1、1课时检测(三十九) 微生物的培养和利用一、选择题1下列有关微生物培养与应用的说法，正确的是( )A天然培养基是指直接取自自然界不需加工的培养基B接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理C大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段D分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源解析：选 C 天然培养基是指用天然物质制成的培养基，但也需要加工；实验操作者的双手应消毒，不能灭菌；分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源，不是碳源，需加入不含氮元素的有机物(如葡萄糖)作为碳源。2平板划线法和稀释涂布平板法是接种微生物的两种常用方法，下列叙述
2、正确的是( )A都要将菌液进行一系列的梯度稀释B平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环连续划在固体培养基表面C稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基中进行培养D都会在培养基表面形成单个的菌落解析：选 D 平板划线法不需要进行梯度稀释，稀释涂布平板法需要将不同稀释度的菌液涂布到固体培养基的表面。平板划线法和稀释涂布平板法都能在培养基表面形成单个的菌落。3某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是( )A利用平板划线法对细菌进行计数B用以石油为唯一碳源的培养基筛选C采用稀释涂布平板法分离菌种D称取和稀释土壤样品时应在火焰旁解析：选 A 分离
3、细菌常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，但平板划线法不能对细菌进行计数；筛选能分解石油的细菌，要以石油作为培养基中唯一的碳源；筛选细菌的整个操作过程都需要在无菌条件下进行，所以应在火焰旁进行。4下列关于大肠杆菌的培养叙述错误的是( )A在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑 pH、温度和渗透压等条件B在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行消毒C若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的稀释度合适D使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃2解析：选 B 培养过程中，除营养
4、条件要满足需要外，还要考虑 pH、温度和渗透压等条件是否适宜；灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，所以，应对培养基和培养皿进行灭菌而不是消毒；使用稀释涂布平板法时要保证样品稀释比例合适，这样才会有更科学的数据；有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，并可能导致肠管出现严重症状，所以使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。5在涂布有大肠杆菌的培养基上进行抑菌实验，在 a、b、c 处分别贴浸有不同抗生素(浓度相同)的无菌滤纸片，d 处滤纸片浸有无菌水。培养后的结果如图所示。以下判断错误的是( )Aa 处抑菌效果小于 b 处Bb 处的滤纸片没有沥干Cc 处抗生
5、素无效Dd 为对照解析：选 A 培养皿中不同滤纸片四周透明圈的大小不同，透明圈越大，说明浸有的抗生素抑菌效果越好。a 处的透明圈并不小于 b 处；b 处不是圆形的透明圈，可能是滤纸片没有沥干，抗生素流出滤纸片；c 处无透明圈，说明 c 处抗生素对大肠杆菌无效；d 为空白对照。二、非选择题6(2014江苏高考节选)为了获得 胡萝卜素产品，某小组开展了产 胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题：(1)实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是_；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该_。(2)为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，其目的是_。(3)下图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙指
6、示的依次是_。 (填序号)安全阀、放气阀、压力表放气阀、安全阀、压力表安全阀、放气阀、温度表3放气阀、安全阀、温度表(4)为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在 3 块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是_。解析：(1)实验室常用的灭菌方法是干热灭菌和湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)，在实验前应用牛皮纸或干净的报纸包扎器皿。(2)酵母菌是真菌，对青霉素具有抵抗能力，青霉素主要抑制细菌、放线菌的生长。(3)图中甲为安全阀，乙为放气阀，丙为压力表。(4)接种的平板上未见菌落生长，说明接种不成功，原因可能是接种环灼烧后未冷却，使菌株因温度过高而被杀死。答案：(1)干热灭菌和湿
