1、（1）在配制溶液前，请先计算所配试剂中各成分的用量。溶液试剂储存液终浓度所需重量或体积LB培养基200mLyeast extractpowered0.5%tryptonepowered1%NaClpowered1%dH2O溶液I50mLGlucosepowered50 mMTris, pH8.00.5 M25 mMEDTA, pH8.00.5 M10 mMdH2O溶液II4mLNaOH0.4 M0.2 MSDS2%1%溶液III50mLKAc5 M3 MHAc100%11.5% (v/v)dH2OTE（pH8.0）50mLTris, pH8.00.5 M10 mMEDTA, pH8.00.5
2、M1 mMdH2O10TAE电泳缓冲液1000mLTrispowered48.4gEDTA0.5M (pH8)20mLHAc100%11.42mLdH2O6Loading buffer（上样缓冲液）100mL蔗糖powered40%溴酚蓝powered0.25%dH2OEB（溴化乙锭）10mg/mL（2）LB（Luria-Bertani）液体培养基的配制：清洗250mL三角瓶，称取适量的yeast extract（酵母提取物）、tryptone（胰蛋白胨）、NaCl，加入200mL蒸馏水，铝箔纸包扎封口后，待高压蒸汽灭菌。注意：LB液体培养基常用于大肠杆菌增殖培养；在LB培养基中，酵母提取物提
3、供维生素和矿物质，蛋白胨提供碳源、氮源及能量，NaCl提供适当的渗透压；不必定容，可直接加入200mL蒸馏水；氨苄青霉素等抗生素受热易分解，必须在培养基经高压蒸汽灭菌、且温度降至50以下时加入。（3）溶液I、II、III的配制：清洗适当容积的试剂瓶，称取适量粉末状的葡萄糖，选择适当量程的微量移液器，移取所需体积的母液。溶液I、III需要在最后用100mL量筒定容，待高压蒸汽灭菌。溶液II现用现配，室温下放置。注意：溶液I、II、III用于质粒的制备；正确使用微量移液器。（4）配制TE（pH8.0）溶液，待高压蒸汽灭菌。注意：TE溶液用于溶解各类DNA；由于Tris-HCl和EDTA溶液为常用试
4、剂，故常常先配制高浓度的储存液，4冰箱中保存备用；由于0.5M Tris-HCl（pH8.0）和0.5M EDTA（pH8.0）均已调好pH值，配制pH8.0的TE溶液时不必再调节pH值；正确使用微量移液器。（5）配制10TAE电泳缓冲液，待高压蒸汽灭菌。注意：10TAE电泳缓冲液为高浓度的储存液，使用时稀释10倍作为1TAE工作液，电泳槽中添加电泳缓冲液和配制琼脂糖凝胶所用的电泳缓冲液浓度应一致，都使用1TAE工作液。（6）配制6上样缓冲液，待高压蒸汽灭菌。注意：电泳上样前，取适量6上样缓冲液与DNA样品（如质粒溶液、PCR产物、酶切产物等）混合，使上样缓冲液在混合物中的终浓度约为1。（7）配制EB储存液（10mg/mL），室温下保存。注意：在自来水中加入数滴EB储存液即可用于琼脂糖凝胶的染色；由于EB有致癌嫌疑，操作时必须戴一次性塑料手套，禁止戴着塑料手套接触非EB区，操作完毕手套扔在指定的纸篓。
