的阻滞作用有剂量依赖性。5.AG490 促进宫颈癌细胞系凋亡。25umol/L AG490 作用于 Hela 细胞 24h 后，流式细胞检测结果显示细胞凋亡率为(8.432.57)。25mol/L、50mol/L、100mol/LAG490 处理 Hela 细胞48h 后，凋亡率分别为(13.581.42)，(23.441.55)，(31.052.09)，与对照组检测结果(2.990.75)比较有统计学差异(Plt;0.05)，且各浓度组之间比较有统计学差异(F=131.15，Plt;0.
15、05)，表明 AG490 促进Hela 细胞凋亡并有浓度依赖效应。6.不同浓度 AG490 处理细胞后，Western blot 检测发现各处理组 JAK2 及 P-Stat3 蛋白表达水平降低(Plt;0.05)，Stat3 蛋白表达与对照组之间变化不大(Pgt;0.05)。7.不同浓度 AG490 作用于 Hela 细胞后 Stat3 信号通路下游靶基因产物 CyclinD1 及 Survivin 表达下调。经 Pearsons 相关性分析显示，在宫颈癌细胞中 p-Stat3 与 CyclinD1 及Survivin 表达呈线性相关(r=0.901，Plt;0.01；r=0.844，Plt
16、;0.01)，提示 CyclinD1 及Sunrivin 作为 STAT3 信号转导通路的重要下游基因产物，参与了 Hela 细胞的细胞周期、增殖及凋亡的调控。 结论：1.从蛋白水平证实宫颈癌中存在着组成性激活的 Stat3 信号通路。2.AG490 可以特异地阻断 Hela 细胞中组成性激活的 Stat3 信号通路。3.AG490 阻断 Stat3 转导通路后，宫颈癌细胞系 Hela 细胞的 G0/G1 期比例明显增高，S 期细胞比率降低，细胞周期阻滞，细胞的增殖水平显著下降，该效应主要是通过调节 Stat3 信号通路下游靶基因产物 CyclinD1来实现。4.AG490 能够抑制宫颈癌细胞
17、的增殖，促进细胞凋亡，主要是通过下调 Stat3 信号通路下游产物 Survivin 来实现。5.AG490 可使 JAK2，p-Stat3 及下游靶基因产物 CyclinD1、Survivin 表达下调，同时 p-Stat3 与 CyclinD1 及Survivin 表达呈正相关。6.Stag 信号转导通路通过调控下游靶基因产物CyclinD1、Survivin 来促进人宫颈癌细胞系的细胞周期进行，加快细胞增殖，抑制细胞凋亡，参与宫颈癌的发生发展，通过阻断该通路来进行分子靶向治疗。7.p-Stat3 蛋白可作为宫颈癌早期诊断、观察病情的一种生物学指标。目的：研究宫颈癌细胞系中 Stat3、p
18、-Stat3、Cyclin D1 与 Survivin 蛋白的表达，及 p-Stat3 与 CyclinD1、Survivin 表达的关系，应用该通路的特异性阻滞剂 AG490 作用于宫颈癌细胞系，观察其对宫颈癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响，检测 JAK2、P-Stat3、Stat3 蛋白表达及与下游靶基因产物CyclinD1、Survivin 蛋白表达的关系，探讨 Stat3 信号传导通路在宫颈癌发生发展中的调控机制，寻找宫颈癌早期诊治的标志物，进一步分析通过药物阻断Stat3 信号通路在治疗宫颈癌中的作用。 方法：1.对人宫颈癌细胞系 Hela细胞进行体外培养。2.采用 Western-
19、blot 技术检测宫颈癌细胞系中 Stat3、p-Stat3 蛋白及其下游靶基因产物 CyclinD1、Survivin 蛋白的表达。3.用不同浓度 AG490 处理 Hela 细胞，作为实验组，将加入无血清培养基的 Hela 细胞作为对照组，同时设不接种细胞的空白对照组。4.MTT 法检测不同浓度(25mol/L、50mol/L、100mol/L)AG490 对 Hela 细胞作用 24h、48h 及 72h后细胞的增殖情况。5.流式细胞技术检测加入25mol/L、50mol/L、100mol/LAG490 作用 48h 后细胞周期的变化。6.流式细胞技术检测加入 25mol/L、50mol