7、热灭菌(高压蒸汽灭菌) 用牛皮纸(报纸)包扎器皿 (2)抑制细菌(放线菌)生长 (3) (4)接种环温度过高，菌被杀死7如图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：(1)图甲是利用_法进行微生物接种，图乙是利用_法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是_和_；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是_和酒精消毒。(2)接种操作为什么一定要在酒精灯火焰附近进行？_。(3)接种后，在固体培养基上培养细菌时为什么进行倒置培养？_。(4)如图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是_(填“图甲”或“图乙”)。解析：图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法，这两种方法所
8、用的接种工具分别是接种环和涂布器。由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。在微生物培养过程中会产生水，对微生物的生长造成影响，故需要倒置培养。答案：(1)平板划线 稀释涂布平板 接种环 涂布器 灼烧灭菌 (2)火焰附近存在着无菌区域 (3)避免培养过程产生的水分影响微生物的生长 (4)图乙8(2018江西赣中南五校联考)如表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方，请根据表格和所学知识回答下列相关问题：4成分 蛋白胨 乳糖 蔗糖 K2HPO4 指示剂 琼脂含量(g) 10.0 5.0 5.0 2.0 0.2 12.0将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到 1 000 mL
9、(1)从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于_。(2)若根据用途划分，该培养基属于_(填“选择”或“鉴别”)培养基。若要用上述培养基来筛选出土壤中的尿素分解菌，培养基的营养成分必需怎样更改？_，并用_作为指示剂。(3)在微生物培养的过程中，为防止杂菌污染，需要对培养基和培养皿进行_；操作者的双手需要进行清洗和_。(4)图 1 和图 2 是培养某细菌的结果图，其对应的接种方法分别是：_和_，这两种方法接种后培养基上都可以得到由单个细胞繁殖所形成的_。图 1 所用的接种方法可用来对活菌进行计数。此外，测定微生物数目的另一种方法是_。(5)以下过程中所利用的主要微生物的细胞结构与大肠杆菌较相似的有_。A
10、制作果酒 B由果酒制作果醋C制作泡菜 D制作腐乳解析：(1)大肠杆菌只能从环境中摄取有机物，不能自己合成有机物，属于分解者。(2)该培养基中含有指示剂，属于鉴别培养基。尿素分解菌可以分解尿素，而其他微生物不能，因此可将培养基中的蛋白胨改为尿素，用于筛选土壤中的尿素分解菌，并用酚红作为指示剂。(3)培养微生物时，培养基和培养皿需要灭菌，操作者双手需要进行消毒。(4)图 1 采用的是稀释涂布平板法，图 2 采用的是平板划线法。单个微生物细胞繁殖所形成的细胞群叫菌落。(5)A、B、C、D 中所利用的主要微生物是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌、毛霉，醋酸菌、大肠杆菌和乳酸菌都是原核细胞，结构相似。答案：(1)
11、分解者 (2)鉴别 将蛋白胨改成尿素 酚红 (3)灭菌 消毒 (4)稀释涂布平板法 平板划线法 菌落 显微镜直接计数法 (5)BC9临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：5(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用_法或_法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释，用_法接种于固体培养基表面，在 37 培养箱中培养 24 h，使其均匀生长，布满平板。(3)为了检测该致病菌对抗生素的敏感性，将分别含有 A、B、C、D 四种抗生素的滤纸片均
