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提取番茄果胶甲酯酶.doc

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提取番茄果胶甲酯酶.doc

1) 提取缓冲液（pH 8.0）先用 800 mL 蒸馏水溶解 24.23 g Tris 和 58.44 g NaCl，用 HCl 调 pH 值至 8.0，再用蒸馏水定容至 1 L；4保存。2) 20 mmol/L Tris-HCl（pH 7.0）先用 900 mL 蒸馏水溶解 2.4228 g Tris，用 HCl 调 pH 值至 7.0，再用蒸馏水定容至 1 L；4保存。番茄果胶甲脂酶粗提液的制备a）称取 1 kg 成熟番茄，用果汁机均质（不加水）b）在 4、10000g 条件下，离心 30 min 收集番茄组织沉淀并称取沉淀的质量 (P1)c）将沉淀 P1 与提取缓冲液混合(1:2 w/v)，在 4用磁力搅拌器搅拌 2 h d）在 4、10000g 条件下，离心 60 min 收集盐提取液，称取上清 S2e）上清液 S2 用 30%的硫酸铵沉淀，于 4搅拌 30 min。f）在 4、18000g 条件下，离心 15 min 收集上清(S3) g）上清 S3 用 80%的硫酸铵沉淀，于 4 搅拌 30 minh）在 4、18000g 条件下，离心 15min 收集沉淀i）将沉淀溶解于 20 mM Tris-HCl (pH 7.0) (5 mL/ 100g 番茄组织)j）用 20 mM Tris-HCl (pH 7.0)于 4透析。