gnb2l1基因表达的近日节律.doc

1、生物医学工程专业优秀论文 Gnb2l1 基因表达的近日节律关键词：时间生物学 近日节律 神经胶质瘤细胞 动物模型 基因编码摘要：前期研究发现 Gnb2l1 基因编码的蛋白能够与近日节律系统的核心元件PERIOD1 蛋白相互作用。本文研究 Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内外的近日节律特征。包括二部分：1、体外研究：研究大鼠 C6 细胞中 Gnb2l1 基因是否存在节律性表达，并观察 Gnb2l1 是否与 Per1 一样对刺激产生立早反应。2、体内研究：观察 Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内是否存在节律性表达。 方法： 实验一：体外研究分别采用 PMA(Phorbol 12-Myrista

2、te 13-acetate，12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐)及马血清刺激体外培养的小鼠 NIH-3T3 细胞，RT-PCR 检测不同时间点 mPer1 mRNA 的表达水平，比较两者的诱导效率；PMA 刺激体外培养的大鼠 C6 神经胶质瘤细胞，RT-PCR 检测不同时间点 rPerl，rDbp mRNA 的表达水平。在确定 C6 细胞具有近日节律特征后，RT-PCR检测不同时间点rGnb2l1 mRNA 的变化规律。 实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，采用半定量 RT-PCR 的方法观察大鼠脑组织及肝脏组织的 Gnb2l1，Per1 mRNA 的变化规律；采用 WesternBl

3、ot 方法检测大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb2l1 编码蛋白、PER1 蛋白在不同时间点的变化。 结果： 实验一：体外研究 PMA 及 50的马血清均能诱导 NIH-3T3 细胞 mPer1 的近日节律表达且诱导效率近似；C6 细胞的 rPer1，rDbp 基因表达呈近日节律，同时 PMA 刺激的 C6 细胞的 rGnb2l1 的表达也呈近日节荡，并且与 Per1 一样对刺激产生立早反应。实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb211 mRNA 和节律基因 Per1 mRNA 及其蛋白产物均呈近日节律。 结论： PMA 是一种有效的体外节律诱导剂；经 PMA

4、 诱导后，C6 细胞表现出近日节律特征，Gnb211 的 mRNA 存在着近日节律，并且是一种立早基因。在大鼠体内，Gnb2l1 基因及其编码的蛋白也存在着近日振荡。通过体内外实验，可以看出 Gnb2l1 存在着广泛的近日节律性振荡，其相位总在节律基因 Per1 之前。由于 Gnb2l1 基因编码的蛋臼 RACK1 是一种重要的接头分子，参与了 PKC 信号通路，而 Per1 基因的启动子又可以被 PKC通路激活，因此 RACKl 蛋白很可能是 Per1 的上游调控分子，参与激活了 Per1基因的启动子。正文内容前期研究发现 Gnb2l1 基因编码的蛋白能够与近日节律系统的核心元件PERIOD

5、1 蛋白相互作用。本文研究 Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内外的近日节律特征。包括二部分：1、体外研究：研究大鼠 C6 细胞中 Gnb2l1 基因是否存在节律性表达，并观察 Gnb2l1 是否与 Per1 一样对刺激产生立早反应。2、体内研究：观察 Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内是否存在节律性表达。 方法： 实验一：体外研究分别采用 PMA(Phorbol 12-Myristate 13-acetate，12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐)及马血清刺激体外培养的小鼠 NIH-3T3 细胞，RT-PCR 检测不同时间点 mPer1 mRNA 的表达水平，比较两者的诱导效率；PMA 刺激体

6、外培养的大鼠 C6 神经胶质瘤细胞，RT-PCR 检测不同时间点 rPerl，rDbp mRNA 的表达水平。在确定 C6 细胞具有近日节律特征后，RT-PCR检测不同时间点rGnb2l1 mRNA 的变化规律。 实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，采用半定量 RT-PCR 的方法观察大鼠脑组织及肝脏组织的 Gnb2l1，Per1 mRNA 的变化规律；采用 WesternBlot 方法检测大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb2l1 编码蛋白、PER1 蛋白在不同时间点的变化。 结果： 实验一：体外研究 PMA 及 50的马血清均能诱导 NIH-3T3 细胞 mPer1 的近日节律表达且诱

