1、1分子生物学常用溶液配制一、分子生物学常用贮存液的配制130%丙烯酰胺溶液【配制方法】将 29g 丙烯酰胺和 1g N，N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为 60ml 的水中。加热至 37溶解之， 补加水至终体积为 100ml。用滤器（0.45m 孔径）过滤除菌，查证该溶液的 pH 值应 不大于 7.0，置棕色瓶中保存于室温。【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约 0.2
2、 体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用 Whatman 1 号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。240%丙烯酰胺【配制方法】把 380g 丙烯酰胺（DNA 测序级）和 20g N，N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为 600ml 的蒸馏水中。继续按上述配制 30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为 1L。【注意】见上述配制 30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于 DNA 序列测定。3放线菌素 D 溶液【配制方法】把 20mg 放线菌素 D 溶解于 4ml 100%乙醇中，1:10 稀释贮
3、存液，用100%乙醇作空白对照读取 OD440值。放线菌素 D（分子量为 1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为 21，900，故而 1mg/ml 的放线菌素 D 溶液在 440nm 处的吸光值为 0.182，放线菌素 D 的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20。【注意】放线菌素 D 是致畸剂和致癌剂,配制该溶液 时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。药厂提供的作治疗用途的放线菌素 D 制品常含有糖或 盐等添加剂。只要通 过测量贮存液在 440nm 波长处的光吸收确定放线菌素 D 的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。40.
4、1mol/L 腺苷三磷酸（ATP）溶液【配制方法】在 0.8ml 水中溶解 60mg ATP,用 0.1mol/L NaOH 调至 pH 值至 7.0，用蒸馏水定容 1ml，分装成小份保存于-70510mol/L 乙酸酰溶液【配制方法】把 770g 乙酸酰溶解于 800ml 水中，加水定容至 1L 后过滤除菌。610%过硫酸铵溶液2【配制方法】把 1g 过硫酸铵溶解于终量为 10ml 的水溶液中，该溶液可在 4保存数周。7BCIP 溶液【配制方法】把 0.5g 的 5-溴-4-氯-3- 吲哚磷酸二钠盐 （BCIP）溶解于 10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于 482BES 缓冲盐溶液【配
5、制方法】用总体积 90ml 的蒸馏水溶解 1.07g 盐溶液 BESN，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸 、1.6g NaCl 和 0.027g Na2HPO4，室温下用 HCl 调节该溶液的 pH值至 6.96、然后加入蒸馏水定容至 100ml，用 0.22m 滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20 。91mol/L CaCl2 溶液【配制方法】在 200ml 蒸馏水中溶解 54g CaCl26H2O，用 0.22m 滤器过滤除菌，分装成 10ml 小份贮存于-20。【注意】制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至 100ml，用Nalgene 滤器（ 0.45m 孔径） 过滤除
6、菌，然后骤冷至 0。102.5mol/L CaCl2 溶液【配制方法】在 20ml 蒸馏水中溶解 13.5g CaCl26H2O，用 0.22m 滤器过滤除菌，分装成 1ml 小份贮存于-20。111mol/L 二硫苏糖醇（DTT）溶液【配制方法】用 20ml 0.01mol/L 乙酸钠溶液（pH5.2）溶解 3.09g DTT，过滤除菌后分装成 1ml 小份贮存于-20。【注意】DTT 或含有 DTT 的溶液不能 进行高压处理。12脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液【配制方法】把每一种 dNTP 溶解于水至浓度各为 100mmol/L 左右，用微量移液器吸取 0.05mol/l Tris 碱分别
7、调节每一 dNTP 溶液的 pH 值 7.0（用 pH 试纸检测），把中和后的每种 dNTP 溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种 dNTP 的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为 50mmol/L 的dNTP，分装成小份贮存于-70 。碱基 波长（ nm） 消化系数（）L/（molcm）A 259 1.54104G 253 1.37104C 271 9.10103T 260 7.40103比色杯光径为 1cm 时,吸光度=M3130.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液【配制方法】在 800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2H 2