12、匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含 A 的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素 A_；含 B 的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素 B_；含 C 的滤纸片周围的透明圈比含 A 的小，说明_；含 D 的滤纸片周围的透明圈也比含A 的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D 的_。(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素_。解析：(1)实验室中对微生物纯化培养时，常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。(2)若让已经获得的单个菌落在固体培养基上大量且均匀繁殖，常用稀释涂布平板法。(3)对某种抗生素越敏感的致病菌，在
13、该抗生素存在的范围内，越不易生存，形成的透明圈就越大。如果在透明圈中还有菌落生存，则说明这个菌落的细菌耐药性很强。(4)通过(3)可知，在应用时，要想杀死某致病菌，就得选择能使该致病菌大量死亡，即产生的透明圈大的那种抗生素。答案：(1)平板划线 稀释涂布平板 (2)稀释涂布平板 (3)敏感 不敏感 该致病菌对 C 的敏感性比对 A 的弱 耐药菌 (4)A10某市卫生计生委发布的卫生监测信息显示一些美容美发场所的毛巾、理发(美容)用具大肠杆菌严重超标。如图甲为大肠杆菌含量检测操作简图，图乙为伊红美蓝培养基配方。回答下列相关问题：(1)图甲中滤膜的孔径应_(填“大于”或“小于”)大肠杆菌。受此启发
14、，对某些不耐高温的试剂可以怎样除菌？_。(2)配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐以外，还应加入_(一种营养成分)，以及_。待各成分都溶化后和分装前，要进行的是_和灭菌，对培养基进行灭菌的常用器具是_。倒平板时要待平板冷凝后，将平板6倒置，其主要目的是_。伊红美蓝培养基上生长的大肠杆菌菌落呈现深紫色，从功能上划分，该培养基属于_培养基。(3)用平板划线法分离样液中的大肠杆菌，操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线的目的是_。要检测样液中的大肠杆菌含量，取 25 cm2毛巾样本，加 5 mL 蒸馏水，浸润半小时，然后在 3 个平板上用涂布法分别接入 0
15、.1 mL 样液；在 37 的培养箱中放置 48 小时，3 个平板上的黑色菌落数分别为 49、48 和 47。据此可得出 25 cm2毛巾样液中的活菌数为_。解析：(1)图甲中滤膜的孔径应小于大肠杆菌，滤膜过滤才能获得大肠杆菌，对不耐高温的试剂除菌时无法用高压蒸汽灭菌法，可以用滤膜过滤达到除菌目的。(2)配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐以外，还应加入氮源以及琼脂。配制的培养基在溶化后和分装前需要先调整 pH 和灭菌，高压蒸汽灭菌法常用高压蒸汽灭菌锅对培养基等进行灭菌。倒平板后将平板倒置的主要原因是防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染。从功能上划分，伊红美蓝培养基属于鉴别培养基。(
16、3)接种环灼烧灭菌后，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌的菌落呈深紫色，据题意可知，25 cm2毛巾样本中的活菌数为(494847)30.152.410 3。答案：(1)小于 用滤膜过滤除菌 (2)氮源 琼脂 调整 pH 高压蒸汽灭菌锅 防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染 鉴别 (3)将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 2.410 311(2018惠州模拟)日前微博传言手机细菌比马桶多。如图，央视和北京卫视通过实验展示调查结果。回答下列相关问题：(1)该实验需制备培养基，培养基一般都含有水、碳源、_
17、等。(2)据图，两电视台均采用_法接种，该方法需要_(多选)。A接种环 B酒精灯 C移液管 D涂布器 E无菌水7(3)通过观察菌落的_，可知手机屏幕和马桶按钮都存在多种微生物。两电视台实验操作均正确且完全一致，但报道结果截然不同，你认为原因是：_。(4)按图操作取样面积，实验员测定某手机屏幕的细菌数量，将 10 mL 菌悬液进行梯度稀释，分别取 0.1 mL 稀释倍数为 102的样品液接种到三个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为 48、50、52，则该手机屏幕的细菌数为_个/平方厘米。该实验对照组该如何设置？_。解析：(1)微生物培养基的成分一般包括水、碳源、氮源和无机盐。(2)据图分析可知，该实验的接种方法为稀释涂布平板法，该方法用到的工具有酒精灯、移液管、涂布器、无菌水等。(3)不同的菌落形态、大小不同，图示两个电视台调查的手机屏幕和马桶按钮都有多种形态的菌落，即存在多种微生物。两电视台实验操作均正确且完全一致，但报道结果截然不同，可能是因为手机的取样和马桶的取样都不相同。(4)根据提供的数据进行计算，某手机屏幕的细菌数(485052)310 20.110(55)210 4(个/平方厘米)。答案：(1)氮源和无机盐 (2)稀释涂布平板 BCDE(3)形态、大小 手机的取样和马桶的取样都不相同 (4)2104 取培养基涂布 0.1 mL 无菌水进行培养