20、/L、100mol/L AG490 对 Hela 细胞作用 24h、48h 及 72h 后细胞的凋亡情况。7.Western Blot 法检测25mol/L、50mol/L、100mol/L AG490 作用 48h 后，Hela 细胞JAK2、Stat3 p-Stat3 表达情况及下游靶基因产物细胞周期素(CyclinD1)及生存素(Survivin)的表达水平，并分析 p-Stat3 与 CyclinD1 及 Survivin 表达的相关性。 结果：1.宫颈癌细胞系 Hela 细胞中存在着组成性激活的 Stat3 信号。2.p-Stat3 与 CyclinD1 及 Survivin 表达趋
21、势一致。3.Hela 细胞经 AG490处理后，细胞增殖水平下降，有浓度依赖效应。AG490 处理后 48d，时，各浓度组与对照组比较有统计学差异(Plt;0.01)。AG490 加入浓度在25mol/L100mol/L 范围内时，AG490 浓度越高，其对 Hela 细胞增殖抑制效应越强(Plt;0.05)。对 AG490 处理 Hela 细胞不同时间长度后细胞增殖状态的检测表明，25mol/L AG490 处理 Hela 细胞 24 小时就开始表现出增殖抑制效应，72 小时后表现出明显的抑制效应，细胞生存率持续下降(Plt;0.05)，有时间依赖性。4.阻断 Star3 信号传导通路使宫颈
22、癌细胞系细胞周期阻滞。50mol/L AG490 作用细胞 48h 后 G0/G1 期从(65.371.18)上升至(74.673.13)(Plt;0.05)，S 期从(22.540.78)下降至(17.451.45)(Plt;0.05)，细胞基本阻滞于 G0/G1 期。同时，AG490对 Hela 细胞周期的阻滞作用有剂量依赖性。5.AG490 促进宫颈癌细胞系凋亡。25umol/L AG490 作用于 Hela 细胞 24h 后，流式细胞检测结果显示细胞凋亡率为(8.432.57)。25mol/L、50mol/L、100mol/LAG490 处理 Hela 细胞48h 后，凋亡率分别为(1
23、3.581.42)，(23.441.55)，(31.052.09)，与对照组检测结果(2.990.75)比较有统计学差异(Plt;0.05)，且各浓度组之间比较有统计学差异(F=131.15，Plt;0.05)，表明 AG490 促进Hela 细胞凋亡并有浓度依赖效应。6.不同浓度 AG490 处理细胞后，Western blot 检测发现各处理组 JAK2 及 P-Stat3 蛋白表达水平降低(Plt;0.05)，Stat3 蛋白表达与对照组之间变化不大(Pgt;0.05)。7.不同浓度 AG490 作用于 Hela 细胞后 Stat3 信号通路下游靶基因产物 CyclinD1 及 Surv
24、ivin 表达下调。经 Pearsons 相关性分析显示，在宫颈癌细胞中 p-Stat3 与 CyclinD1 及Survivin 表达呈线性相关(r=0.901，Plt;0.01；r=0.844，Plt;0.01)，提示 CyclinD1 及Sunrivin 作为 STAT3 信号转导通路的重要下游基因产物，参与了 Hela 细胞的细胞周期、增殖及凋亡的调控。 结论：1.从蛋白水平证实宫颈癌中存在着组成性激活的 Stat3 信号通路。2.AG490 可以特异地阻断 Hela 细胞中组成性激活的 Stat3 信号通路。3.AG490 阻断 Stat3 转导通路后，宫颈癌细胞系 Hela 细胞的
25、 G0/G1 期比例明显增高，S 期细胞比率降低，细胞周期阻滞，细胞的增殖水平显著下降，该效应主要是通过调节 Stat3 信号通路下游靶基因产物 CyclinD1来实现。4.AG490 能够抑制宫颈癌细胞的增殖，促进细胞凋亡，主要是通过下调 Stat3 信号通路下游产物 Survivin 来实现。5.AG490 可使 JAK2，p-Stat3 及下游靶基因产物 CyclinD1、Survivin 表达下调，同时 p-Stat3 与 CyclinD1 及Survivin 表达呈正相关。6.Stag 信号转导通路通过调控下游靶基因产物CyclinD1、Survivin 来促进人宫颈癌细胞系的细胞周