7、导效率近似；C6 细胞的 rPer1，rDbp 基因表达呈近日节律，同时 PMA 刺激的 C6 细胞的 rGnb2l1 的表达也呈近日节荡，并且与 Per1 一样对刺激产生立早反应。实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb211 mRNA 和节律基因 Per1 mRNA 及其蛋白产物均呈近日节律。 结论： PMA 是一种有效的体外节律诱导剂；经 PMA 诱导后，C6 细胞表现出近日节律特征，Gnb211 的 mRNA 存在着近日节律，并且是一种立早基因。在大鼠体内，Gnb2l1 基因及其编码的蛋白也存在着近日振荡。通过体内外实验，可以看出 Gnb2l1 存在

8、着广泛的近日节律性振荡，其相位总在节律基因 Per1 之前。由于 Gnb2l1 基因编码的蛋臼 RACK1 是一种重要的接头分子，参与了 PKC 信号通路，而 Per1 基因的启动子又可以被 PKC通路激活，因此 RACKl 蛋白很可能是 Per1 的上游调控分子，参与激活了 Per1基因的启动子。前期研究发现 Gnb2l1 基因编码的蛋白能够与近日节律系统的核心元件 PERIOD1蛋白相互作用。本文研究 Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内外的近日节律特征。包括二部分：1、体外研究：研究大鼠 C6 细胞中 Gnb2l1 基因是否存在节律性表达，并观察 Gnb2l1 是否与 Per1 一样对刺

9、激产生立早反应。2、体内研究：观察Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内是否存在节律性表达。 方法： 实验一：体外研究分别采用 PMA(Phorbol 12-Myristate 13-acetate，12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐)及马血清刺激体外培养的小鼠 NIH-3T3 细胞，RT-PCR 检测不同时间点 mPer1 mRNA 的表达水平，比较两者的诱导效率；PMA 刺激体外培养的大鼠C6 神经胶质瘤细胞，RT-PCR 检测不同时间点 rPerl，rDbp mRNA 的表达水平。在确定 C6 细胞具有近日节律特征后，RT-PCR检测不同时间点 rGnb2l1 mRNA的变化规律。 实验二：

10、体内研究 12D/12L 光暗循环下，采用半定量 RT-PCR的方法观察大鼠脑组织及肝脏组织的 Gnb2l1，Per1 mRNA 的变化规律；采用WesternBlot 方法检测大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb2l1 编码蛋白、PER1 蛋白在不同时间点的变化。 结果： 实验一：体外研究 PMA 及 50的马血清均能诱导 NIH-3T3 细胞 mPer1 的近日节律表达且诱导效率近似；C6 细胞的rPer1，rDbp 基因表达呈近日节律，同时 PMA 刺激的 C6 细胞的 rGnb2l1 的表达也呈近日节荡，并且与 Per1 一样对刺激产生立早反应。实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，

11、大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb211 mRNA 和节律基因 Per1 mRNA 及其蛋白产物均呈近日节律。 结论： PMA 是一种有效的体外节律诱导剂；经 PMA 诱导后，C6 细胞表现出近日节律特征，Gnb211 的 mRNA 存在着近日节律，并且是一种立早基因。在大鼠体内，Gnb2l1 基因及其编码的蛋白也存在着近日振荡。通过体内外实验，可以看出 Gnb2l1 存在着广泛的近日节律性振荡，其相位总在节律基因 Per1 之前。由于 Gnb2l1 基因编码的蛋臼 RACK1 是一种重要的接头分子，参与了 PKC 信号通路，而 Per1 基因的启动子又可以被 PKC通路激活，因此 RACKl 蛋

12、白很可能是 Per1 的上游调控分子，参与激活了 Per1基因的启动子。前期研究发现 Gnb2l1 基因编码的蛋白能够与近日节律系统的核心元件 PERIOD1蛋白相互作用。本文研究 Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内外的近日节律特征。包括二部分：1、体外研究：研究大鼠 C6 细胞中 Gnb2l1 基因是否存在节律性表达，并观察 Gnb2l1 是否与 Per1 一样对刺激产生立早反应。2、体内研究：观察Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内是否存在节律性表达。 方法： 实验一：体外研究分别采用 PMA(Phorbol 12-Myristate 13-acetate，12-十四酸佛波酯-13-乙酸

