1、生物制药实验,任课教师：纠敏单位：食品与生物工程学院 生物工程系4-317,Email：手机：13849920176,实验一 胰岛素的制备,内 容,实验目的 实验所用试剂 实验仪器 工艺路线 实验步骤 作业,一、实验目的,本实验的目的是熟悉并掌握以猪胰脏为原料制备胰岛素的工艺过程。,二、实验所用试剂,5草酸溶液； 87乙醇溶液； 冷丙酮；氨水； 20、6.5的醋酸锌溶液2、10的柠檬酸溶液； 硫酸； NaCl,三、实验仪器,离心机、旋转蒸发仪、电子天平、组织捣碎机、pH计、烧杯、锥形瓶、玻棒、量筒等。,四、工艺路线,五、实验步骤,提取：猪胰脏绞碎，再加2.3-2.6倍的86%-88%乙醇和5%
2、的草酸，提取3小时。碱化：提取液用氨水调pH至8.0-8.4。酸化：在5下，将碱化液用硫酸调pH至3.6-3.8。浓缩：将上述提取液过滤取上清液，在30减压浓缩至比重为1.04-1.06为止。去脂：将浓缩液快速加热再快速降温，过滤得去脂液。,五、实验步骤,盐析：向去脂溶液中加入氯化钠调pH至2-2.5，过滤得盐析物。除酸性蛋白：盐析物中加入7倍量的蒸馏水溶解，再加3倍量冷丙酮，用氨水调pH4.2-4.3，补加丙酮，使水和丙酮的比例为7：3，搅拌后过夜，离心去除酸性蛋白沉淀。锌沉淀：滤液用氨水调pH6.2-6.4，加入3.6%醋酸锌溶液（20%浓度），再用氨水调pH6.0，4放置过夜，收集沉淀，
3、冷丙酮洗涤、干燥。,五、实验步骤,除碱性蛋白、结晶：按干品重量计每克加冰冷的2%柠檬酸溶液50毫升、6.5%的醋酸锌溶液2毫升、丙酮16毫升，用冷水稀释至100毫升，使充分溶解，冷至5以下，用氨水调pH8.0，过滤，滤液用10%柠檬酸溶液调pH6.0，补加丙酮，使溶液含丙酮达16%，慢速搅拌3到5小时，使结晶析出，再转入5左右放置3到4天，使结晶完全，收集结晶。洗涤、干燥：用水洗涤结晶，再用丙酮、乙醚将结晶脱水，真空干燥后得到成品。,六、作业,实验过程中有哪些关键步骤需要小心操作？观测所得产品的质与量（收率）。,实验二 甲壳质的制备,内 容,实验目的 实验所用试剂 实验仪器 工艺路线 实验步骤
4、 作业,一、实验目的,甲壳质（Chitin），又称甲壳素、几丁质、壳多糖等。其在自然界中分布极广，以甲壳类、昆虫类含量较高。近年来，甲壳质的应用越来越广泛，大量用于工业、农业、医学、环保、生物工程等领域。其在医疗上的主要用途：可作为缓释药物的载体、人工透析膜、止血剂、手术缝合线等。其衍生物具有促进伤口愈合、抗血栓等功能。目前，用于制备甲壳质的原料多为虾、蟹壳，另外还有一些真菌（黑曲霉、猴头菇、平菇），新疆的卤虫卵壳；更经济的来源可能是利用霉菌发酵的残留物。本实验的目的是熟悉并掌握以蟹壳为原料制备甲壳质的工艺方法。,二、实验所用试剂,5HCl的盐酸溶液 3NaOH溶液 0.5 KMnO4溶液 1
5、 HNO3溶液,三、实验仪器,粉碎机、电炉、水浴锅、恒温箱、1000ml烧杯（耐酸、耐碱、耐腐蚀的器皿）、玻棒、500ml量筒、天平。,四、工艺路线,五、实验步骤,材料的准备 将蟹壳洗净、烘干，并研磨至d 2 mm的粉末状浸泡，除钙质 称取干净的蟹壳25g，放置于1000ml的烧杯中，将375ml的5%的盐酸溶液缓缓地加入到烧杯中，并不断地搅拌，后室温（20）浸泡24 h，以充分除去蟹壳中的钙质。后去上清，水洗沉淀3次至中性；,五、实验步骤,去蛋白 加3的NaOH溶液375ml于上述沉淀中，煮沸46 h或室温放置10 h，并不断搅拌，以除去蛋白质。后去上清，并水洗沉淀3次，以除去残留的碱及蛋白
6、质； 氧化脱色 用0.5的KMnO4溶液10ml，搅拌浸泡沉淀1 h，再用1的HNO3溶液10 ml于6070水浴3040 min至脱色；去上清，得白色产品，水洗，干燥即可。,六、作业,实验过程中的注意事项有哪些？观测所得产品的质（色泽）与量（收率）。,实验三 人血浆白蛋白制剂的制备,内 容,实验目的 实验所用试剂 实验仪器 工艺路线 实验步骤 作业,一、实验目的,白蛋白（albumin）又称为清蛋白，约占血浆总蛋白的65%。其主要功能为：结合并传输脂肪酸、各种色素、阳离子、维生素C、各种药物（如抗生素、磺胺类等）。另外还是维持血浆胶体渗透压的主要物质。血浆白蛋白在临床上用于失血性休克以及脑水
7、肿或大脑损伤所致的脑颅压增高，严重烧伤，低蛋白血症等的治疗。本实验的目的是了解并掌握以人血浆为原料制备人血浆白蛋白的工艺流程及方法。,二、实验所用试剂,人血浆； NaHCO3溶液； 2%的利凡诺溶液； 0.5M HCl溶液； NaCl溶液； 灭菌水； pH试纸,三、实验仪器,冷冻干燥机、水浴锅、锥形瓶、玻棒、量筒、电子天平，离心机。,四、工艺路线,五、实验步骤,络合（利凡诺沉淀）：量取人血浆20ml，在搅拌下加入NaHCO3调节pH至8.6，加入等体积的2%的利凡诺溶液，充分搅拌后静置2-4小时，分离上清液与络和物沉淀。解离：向络和物沉淀中加入无菌水，用0.5M HCl溶液调节pH至弱酸性，加氯化钠至0.15%-0.2%，搅拌下进行解离。 加热去杂蛋白：充分解离后，65恒温1小时，离心分离出上清液。,五、实验步骤,热处理：60，10小时，灭活病毒。除菌、干燥：将热的处理液除菌过滤，收集滤液，即白蛋白溶液，将溶液进行冷冻干燥得到白色疏松物质。 检验方法：外观为白色疏松物质，白蛋白含量达95%以上，水分小于1%，水溶后pH为6.6-7.2，硫酸铵残量小于0.01%，细菌学和热源检测合格。,六、作业,在制备血浆白蛋白制剂的过程中，为什么要用利凡诺来沉淀蛋白而不用(NH4)2SO4来沉淀？观测所得产品的质（色泽）与量（收率）。,