26、期进行，加快细胞增殖，抑制细胞凋亡，参与宫颈癌的发生发展，通过阻断该通路来进行分子靶向治疗。7.p-Stat3 蛋白可作为宫颈癌早期诊断、观察病情的一种生物学指标。目的：研究宫颈癌细胞系中 Stat3、p-Stat3、Cyclin D1 与 Survivin 蛋白的表达，及 p-Stat3 与 CyclinD1、Survivin 表达的关系，应用该通路的特异性阻滞剂 AG490 作用于宫颈癌细胞系，观察其对宫颈癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响，检测 JAK2、P-Stat3、Stat3 蛋白表达及与下游靶基因产物CyclinD1、Survivin 蛋白表达的关系，探讨 Stat3 信号传导通路
27、在宫颈癌发生发展中的调控机制，寻找宫颈癌早期诊治的标志物，进一步分析通过药物阻断Stat3 信号通路在治疗宫颈癌中的作用。 方法：1.对人宫颈癌细胞系 Hela细胞进行体外培养。2.采用 Western-blot 技术检测宫颈癌细胞系中 Stat3、p-Stat3 蛋白及其下游靶基因产物 CyclinD1、Survivin 蛋白的表达。3.用不同浓度 AG490 处理 Hela 细胞，作为实验组，将加入无血清培养基的 Hela 细胞作为对照组，同时设不接种细胞的空白对照组。4.MTT 法检测不同浓度(25mol/L、50mol/L、100mol/L)AG490 对 Hela 细胞作用 24h、
28、48h 及 72h后细胞的增殖情况。5.流式细胞技术检测加入25mol/L、50mol/L、100mol/LAG490 作用 48h 后细胞周期的变化。6.流式细胞技术检测加入 25mol/L、50mol/L、100mol/L AG490 对 Hela 细胞作用 24h、48h 及 72h 后细胞的凋亡情况。7.Western Blot 法检测25mol/L、50mol/L、100mol/L AG490 作用 48h 后，Hela 细胞JAK2、Stat3 p-Stat3 表达情况及下游靶基因产物细胞周期素(CyclinD1)及生存素(Survivin)的表达水平，并分析 p-Stat3 与
29、CyclinD1 及 Survivin 表达的相关性。 结果：1.宫颈癌细胞系 Hela 细胞中存在着组成性激活的 Stat3 信号。2.p-Stat3 与 CyclinD1 及 Survivin 表达趋势一致。3.Hela 细胞经 AG490处理后，细胞增殖水平下降，有浓度依赖效应。AG490 处理后 48d，时，各浓度组与对照组比较有统计学差异(Plt;0.01)。AG490 加入浓度在25mol/L100mol/L 范围内时，AG490 浓度越高，其对 Hela 细胞增殖抑制效应越强(Plt;0.05)。对 AG490 处理 Hela 细胞不同时间长度后细胞增殖状态的检测表明，25mol
30、/L AG490 处理 Hela 细胞 24 小时就开始表现出增殖抑制效应，72 小时后表现出明显的抑制效应，细胞生存率持续下降(Plt;0.05)，有时间依赖性。4.阻断 Star3 信号传导通路使宫颈癌细胞系细胞周期阻滞。50mol/L AG490 作用细胞 48h 后 G0/G1 期从(65.371.18)上升至(74.673.13)(Plt;0.05)，S 期从(22.540.78)下降至(17.451.45)(Plt;0.05)，细胞基本阻滞于 G0/G1 期。同时，AG490对 Hela 细胞周期的阻滞作用有剂量依赖性。5.AG490 促进宫颈癌细胞系凋亡。25umol/L AG4
31、90 作用于 Hela 细胞 24h 后，流式细胞检测结果显示细胞凋亡率为(8.432.57)。25mol/L、50mol/L、100mol/LAG490 处理 Hela 细胞48h 后，凋亡率分别为(13.581.42)，(23.441.55)，(31.052.09)，与对照组检测结果(2.990.75)比较有统计学差异(Plt;0.05)，且各浓度组之间比较有统计学差异(F=131.15，Plt;0.05)，表明 AG490 促进Hela 细胞凋亡并有浓度依赖效应。6.不同浓度 AG490 处理细胞后，Western blot 检测发现各处理组 JAK2 及 P-Stat3 蛋白表达水平降