13、盐)及马血清刺激体外培养的小鼠 NIH-3T3 细胞，RT-PCR 检测不同时间点 mPer1 mRNA 的表达水平，比较两者的诱导效率；PMA 刺激体外培养的大鼠C6 神经胶质瘤细胞，RT-PCR 检测不同时间点 rPerl，rDbp mRNA 的表达水平。在确定 C6 细胞具有近日节律特征后，RT-PCR检测不同时间点 rGnb2l1 mRNA的变化规律。 实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，采用半定量 RT-PCR的方法观察大鼠脑组织及肝脏组织的 Gnb2l1，Per1 mRNA 的变化规律；采用WesternBlot 方法检测大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb2l1 编码蛋白、P

14、ER1 蛋白在不同时间点的变化。 结果： 实验一：体外研究 PMA 及 50的马血清均能诱导 NIH-3T3 细胞 mPer1 的近日节律表达且诱导效率近似；C6 细胞的rPer1，rDbp 基因表达呈近日节律，同时 PMA 刺激的 C6 细胞的 rGnb2l1 的表达也呈近日节荡，并且与 Per1 一样对刺激产生立早反应。实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb211 mRNA 和节律基因 Per1 mRNA 及其蛋白产物均呈近日节律。 结论： PMA 是一种有效的体外节律诱导剂；经 PMA 诱导后，C6 细胞表现出近日节律特征，Gnb211 的 mRNA

15、 存在着近日节律，并且是一种立早基因。在大鼠体内，Gnb2l1 基因及其编码的蛋白也存在着近日振荡。通过体内外实验，可以看出 Gnb2l1 存在着广泛的近日节律性振荡，其相位总在节律基因 Per1 之前。由于 Gnb2l1 基因编码的蛋臼 RACK1 是一种重要的接头分子，参与了 PKC 信号通路，而 Per1 基因的启动子又可以被 PKC通路激活，因此 RACKl 蛋白很可能是 Per1 的上游调控分子，参与激活了 Per1基因的启动子。前期研究发现 Gnb2l1 基因编码的蛋白能够与近日节律系统的核心元件 PERIOD1蛋白相互作用。本文研究 Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内外的近日节

16、律特征。包括二部分：1、体外研究：研究大鼠 C6 细胞中 Gnb2l1 基因是否存在节律性表达，并观察 Gnb2l1 是否与 Per1 一样对刺激产生立早反应。2、体内研究：观察Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内是否存在节律性表达。 方法： 实验一：体外研究分别采用 PMA(Phorbol 12-Myristate 13-acetate，12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐)及马血清刺激体外培养的小鼠 NIH-3T3 细胞，RT-PCR 检测不同时间点 mPer1 mRNA 的表达水平，比较两者的诱导效率；PMA 刺激体外培养的大鼠C6 神经胶质瘤细胞，RT-PCR 检测不同时间点 rPerl，

17、rDbp mRNA 的表达水平。在确定 C6 细胞具有近日节律特征后，RT-PCR检测不同时间点 rGnb2l1 mRNA的变化规律。 实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，采用半定量 RT-PCR的方法观察大鼠脑组织及肝脏组织的 Gnb2l1，Per1 mRNA 的变化规律；采用WesternBlot 方法检测大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb2l1 编码蛋白、PER1 蛋白在不同时间点的变化。 结果： 实验一：体外研究 PMA 及 50的马血清均能诱导 NIH-3T3 细胞 mPer1 的近日节律表达且诱导效率近似；C6 细胞的rPer1，rDbp 基因表达呈近日节律，同时 PMA 刺

18、激的 C6 细胞的 rGnb2l1 的表达也呈近日节荡，并且与 Per1 一样对刺激产生立早反应。实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb211 mRNA 和节律基因 Per1 mRNA 及其蛋白产物均呈近日节律。 结论： PMA 是一种有效的体外节律诱导剂；经 PMA 诱导后，C6 细胞表现出近日节律特征，Gnb211 的 mRNA 存在着近日节律，并且是一种立早基因。在大鼠体内，Gnb2l1 基因及其编码的蛋白也存在着近日振荡。通过体内外实验，可以看出 Gnb2l1 存在着广泛的近日节律性振荡，其相位总在节律基因 Per1 之前。由于 Gnb2l1 基因

