1、长链非编码RNAf肝癌的研究进展The new trends of researches on Long noncoding RNAs andhepatocellular carcinoma熊淑晨 1 王玉兰 2摘要：肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC) 的治疗在世界范围内都是一个巨大的难题。HCC勺发病率居全球第五位,致死率居第三位。我国是全球肝细胞肝癌发病率最高地区之一，每年新增的肝细胞癌病例占全世界 的 55%左右。据国际癌症总局(IARC) 2011 年全球肿瘤统计分析表明全球每年约有 69 万余人死于肝癌，其中一半以上发生在我国。长链非编码RNA(lo
2、ng non-coding RNA , IncRNA)是一类转录本长度大于 200nt (核甘酸) 而且不编码蛋白的RNA近年来的一些研究发现IncRNA可在各个环节调控基 因的表达，存在于各种生理和病理过程，在肿瘤的发生发展及预后过程中起 重要作用。 基于以上， 本文综合了现有的肝细胞癌与lncRNA 相关的研究进展，希望对肝细胞癌的致病机制和靶向治疗提供线索。Abstract:The cure of hepatocellular carcinoma(HCC) is still a wordwide difficulty. The incidence of HCCis currently t
3、he fifth highest in solid tumor and is the third leading cause of cancer death worldwide.China has the highest rate of HCC in this days,and there are about 55% new cases of HCCeach year come from China.The international Agency of Research on Cancer(IARC) said that almost 690 thousand people death of
4、 HCC, and more than half of them are Chinese.Long noncoding RNAs(LncRNAs)-defined as non-coding RNAmolecules greater than 200nucleotides in length-lack the ability of encoding protein.LncRNAs also regulate gene expression processes in multiple approaches, exists in various physiological and patholog
5、ical process,and play vital roles in the occurrence and development of tumors.This review focuses on the regulation and functional role of LncRNAs in HCC.关键词：肝细胞癌长链非编码RNA( lncRNA)肝细胞癌是最常见的恶性肿瘤之一，属于高侵袭、高致死性肿瘤，易复 发和转移，预后很差。肝细胞癌的产生过程复杂，涉及多基因、多通路。以 往对肝细胞癌的研究主要有以下几个方面：引起肝细胞癌的高危因素：病 毒、酒精、生物毒素(如黄曲霉菌)1;流行病学
6、：乙型肝炎病毒、丙型 肝炎病毒感染2;表观遗传学：miR-221、miR-222等microRNA的异常表达 3 ； 分子遗传学： 1 号染色体结构异常等4 ； 基因分子生物学： p53、 DPC4、N-ras异常等5-7;信号通路异常8o随着人们对基因的不断了解，长链非 编码RNAft疾病发生发展的作用越来越受到重视，越来越多的lncRNA被发现与HCC勺产生机制有关。肝癌的一般采用外科手术切除来治疗，但是对于那 些失去手术机会的患者来说，治愈疾病是个难题。肝癌中特异性表达的lncRNA就为这些患者提供了新的治疗希望。一、IncRNA概述随着基因测序的完成，人们发现仅有1%-2%的基因具有编
7、码蛋白质的功能。大部分为非编码调控序列，转录成为非编码 RNA(non-coding RNA ncRNA)其中 80%-90吹有转录活性的非蛋白编码基因为IncRNA。卞g据IncRNAf蛋白编码基因 的相对位置可以将其分为四类：外显子IncRNA (exonic IncRNA):在外显子区 至少有一个碱基与蛋白编码的外显子是相同的；内含子lncRNA(introniclncRNA) ：从蛋白编码基因的内含子转录出来(正义或反义)，重叠 lncRNA( overlapping lncRNA) : 部分序列与包含内含子的蛋白编码基因重叠(正义或反义)；基因间IncRNA (intergenic