32、低(Plt;0.05)，Stat3 蛋白表达与对照组之间变化不大(Pgt;0.05)。7.不同浓度 AG490 作用于 Hela 细胞后 Stat3 信号通路下游靶基因产物 CyclinD1 及 Survivin 表达下调。经 Pearsons 相关性分析显示，在宫颈癌细胞中 p-Stat3 与 CyclinD1 及Survivin 表达呈线性相关(r=0.901，Plt;0.01；r=0.844，Plt;0.01)，提示 CyclinD1 及Sunrivin 作为 STAT3 信号转导通路的重要下游基因产物，参与了 Hela 细胞的细胞周期、增殖及凋亡的调控。 结论：1.从蛋白水平证实宫颈癌
33、中存在着组成性激活的 Stat3 信号通路。2.AG490 可以特异地阻断 Hela 细胞中组成性激活的 Stat3 信号通路。3.AG490 阻断 Stat3 转导通路后，宫颈癌细胞系 Hela 细胞的 G0/G1 期比例明显增高，S 期细胞比率降低，细胞周期阻滞，细胞的增殖水平显著下降，该效应主要是通过调节 Stat3 信号通路下游靶基因产物 CyclinD1来实现。4.AG490 能够抑制宫颈癌细胞的增殖，促进细胞凋亡，主要是通过下调 Stat3 信号通路下游产物 Survivin 来实现。5.AG490 可使 JAK2，p-Stat3 及下游靶基因产物 CyclinD1、Survivi
34、n 表达下调，同时 p-Stat3 与 CyclinD1 及Survivin 表达呈正相关。6.Stag 信号转导通路通过调控下游靶基因产物CyclinD1、Survivin 来促进人宫颈癌细胞系的细胞周期进行，加快细胞增殖，抑制细胞凋亡，参与宫颈癌的发生发展，通过阻断该通路来进行分子靶向治疗。7.p-Stat3 蛋白可作为宫颈癌早期诊断、观察病情的一种生物学指标。目的：研究宫颈癌细胞系中 Stat3、p-Stat3、Cyclin D1 与 Survivin 蛋白的表达，及 p-Stat3 与 CyclinD1、Survivin 表达的关系，应用该通路的特异性阻滞剂 AG490 作用于宫颈癌细
35、胞系，观察其对宫颈癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响，检测 JAK2、P-Stat3、Stat3 蛋白表达及与下游靶基因产物CyclinD1、Survivin 蛋白表达的关系，探讨 Stat3 信号传导通路在宫颈癌发生发展中的调控机制，寻找宫颈癌早期诊治的标志物，进一步分析通过药物阻断Stat3 信号通路在治疗宫颈癌中的作用。 方法：1.对人宫颈癌细胞系 Hela细胞进行体外培养。2.采用 Western-blot 技术检测宫颈癌细胞系中 Stat3、p-Stat3 蛋白及其下游靶基因产物 CyclinD1、Survivin 蛋白的表达。3.用不同浓度 AG490 处理 Hela 细胞，作为实验
36、组，将加入无血清培养基的 Hela 细胞作为对照组，同时设不接种细胞的空白对照组。4.MTT 法检测不同浓度(25mol/L、50mol/L、100mol/L)AG490 对 Hela 细胞作用 24h、48h 及 72h后细胞的增殖情况。5.流式细胞技术检测加入25mol/L、50mol/L、100mol/LAG490 作用 48h 后细胞周期的变化。6.流式细胞技术检测加入 25mol/L、50mol/L、100mol/L AG490 对 Hela 细胞作用 24h、48h 及 72h 后细胞的凋亡情况。7.Western Blot 法检测25mol/L、50mol/L、100mol/L
37、AG490 作用 48h 后，Hela 细胞JAK2、Stat3 p-Stat3 表达情况及下游靶基因产物细胞周期素(CyclinD1)及生存素(Survivin)的表达水平，并分析 p-Stat3 与 CyclinD1 及 Survivin 表达的相关性。 结果：1.宫颈癌细胞系 Hela 细胞中存在着组成性激活的 Stat3 信号。2.p-Stat3 与 CyclinD1 及 Survivin 表达趋势一致。3.Hela 细胞经 AG490处理后，细胞增殖水平下降，有浓度依赖效应。AG490 处理后 48d，时，各浓度组与对照组比较有统计学差异(Plt;0.01)。AG490 加入浓度在2