19、编码的蛋臼 RACK1 是一种重要的接头分子，参与了 PKC 信号通路，而 Per1 基因的启动子又可以被 PKC通路激活，因此 RACKl 蛋白很可能是 Per1 的上游调控分子，参与激活了 Per1基因的启动子。前期研究发现 Gnb2l1 基因编码的蛋白能够与近日节律系统的核心元件 PERIOD1蛋白相互作用。本文研究 Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内外的近日节律特征。包括二部分：1、体外研究：研究大鼠 C6 细胞中 Gnb2l1 基因是否存在节律性表达，并观察 Gnb2l1 是否与 Per1 一样对刺激产生立早反应。2、体内研究：观察Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内是否存在节律性

20、表达。 方法： 实验一：体外研究分别采用 PMA(Phorbol 12-Myristate 13-acetate，12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐)及马血清刺激体外培养的小鼠 NIH-3T3 细胞，RT-PCR 检测不同时间点 mPer1 mRNA 的表达水平，比较两者的诱导效率；PMA 刺激体外培养的大鼠C6 神经胶质瘤细胞，RT-PCR 检测不同时间点 rPerl，rDbp mRNA 的表达水平。在确定 C6 细胞具有近日节律特征后，RT-PCR检测不同时间点 rGnb2l1 mRNA的变化规律。 实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，采用半定量 RT-PCR的方法观察大鼠脑组织及

21、肝脏组织的 Gnb2l1，Per1 mRNA 的变化规律；采用WesternBlot 方法检测大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb2l1 编码蛋白、PER1 蛋白在不同时间点的变化。 结果： 实验一：体外研究 PMA 及 50的马血清均能诱导 NIH-3T3 细胞 mPer1 的近日节律表达且诱导效率近似；C6 细胞的rPer1，rDbp 基因表达呈近日节律，同时 PMA 刺激的 C6 细胞的 rGnb2l1 的表达也呈近日节荡，并且与 Per1 一样对刺激产生立早反应。实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb211 mRNA 和节律基因 Per1 mRNA 及其

22、蛋白产物均呈近日节律。 结论： PMA 是一种有效的体外节律诱导剂；经 PMA 诱导后，C6 细胞表现出近日节律特征，Gnb211 的 mRNA 存在着近日节律，并且是一种立早基因。在大鼠体内，Gnb2l1 基因及其编码的蛋白也存在着近日振荡。通过体内外实验，可以看出 Gnb2l1 存在着广泛的近日节律性振荡，其相位总在节律基因 Per1 之前。由于 Gnb2l1 基因编码的蛋臼 RACK1 是一种重要的接头分子，参与了 PKC 信号通路，而 Per1 基因的启动子又可以被 PKC通路激活，因此 RACKl 蛋白很可能是 Per1 的上游调控分子，参与激活了 Per1基因的启动子。前期研究发现

23、 Gnb2l1 基因编码的蛋白能够与近日节律系统的核心元件 PERIOD1蛋白相互作用。本文研究 Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内外的近日节律特征。包括二部分：1、体外研究：研究大鼠 C6 细胞中 Gnb2l1 基因是否存在节律性表达，并观察 Gnb2l1 是否与 Per1 一样对刺激产生立早反应。2、体内研究：观察Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内是否存在节律性表达。 方法： 实验一：体外研究分别采用 PMA(Phorbol 12-Myristate 13-acetate，12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐)及马血清刺激体外培养的小鼠 NIH-3T3 细胞，RT-PCR 检测不同时间点

24、mPer1 mRNA 的表达水平，比较两者的诱导效率；PMA 刺激体外培养的大鼠C6 神经胶质瘤细胞，RT-PCR 检测不同时间点 rPerl，rDbp mRNA 的表达水平。在确定 C6 细胞具有近日节律特征后，RT-PCR检测不同时间点 rGnb2l1 mRNA的变化规律。 实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，采用半定量 RT-PCR的方法观察大鼠脑组织及肝脏组织的 Gnb2l1，Per1 mRNA 的变化规律；采用WesternBlot 方法检测大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb2l1 编码蛋白、PER1 蛋白在不同时间点的变化。 结果： 实验一：体外研究 PMA 及 50的马血清