8、IncRNA ):不与任何编码蛋白的编码位点相 交。相对于编码RNA,lncRN舫列的总的保守性差，但其内部含有高度保守的区域， 这些区域对IncRNAB功能起到重要作用。最近研究发现lncRNA在表观遗传学水 平(包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重构)、转录及转录后水平调节基因的 表达，从而参与各种基本生命活动和疾病的发生发展过程9-10 。某些具有生物学功能的lncRNA通过染色质剂量补偿效应、基因组印迹、染 色体沉默、染色质修饰、转录调控、核浆运输等重要生物过程11-15 ，参与细胞增殖、细胞周期、凋亡和分化等过程，进而影响肿瘤的发生和发展。其调控作用机 制可能有16 ： 在编码蛋白
9、基因的上游启动子区转录， 干扰邻近蛋白编码基因的表达；抑制RNA聚合酶H,或介导染色质重构和组蛋白修饰影响基因表达； 与编码蛋白基因的转录本形成互补双链，干扰 RNA的剪接，或在Dicer酶作用 下产生内源性siRNA,调控基因的表达；结合在特定蛋白质上改变该蛋白的胞 质定位， 或调节相应蛋白的活性； 作为结构组分与蛋白质形成核酸蛋白质复合体；可作为小分子 RNA(如miRNA PiwiRNA)的前体分子。越来越多的证据表明IncRNA月中瘤的发生密切相关。LncRN胸正常组织和月中 瘤组织中的差异性表达，可以作为预防和治疗以及观测肿瘤预后的指标。例如 : 前列腺癌特异的lncRNA DD3(
10、也称PCA3)已被发展为高度特异性的核酸分子标志 物，且特异性高于血清前列腺癌特异性抗原(PSA) 17-18 。同样，在肝细胞癌中也发现了许多与月中瘤有关的lncRNA,对这些lncRNA勺研究对肝细胞癌的治疗开辟了 一条新道路。二、lncRNAft肝细胞癌中的研究进展2.1. H19H191由H191因编码白长度为2.3kb的lncRNA,对生长发育中的基因组印迹 发挥重要作用。H19表达于胚胎组织中，出生后在大部分器官组织中表达迅速 下降。近期的研究表明H19s肝癌组织中的表达异常，对肝癌的发展起重要作用。 Zhang L等人19认为H19s肝癌组织中表达比癌旁正常组织降低，在月中瘤结交
11、处表达最高，H1勺肿瘤/癌旁比值越低，预后越差。19抑制了肝癌的转移和上皮-问 质转化(EMT的发生；H19a能协同蛋白复合物hnRNPJ/PCAF/RNApol H ,通过 增加组蛋白乙酰化来活化miR-200家族。因此，对于个体化肝细胞癌的治疗，可 以联合miRN庶口lncRNA,也许会取得更好的疗效。止匕外，还有研究表明H195进细 胞增殖，抑制肝癌发展和转移 20-22 。2.2. HOTAIRHOTAIR(HOXntisense intergenic RNA装录自 HOXCS因，定位于 12q13.13 上的HOXW点。在肝癌组织和肝癌细胞系中显著过表达23-24。HOTAIR接组蛋
12、 白甲基化酶复合体2 ( Polycomb Repressive Complex 2,PRC2) 和组蛋白去甲基化酶复合体(LSD1/CoREST/REST)致H3K27和H3K4甲基化，增强癌细胞侵袭和 代谢25。下调HOTAIRT以抑制基质金属蛋白酶-9 (MMP-9和血管内皮生长因 子表达，从而影响细胞的侵袭和转移23。因此，HOTAIR的上调可能作为肝癌的 转移潜在标志物。另外，下调 HOTAIR勺表达水平可明显提高顺柏和多柔比星是 敏感性，为临床解决肿瘤的耐药提供新线索24 o2.3. MEG3MEG定位于人类染色体14q32.3,属于DLK1-MEG3迹基因26。肝癌组织中， ME
13、G装达显著减少27 o在大部分人类癌细胞系中，超标达 MEG3!致生长抑制， P53蛋白累积，增强P53介导的转录激活作用；无P53蛋白时，过表达MEG也导 致细胞生长抑制，说明 MEG琥以依赖或不依赖P53的方式发挥抑制作用28-29。 肝细胞癌中启动子区域的甲基化会导致 MEG3S因表达抑制30。2.4. MALAT1MALAT1 (metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1) 首先在非小细胞肺癌中发现31,其高表达与肝癌的高度转移风险和不良预后密切相 关。通过RNAF扰技术抑制MALAT酌高表达可以在转录及转录后水平抑制月