38、5mol/L100mol/L 范围内时，AG490 浓度越高，其对 Hela 细胞增殖抑制效应越强(Plt;0.05)。对 AG490 处理 Hela 细胞不同时间长度后细胞增殖状态的检测表明，25mol/L AG490 处理 Hela 细胞 24 小时就开始表现出增殖抑制效应，72 小时后表现出明显的抑制效应，细胞生存率持续下降(Plt;0.05)，有时间依赖性。4.阻断 Star3 信号传导通路使宫颈癌细胞系细胞周期阻滞。50mol/L AG490 作用细胞 48h 后 G0/G1 期从(65.371.18)上升至(74.673.13)(Plt;0.05)，S 期从(22.540.78)下
39、降至(17.451.45)(Plt;0.05)，细胞基本阻滞于 G0/G1 期。同时，AG490对 Hela 细胞周期的阻滞作用有剂量依赖性。5.AG490 促进宫颈癌细胞系凋亡。25umol/L AG490 作用于 Hela 细胞 24h 后，流式细胞检测结果显示细胞凋亡率为(8.432.57)。25mol/L、50mol/L、100mol/LAG490 处理 Hela 细胞48h 后，凋亡率分别为(13.581.42)，(23.441.55)，(31.052.09)，与对照组检测结果(2.990.75)比较有统计学差异(Plt;0.05)，且各浓度组之间比较有统计学差异(F=131.15，
40、Plt;0.05)，表明 AG490 促进Hela 细胞凋亡并有浓度依赖效应。6.不同浓度 AG490 处理细胞后，Western blot 检测发现各处理组 JAK2 及 P-Stat3 蛋白表达水平降低(Plt;0.05)，Stat3 蛋白表达与对照组之间变化不大(Pgt;0.05)。7.不同浓度 AG490 作用于 Hela 细胞后 Stat3 信号通路下游靶基因产物 CyclinD1 及 Survivin 表达下调。经 Pearsons 相关性分析显示，在宫颈癌细胞中 p-Stat3 与 CyclinD1 及Survivin 表达呈线性相关(r=0.901，Plt;0.01；r=0.8
41、44，Plt;0.01)，提示 CyclinD1 及Sunrivin 作为 STAT3 信号转导通路的重要下游基因产物，参与了 Hela 细胞的细胞周期、增殖及凋亡的调控。 结论：1.从蛋白水平证实宫颈癌中存在着组成性激活的 Stat3 信号通路。2.AG490 可以特异地阻断 Hela 细胞中组成性激活的 Stat3 信号通路。3.AG490 阻断 Stat3 转导通路后，宫颈癌细胞系 Hela 细胞的 G0/G1 期比例明显增高，S 期细胞比率降低，细胞周期阻滞，细胞的增殖水平显著下降，该效应主要是通过调节 Stat3 信号通路下游靶基因产物 CyclinD1来实现。4.AG490 能够抑
42、制宫颈癌细胞的增殖，促进细胞凋亡，主要是通过下调 Stat3 信号通路下游产物 Survivin 来实现。5.AG490 可使 JAK2，p-Stat3 及下游靶基因产物 CyclinD1、Survivin 表达下调，同时 p-Stat3 与 CyclinD1 及Survivin 表达呈正相关。6.Stag 信号转导通路通过调控下游靶基因产物CyclinD1、Survivin 来促进人宫颈癌细胞系的细胞周期进行，加快细胞增殖，抑制细胞凋亡，参与宫颈癌的发生发展，通过阻断该通路来进行分子靶向治疗。7.p-Stat3 蛋白可作为宫颈癌早期诊断、观察病情的一种生物学指标。目的：研究宫颈癌细胞系中 S
43、tat3、p-Stat3、Cyclin D1 与 Survivin 蛋白的表达，及 p-Stat3 与 CyclinD1、Survivin 表达的关系，应用该通路的特异性阻滞剂 AG490 作用于宫颈癌细胞系，观察其对宫颈癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响，检测 JAK2、P-Stat3、Stat3 蛋白表达及与下游靶基因产物CyclinD1、Survivin 蛋白表达的关系，探讨 Stat3 信号传导通路在宫颈癌发生发展中的调控机制，寻找宫颈癌早期诊治的标志物，进一步分析通过药物阻断Stat3 信号通路在治疗宫颈癌中的作用。 方法：1.对人宫颈癌细胞系 Hela细胞进行体外培养。2.采用 We