25、均能诱导 NIH-3T3 细胞 mPer1 的近日节律表达且诱导效率近似；C6 细胞的rPer1，rDbp 基因表达呈近日节律，同时 PMA 刺激的 C6 细胞的 rGnb2l1 的表达也呈近日节荡，并且与 Per1 一样对刺激产生立早反应。实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb211 mRNA 和节律基因 Per1 mRNA 及其蛋白产物均呈近日节律。 结论： PMA 是一种有效的体外节律诱导剂；经 PMA 诱导后，C6 细胞表现出近日节律特征，Gnb211 的 mRNA 存在着近日节律，并且是一种立早基因。在大鼠体内，Gnb2l1 基因及其编码的蛋白也

26、存在着近日振荡。通过体内外实验，可以看出 Gnb2l1 存在着广泛的近日节律性振荡，其相位总在节律基因 Per1 之前。由于 Gnb2l1 基因编码的蛋臼 RACK1 是一种重要的接头分子，参与了 PKC 信号通路，而 Per1 基因的启动子又可以被 PKC通路激活，因此 RACKl 蛋白很可能是 Per1 的上游调控分子，参与激活了 Per1基因的启动子。前期研究发现 Gnb2l1 基因编码的蛋白能够与近日节律系统的核心元件 PERIOD1蛋白相互作用。本文研究 Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内外的近日节律特征。包括二部分：1、体外研究：研究大鼠 C6 细胞中 Gnb2l1 基因是否存在

27、节律性表达，并观察 Gnb2l1 是否与 Per1 一样对刺激产生立早反应。2、体内研究：观察Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内是否存在节律性表达。 方法： 实验一：体外研究分别采用 PMA(Phorbol 12-Myristate 13-acetate，12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐)及马血清刺激体外培养的小鼠 NIH-3T3 细胞，RT-PCR 检测不同时间点 mPer1 mRNA 的表达水平，比较两者的诱导效率；PMA 刺激体外培养的大鼠C6 神经胶质瘤细胞，RT-PCR 检测不同时间点 rPerl，rDbp mRNA 的表达水平。在确定 C6 细胞具有近日节律特征后，RT-PCR检

28、测不同时间点 rGnb2l1 mRNA的变化规律。 实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，采用半定量 RT-PCR的方法观察大鼠脑组织及肝脏组织的 Gnb2l1，Per1 mRNA 的变化规律；采用WesternBlot 方法检测大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb2l1 编码蛋白、PER1 蛋白在不同时间点的变化。 结果： 实验一：体外研究 PMA 及 50的马血清均能诱导 NIH-3T3 细胞 mPer1 的近日节律表达且诱导效率近似；C6 细胞的rPer1，rDbp 基因表达呈近日节律，同时 PMA 刺激的 C6 细胞的 rGnb2l1 的表达也呈近日节荡，并且与 Per1 一样对刺激

29、产生立早反应。实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb211 mRNA 和节律基因 Per1 mRNA 及其蛋白产物均呈近日节律。 结论： PMA 是一种有效的体外节律诱导剂；经 PMA 诱导后，C6 细胞表现出近日节律特征，Gnb211 的 mRNA 存在着近日节律，并且是一种立早基因。在大鼠体内，Gnb2l1 基因及其编码的蛋白也存在着近日振荡。通过体内外实验，可以看出 Gnb2l1 存在着广泛的近日节律性振荡，其相位总在节律基因 Per1 之前。由于 Gnb2l1 基因编码的蛋臼 RACK1 是一种重要的接头分子，参与了 PKC 信号通路，而 Per1