14、中瘤 细胞的增殖和侵袭力，增强肝癌组织对细胞凋亡诱导剂的敏感性32-33 o并且有研究发现，MALATE表达的患者，接受移植后更易复发32 o综上所述，MALAT何 作为监测肝移植后肿瘤复发的生物标记。2.5. HULCHULC (highly up-regulated in liver cancer )基因定位于 6P24.3 ,含有 一个内含子和两个外显子，其中内含子长度为1152bp,外显子分别为182bpffi303bp。HULC：有明确的长的开放阅读框，体外翻译结果没有任何可检测的蛋白， 只有在缺乏NS仅翻译 M的情况下翻译的蛋白才能被检测到34。HULCI肝癌中开 高最显著的基因并
15、且特异的在肝癌组织和肝癌病人的血液中高表达35。HULCT与miR-372直接结合抑制其活性，下调 miR-372导致其下游的mRNA Prkacb (cAMP -dependent protein kinase catalytic subunit beta)上调, 促进 CRE瞬酸化,活化的CRE从核与HULCI动子区域结合促进HUL俵达36。另外有研究发现，乙肝 病毒X白(HBX)也可以通过结合CREB白上调HULC上调的HULC!过抑制抑癌 基因p18表达促进肝癌细胞增殖37。在肝癌病人的血清中也可以检测出 HULC这 为肝癌的诊断提供了新途径38。2.6. HEIHHEIH(High
16、Expression in HCC在肝癌组织中表达水平较高，并且在合并肝 硬化的肝癌中表达更高，与HBVff关的肝癌的复发密切相关，是HBV关的肝癌 的总生存期的一个独立预后因素。实验表明，在体内和体外通过抑制中间丝蛋白和波形蛋白的表达导致 HBx表达下调可以抑制肝癌的生长和转移39。HEIH在细 胞G0/G1阻滞中起重要作用，并与 EZH2的靶基因(p15、p16、p21、p57)的抑制 右壬40 有天 。2.7. MVIHMVIH(lncRNAs associated with microvascular invasion in HCC) 在肝癌 中过表达，其通过抑制磷酸甘油酸激酶 -1
17、(phosphoglycerate kinasel,PGK1 ) 促进月中瘤生长和激活月中瘤诱导的血管生成；止匕外，MVIH还有可能作为肝癌切除术后患者的无复发生存率的监测指标41 o2.8. 其他相关lncRNADan X等人通过小鼠模型发现，上调肝生长因子HGF曾力口了 lncRNA-LALR1(lncRNA associated with liver regeneration )的表达，而 lncRNA-LALR1 通过招募转录因子CTC副AXIN1的启动子区域抑制Axinl的表达，激活Wnt/B -Catenin 信号通路，上调 cyclin D1 的表达，促进肝细胞增殖和肝脏再生，可
18、能有益于肝衰竭和肝脏移植患者 42 LncRNA-LETlncRNAlow expression in tumor) 在肝癌中表达下降，试验证实过表达lncRNA-LET卬制月中瘤的转移，而缺氧诱导的 组蛋白脱乙酰化酶 3 (HDAC3通过减少lncRNA-LET启动子区域的组蛋白乙酰化 来下调lncRNA-LET；止匕外，核因子90蛋白(nuclear factor 90 protein)的稳定 影响了肿瘤的侵袭性； 该试验通过研究缺氧、 组蛋白乙酰化障碍和低lncRNA-LET表达之间的关系为肝癌的干预治疗提供新途径43。血清中lncRNAB检测也日益兴 起，比如LU?人通过对比肝癌患者、
19、乙肝患者和正常人血清中的lncRNA-uc003wbd 和 lncRNA-AF085935 发现lncRNA-uc003wb褥口lncRNA-AF085935在三组中差异明 显，可能会成为肝癌和乙肝患者筛查的潜在生物学指标44 。三、展望尽管lncRNA数量庞大，但是有关研究却远不如同属ncRNA勺MicroRNA相比MicroRNA lncRNA发现较早45 ,但是lncRNA的研究目前还处于起步阶段。 LncRNAW月中瘤相关的证据主要来源于表达的差异，仅少数lncRNA的作用机制明确，而且缺乏大样本的临床研究。所以， lncRNA 与肿瘤的关系即是一个挑战又是一个机遇，相信随着研究工作的
20、不断深入，更多的lncRNA被发现，具参与生理病理的作用和机制将会不断被揭示。同时，为肿瘤患者的治疗带来新希望。1 任建松 , 乔友林 . 原发性肝癌危险因素与预防研究进展J. 中国肿瘤,2008,17(4):293-296.2凌宇，冯悦静.原发性肝癌与HB遮染关系的临床分析J.中国实用医 刊,2014,(19):36-38.3 Huang X, Jia Z. Construction of HCC-targeting artificial miRNAs using natural miRNA precursors. Exp Ther Med. 2013 Jul; 6(1):209-215.
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