1、实验三、大肠杆菌感受态细胞的制备,辛德东 10-317，675503,实验目的 实验原理 实验仪器材料 实验步骤 实验结果讨论,实验目的,学习CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞,原理,生理状况下，细菌质粒可通过接合(Conjugation)、转导(Transduction)、方式转入到另外的细菌。 实验条件下，细菌如果能吸收周围环境中的DNA，必须使细菌具备一个特殊的状态感受态（competent）。 DNA是亲水性分子，不容易穿过细菌的细胞膜。 可以让细菌悬在0， CaCl2低渗溶液中，这样细胞膜胀成球形，丢失部分膜蛋白，成为容易吸收外源DNA的细胞感受态细胞(Compenent cells
2、)。,一：受体菌的培养,从LB平板上挑取新活化的E. coli DH5单菌落,接种于3-5ml LB液体培养基中,37下振荡培养12小时左右,直至对数生长后期。 将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于50ml LB液体培养基中,37振荡培养2-3小时至OD600 0.5左右。,二：感受态细胞制备,1: 将培养液转入EP管，冰上 放置20 min,2: 4离心5 min，4000rpm，弃上清,3: 加入0.75ml预冷的CaCl2 ，冰上放置30 min,4: 4离心5 min，4000rpm，弃上清,5:加入0.75ml预冷的CaCl2 ，悬浮细胞，放4保存,实验仪器和试剂,实验仪器 恒温摇床 超净工作台 冷冻离心机 实验试剂 大肠杆菌DH5 LB液体培养基 0.1mol/l CaCl2溶液,实验注意事项,细胞一旦离开培养基，实验操作要轻柔（加液，悬浮细胞），以免造成菌体破裂，影响转化 整个实验过程中注意将细胞置于冰上,