30、 基因的启动子又可以被 PKC通路激活，因此 RACKl 蛋白很可能是 Per1 的上游调控分子，参与激活了 Per1基因的启动子。前期研究发现 Gnb2l1 基因编码的蛋白能够与近日节律系统的核心元件 PERIOD1蛋白相互作用。本文研究 Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内外的近日节律特征。包括二部分：1、体外研究：研究大鼠 C6 细胞中 Gnb2l1 基因是否存在节律性表达，并观察 Gnb2l1 是否与 Per1 一样对刺激产生立早反应。2、体内研究：观察Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内是否存在节律性表达。 方法： 实验一：体外研究分别采用 PMA(Phorbol 12-Myrist

31、ate 13-acetate，12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐)及马血清刺激体外培养的小鼠 NIH-3T3 细胞，RT-PCR 检测不同时间点 mPer1 mRNA 的表达水平，比较两者的诱导效率；PMA 刺激体外培养的大鼠C6 神经胶质瘤细胞，RT-PCR 检测不同时间点 rPerl，rDbp mRNA 的表达水平。在确定 C6 细胞具有近日节律特征后，RT-PCR检测不同时间点 rGnb2l1 mRNA的变化规律。 实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，采用半定量 RT-PCR的方法观察大鼠脑组织及肝脏组织的 Gnb2l1，Per1 mRNA 的变化规律；采用WesternBlot

32、 方法检测大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb2l1 编码蛋白、PER1 蛋白在不同时间点的变化。 结果： 实验一：体外研究 PMA 及 50的马血清均能诱导 NIH-3T3 细胞 mPer1 的近日节律表达且诱导效率近似；C6 细胞的rPer1，rDbp 基因表达呈近日节律，同时 PMA 刺激的 C6 细胞的 rGnb2l1 的表达也呈近日节荡，并且与 Per1 一样对刺激产生立早反应。实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb211 mRNA 和节律基因 Per1 mRNA 及其蛋白产物均呈近日节律。 结论： PMA 是一种有效的体外节律诱导剂；经 PMA 诱导

33、后，C6 细胞表现出近日节律特征，Gnb211 的 mRNA 存在着近日节律，并且是一种立早基因。在大鼠体内，Gnb2l1 基因及其编码的蛋白也存在着近日振荡。通过体内外实验，可以看出 Gnb2l1 存在着广泛的近日节律性振荡，其相位总在节律基因 Per1 之前。由于 Gnb2l1 基因编码的蛋臼 RACK1 是一种重要的接头分子，参与了 PKC 信号通路，而 Per1 基因的启动子又可以被 PKC通路激活，因此 RACKl 蛋白很可能是 Per1 的上游调控分子，参与激活了 Per1基因的启动子。前期研究发现 Gnb2l1 基因编码的蛋白能够与近日节律系统的核心元件 PERIOD1蛋白相互作

34、用。本文研究 Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内外的近日节律特征。包括二部分：1、体外研究：研究大鼠 C6 细胞中 Gnb2l1 基因是否存在节律性表达，并观察 Gnb2l1 是否与 Per1 一样对刺激产生立早反应。2、体内研究：观察Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内是否存在节律性表达。 方法： 实验一：体外研究分别采用 PMA(Phorbol 12-Myristate 13-acetate，12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐)及马血清刺激体外培养的小鼠 NIH-3T3 细胞，RT-PCR 检测不同时间点 mPer1 mRNA 的表达水平，比较两者的诱导效率；PMA 刺激体外培养的大鼠C6

35、 神经胶质瘤细胞，RT-PCR 检测不同时间点 rPerl，rDbp mRNA 的表达水平。在确定 C6 细胞具有近日节律特征后，RT-PCR检测不同时间点 rGnb2l1 mRNA的变化规律。 实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，采用半定量 RT-PCR的方法观察大鼠脑组织及肝脏组织的 Gnb2l1，Per1 mRNA 的变化规律；采用WesternBlot 方法检测大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb2l1 编码蛋白、PER1 蛋白在不同时间点的变化。 结果： 实验一：体外研究 PMA 及 50的马血清均能诱导 NIH-3T3 细胞 mPer1 的近日节律表达且诱导效率近似；C6 细胞

