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提取番茄果胶甲酯酶.doc

上传人:jmydc 文档编号:12250011 上传时间:2021-12-06 格式:DOC 页数:1 大小:17KB
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提取番茄果胶甲酯酶.doc_第1页
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1) 提取缓冲液(pH 8.0)先用 800 mL 蒸馏水溶解 24.23 g Tris 和 58.44 g NaCl,用 HCl 调 pH 值至 8.0,再用蒸馏水定容至 1 L;4保存。2) 20 mmol/L Tris-HCl(pH 7.0)先用 900 mL 蒸馏水溶解 2.4228 g Tris,用 HCl 调 pH 值至 7.0,再用蒸馏水定容至 1 L;4保存。番茄果胶甲脂酶粗提液的制备a)称取 1 kg 成熟番茄,用果汁机均质(不加水)b)在 4、10000g 条件下,离心 30 min 收集番茄组织沉淀并称取沉淀的质量 (P1)c)将沉淀 P1 与提取缓冲液混合(1:2 w/v),在 4用磁力搅拌器搅拌 2 h d)在 4、10000g 条件下,离心 60 min 收集盐提取液,称取上清 S2e)上清液 S2 用 30%的硫酸铵沉淀,于 4搅拌 30 min。f)在 4、18000g 条件下,离心 15 min 收集上清(S3) g)上清 S3 用 80%的硫酸铵沉淀,于 4 搅拌 30 minh)在 4、18000g 条件下,离心 15min 收集沉淀i)将沉淀溶解于 20 mM Tris-HCl (pH 7.0) (5 mL/ 100g 番茄组织)j)用 20 mM Tris-HCl (pH 7.0)于 4透析。

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