44、stern-blot 技术检测宫颈癌细胞系中 Stat3、p-Stat3 蛋白及其下游靶基因产物 CyclinD1、Survivin 蛋白的表达。3.用不同浓度 AG490 处理 Hela 细胞，作为实验组，将加入无血清培养基的 Hela 细胞作为对照组，同时设不接种细胞的空白对照组。4.MTT 法检测不同浓度(25mol/L、50mol/L、100mol/L)AG490 对 Hela 细胞作用 24h、48h 及 72h后细胞的增殖情况。5.流式细胞技术检测加入25mol/L、50mol/L、100mol/LAG490 作用 48h 后细胞周期的变化。6.流式细胞技术检测加入 25mol/L
45、、50mol/L、100mol/L AG490 对 Hela 细胞作用 24h、48h 及 72h 后细胞的凋亡情况。7.Western Blot 法检测25mol/L、50mol/L、100mol/L AG490 作用 48h 后，Hela 细胞JAK2、Stat3 p-Stat3 表达情况及下游靶基因产物细胞周期素(CyclinD1)及生存素(Survivin)的表达水平，并分析 p-Stat3 与 CyclinD1 及 Survivin 表达的相关性。 结果：1.宫颈癌细胞系 Hela 细胞中存在着组成性激活的 Stat3 信号。2.p-Stat3 与 CyclinD1 及 Surviv
46、in 表达趋势一致。3.Hela 细胞经 AG490处理后，细胞增殖水平下降，有浓度依赖效应。AG490 处理后 48d，时，各浓度组与对照组比较有统计学差异(Plt;0.01)。AG490 加入浓度在25mol/L100mol/L 范围内时，AG490 浓度越高，其对 Hela 细胞增殖抑制效应越强(Plt;0.05)。对 AG490 处理 Hela 细胞不同时间长度后细胞增殖状态的检测表明，25mol/L AG490 处理 Hela 细胞 24 小时就开始表现出增殖抑制效应，72 小时后表现出明显的抑制效应，细胞生存率持续下降(Plt;0.05)，有时间依赖性。4.阻断 Star3 信号传
47、导通路使宫颈癌细胞系细胞周期阻滞。50mol/L AG490 作用细胞 48h 后 G0/G1 期从(65.371.18)上升至(74.673.13)(Plt;0.05)，S 期从(22.540.78)下降至(17.451.45)(Plt;0.05)，细胞基本阻滞于 G0/G1 期。同时，AG490对 Hela 细胞周期的阻滞作用有剂量依赖性。5.AG490 促进宫颈癌细胞系凋亡。25umol/L AG490 作用于 Hela 细胞 24h 后，流式细胞检测结果显示细胞凋亡率为(8.432.57)。25mol/L、50mol/L、100mol/LAG490 处理 Hela 细胞48h 后，凋亡
48、率分别为(13.581.42)，(23.441.55)，(31.052.09)，与对照组检测结果(2.990.75)比较有统计学差异(Plt;0.05)，且各浓度组之间比较有统计学差异(F=131.15，Plt;0.05)，表明 AG490 促进Hela 细胞凋亡并有浓度依赖效应。6.不同浓度 AG490 处理细胞后，Western blot 检测发现各处理组 JAK2 及 P-Stat3 蛋白表达水平降低(Plt;0.05)，Stat3 蛋白表达与对照组之间变化不大(Pgt;0.05)。7.不同浓度 AG490 作用于 Hela 细胞后 Stat3 信号通路下游靶基因产物 CyclinD1
49、及 Survivin 表达下调。经 Pearsons 相关性分析显示，在宫颈癌细胞中 p-Stat3 与 CyclinD1 及Survivin 表达呈线性相关(r=0.901，Plt;0.01；r=0.844，Plt;0.01)，提示 CyclinD1 及Sunrivin 作为 STAT3 信号转导通路的重要下游基因产物，参与了 Hela 细胞的细胞周期、增殖及凋亡的调控。 结论：1.从蛋白水平证实宫颈癌中存在着组成性激活的 Stat3 信号通路。2.AG490 可以特异地阻断 Hela 细胞中组成性激活的 Stat3 信号通路。3.AG490 阻断 Stat3 转导通路后，宫颈癌细胞系 Hela 细胞的 G0/G1 期比例明显增高，S 期细胞比率降低，细胞周期阻滞，细胞的增殖水平显