36、的rPer1，rDbp 基因表达呈近日节律，同时 PMA 刺激的 C6 细胞的 rGnb2l1 的表达也呈近日节荡，并且与 Per1 一样对刺激产生立早反应。实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb211 mRNA 和节律基因 Per1 mRNA 及其蛋白产物均呈近日节律。 结论： PMA 是一种有效的体外节律诱导剂；经 PMA 诱导后，C6 细胞表现出近日节律特征，Gnb211 的 mRNA 存在着近日节律，并且是一种立早基因。在大鼠体内，Gnb2l1 基因及其编码的蛋白也存在着近日振荡。通过体内外实验，可以看出 Gnb2l1 存在着广泛的近日节律性振荡，

37、其相位总在节律基因 Per1 之前。由于 Gnb2l1 基因编码的蛋臼 RACK1 是一种重要的接头分子，参与了 PKC 信号通路，而 Per1 基因的启动子又可以被 PKC通路激活，因此 RACKl 蛋白很可能是 Per1 的上游调控分子，参与激活了 Per1基因的启动子。前期研究发现 Gnb2l1 基因编码的蛋白能够与近日节律系统的核心元件 PERIOD1蛋白相互作用。本文研究 Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内外的近日节律特征。包括二部分：1、体外研究：研究大鼠 C6 细胞中 Gnb2l1 基因是否存在节律性表达，并观察 Gnb2l1 是否与 Per1 一样对刺激产生立早反应。2、体内

38、研究：观察Gnb2l1 基因及其蛋白在大鼠体内是否存在节律性表达。 方法： 实验一：体外研究分别采用 PMA(Phorbol 12-Myristate 13-acetate，12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐)及马血清刺激体外培养的小鼠 NIH-3T3 细胞，RT-PCR 检测不同时间点 mPer1 mRNA 的表达水平，比较两者的诱导效率；PMA 刺激体外培养的大鼠C6 神经胶质瘤细胞，RT-PCR 检测不同时间点 rPerl，rDbp mRNA 的表达水平。在确定 C6 细胞具有近日节律特征后，RT-PCR检测不同时间点 rGnb2l1 mRNA的变化规律。 实验二：体内研究 12D/12L

39、 光暗循环下，采用半定量 RT-PCR的方法观察大鼠脑组织及肝脏组织的 Gnb2l1，Per1 mRNA 的变化规律；采用WesternBlot 方法检测大鼠脑组织及肝脏组织中 Gnb2l1 编码蛋白、PER1 蛋白在不同时间点的变化。 结果： 实验一：体外研究 PMA 及 50的马血清均能诱导 NIH-3T3 细胞 mPer1 的近日节律表达且诱导效率近似；C6 细胞的rPer1，rDbp 基因表达呈近日节律，同时 PMA 刺激的 C6 细胞的 rGnb2l1 的表达也呈近日节荡，并且与 Per1 一样对刺激产生立早反应。实验二：体内研究 12D/12L 光暗循环下，大鼠脑组织及肝脏组织中

40、Gnb211 mRNA 和节律基因 Per1 mRNA 及其蛋白产物均呈近日节律。 结论： PMA 是一种有效的体外节律诱导剂；经 PMA 诱导后，C6 细胞表现出近日节律特征，Gnb211 的 mRNA 存在着近日节律，并且是一种立早基因。在大鼠体内，Gnb2l1 基因及其编码的蛋白也存在着近日振荡。通过体内外实验，可以看出 Gnb2l1 存在着广泛的近日节律性振荡，其相位总在节律基因 Per1 之前。由于 Gnb2l1 基因编码的蛋臼 RACK1 是一种重要的接头分子，参与了 PKC 信号通路，而 Per1 基因的启动子又可以被 PKC通路激活，因此 RACKl 蛋白很可能是 Per1 的

41、上游调控分子，参与激活了 Per1基因的启动子。特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258 ，提供原格式文档。我们还可提供代笔服务，价格优惠，服务周到，包您通过。“垐垯櫃 换烫梯葺铑?endstreamendobj2x 滌甸?*U 躆 跦?l, 墀 VGi?o 嫅#4K 錶 c#x 刔 彟 2Z 皙笜?D 剧珞 H 鏋 Kx 時 k,褝仆? 稀?i 攸闥-) 荮vJ 釔絓|?殢 D 蘰厣?籶(柶胊?07 姻Rl 遜 ee 醳 B?苒?甊袝 t 弟l

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