1、1利用指纹图谱技术监控参仙升脉口服液的生产过程 摘要：通过建立参仙升脉口服液生产过程中各个中间体的指纹图谱，并加以对比，找出工艺中的敏感步骤，从而在生产中对敏感步骤加以严格控制，使得各批产品质量稳定，疗效可靠。关键词：参仙升脉口服液 指纹图谱 质量控制参仙升脉口服液由红参，淫羊藿、补骨脂（盐炙） 、枸杞子、麻黄、细辛、丹参、水蛭八味中药组成，具有温补心肾、活血化瘀的功效。目前我公司对参仙升脉口服液的质量控制主要以其中的人参皂苷 Rg1 为其指标成分，实践表明，单个或几个指标成分难以反映产品的全面质量。本文试图采用 HPLC 指纹图谱技术对口服液进行全面的质量控制，取得了较好的效果。1 仪器和试
2、剂LC-10AT 岛津高效液相色谱仪，SPD-10AVP 紫外检测器。色谱柱：Kromasil100-C18 254.9。乙腈（色谱纯） ，磷酸（分析纯） ，甲醇（色谱纯）乙醇（分析纯） 。2.方法2.1 参仙升脉口服液的来源与处理参仙升脉口服液中间体 1（091001 批） ，500ml，未用活性碳处理，未灭菌（口服液车间提供）参仙升脉口服液中间体 2（091001 批） ，500ml， 活性炭处理 2，未灭菌（口服液车间提供）参仙升脉口服液中间体 3（091001 批） ，500ml ， 活性炭处理，已灭菌 （口服液车间提供）2.2 由于参仙升脉口服液组方复杂，成分较多，色谱峰交相重叠，特
3、选择以下不同的流动相以及不同的检测波长，以筛选出较好的指纹图谱。2.2.1 本试验采用乙腈水（20：80） 、甲醇水（20：80） 、乙腈0.3%磷酸溶液三种流动相进高校液相，以选出一种较好的流动相。表 1 不同流动相的分离度比较流动相 分离效果乙腈水（20：80） 各峰分离效果不好，分离度低甲醇水（20：80） 各峰分离效果不好，分离度比较低乙腈0.3%磷酸溶液 各峰分离效果较好，分离度较高试验结果表明 采用乙腈0.3%磷酸溶液流动相分离较好，梯度洗脱程序如下A 相（0.3%磷酸溶液） B 相（乙腈）0 min 90% 10%16min 80% 20%35min 55% 45%60min 2
4、5% 75%32.2.2 本试验检测波长分别采用 203nm、230nm、250nm 、270nm，以找出一个最优的检测波长。波长（ nm） 吸收度203 吸收度低，峰面积小230 吸收度低，峰面积小250 吸收度较低，峰面积较小270 吸收度较好，峰面积较大试验结果表明，检测波长设为 270nm，吸收度较好，峰面积较大。本试验采用 270nm 作为检测波长。指纹图谱如图 1。时 间 (min) 4241403938373635343332313029282726252423222120191817161514131211109876电压(mv)706560555045403530252015
5、1050图 1 参仙升脉口服液成品指纹图谱3 测定方法：将供试品用滤纸过滤，精密量取续虑液 2ml，通过 D101 型大孔吸附树脂柱（内径约 0.8cm，长 15cm，柱上端加中性氧化铝0.5g，用水 50ml 预洗）以水 50ml 洗脱，弃去水液，再用 10%乙醇洗脱，弃去洗脱液，续用 70%乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用 20%乙腈溶解，转移至 10ml 量瓶内，定容至刻度。用40.45ul 微孔滤膜过滤后进样，进样量 5ul。4 测得各中间体图谱如下：时 间 (min) 424140393837363534333231302928272625242322212019181716151
6、4131211109876电压(mv)7065605550454035302520151050-A- 图 2 -B- -C-时 间 (min) 4241403938373635343332313029282726252423222120191817161514131211109876电压(mv)10095908580757065605550454035302520151050-A- 图 3 -B- -C-时 间 (min) 4241403938373635343332313029282726252423222120191817161514131211109876电压(mv)1009590858
7、0757065605550454035302520151050-A- 图 4 -B- -C-图 2（参仙升脉口服液中间体 1）未用活性碳处理，未灭菌图 3（参仙升脉口服液中间体 2）活性碳处理，未灭菌图 4（参仙升脉口服液中间体 3）活性碳处理，灭菌5 结果：将上述指纹图谱分为三个特征区（A、B、C）对比发现，图2，图 3 的 A 区 B 区峰面积比发生了变化，图 3 图 4 图形变化不明显（图 4 分离度稍差） 。由此可知，用活性炭脱色吸附的过程对各成分有明显的影响，此过程属于敏感步骤 ，实际生产中应对活性碳的用量，吸附的作用时间加以严格的控制。而灭菌的过程则不属于敏感的步骤。但是，灭菌到底在多大时间长度，多大温度幅度上对各成分无影响尚不可知。56 讨论6.1 为了保证各批产品质量的一致性，除了对生产过程中的敏感步骤加以严格的控制，还要保证所用药材来源相同，即同一产地，同一采收季节，同一炮制方法。6.2 采用 HPLC 指纹图谱技术监控参仙升脉口服液的生产过程，能全面，直观地反映产品中各主要化学成分的变化。根据这种变化，有针对地对生产工艺中敏感的步骤进行严格的控制，可使生产更加科学、合理，为产品的质量的一致性提供了保证，增加了产品的科技含量。参考文献1 刘建娣，梁琼麟，罗国安等. 刺五加注射液指纹图谱的建立及其在质量控制中的应用J. 中成药，2006，28（1）：3-4.