8、O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用 NaOH 调节溶液的 pH 值至 8.0（约需 20g NaOH 颗粒）然后定容至 1L，分装后高 压灭菌备用。【注意】EDTA 二钠盐需加入 NaOH 将溶液的 pH 值调至接近 8.0,才能完全溶解。14溴化乙锭（10mg/ml 溶液）【配制方法】在 100ml 水中加入 1g 溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。【注意】小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。152HEPES 缓冲盐溶液【配制方法】用总量为 90ml 的蒸馏水溶解 1.6g Na
9、Cl、0.074g KCl、0.027g Na2PO42H2O、0.2g 葡聚糖和 1gHEPES，用 0.5mol/l NaOH 调节 pH 值至 7.05，再用蒸馏水定容至 100ml。用 0.22m 滤器过滤除菌，分装成 5ml 小份，贮存于-20。16IPTG 溶液【配制方法】IPTG 为异丙基硫代-D-半乳糖苷（分子量为 238.3），在 8ml 蒸馏水中溶解 2g IPTG 后，用蒸馏 水定容至 10ml，用 0.22m 滤器过滤除菌，分装成1ml 小份贮存于-20。171mol/L 乙酸镁溶液【配制方法】在 800ml 水中溶解 214.46g 四水乙酸镁，用水定容至 1L 过滤
10、除菌。181mol/L MgCl2 溶液【配制方法】在 800ml 水中溶解 203.4g MgCl26H2O，用水定容至 1L，分装成小份并高压灭菌备用。【注意】MgCl 2 极易潮解， 应选购 小瓶（如 100g）试剂，启用新瓶后勿 长期存放。19-巯 基乙醇（BME）溶液【配制方法】一般得到的是 14.4mol/L 溶液，应装在棕色瓶中保存于 4。【注意】BME 或含有 BME 的溶液不能高压处理。20NBT 溶液【配制方法】把 0.5g 氯化氮蓝四唑溶解于 10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于 4。21酚/氯仿溶液4【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用 0.1mol/L TrisH
11、Cl(pH7.6)抽提几次以平衡这混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的 0.01mol/l TrisHCl(pH=7.6)液层,保存于 4。【注意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作 时应戴手套及防护镜，穿防 护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。2210mmol/L 苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液【配制方法】用异丙醇溶解 PMSF 成 1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20。如有必要可配成浓度高达 17.4mg/ml 的贮存液（ 100mmol/L）。【注意】PMSF 严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤
12、，吸入、吞 进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了 PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被 PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF 在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF 在水溶液中的活性 丧失速率随 pH 值的升高而加快，且 25的失活速率高于 4。pH 值为 8.0 时,20mmol/l PMSF 水溶液的半寿期大 约为 85min，这表明将 PMSF 溶液调节为碱性（ pH8.6）并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。23磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液【配制方法】在 800ml 蒸馏水中溶解 8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HP
13、O4 和 0.24g KH2PO4,用 HCl 调节溶液的 pH 值至 7.4 加水定容至 1L，在 15lbf/in2(1034105Pa)高压下蒸气灭菌 20min。保存于室温。241mol/L 乙酸钾（pH=7.5）溶液【配制方法】将 9.82g 乙酸钾溶解于 90ml 纯水中，用 2mol/L 乙酸调节 pH 值至7.5 后加入纯水定容到 1L，保存于 -20。25乙酸钾溶液（用于碱裂解）【配制方法】在 60ml 5mol/L 乙酸钾溶液中加入 11.5ml 冰乙酸和 28.5ml 水，即成钾浓度为 3mol/L 而乙酸根浓度为 5mol/L 的溶液。263mol/L 乙酸钠（pH5.
14、2 和 pH7.0）溶液【配制方法】在 80ml 水中溶解 408.1g 三水乙酸钠，用冰乙酸调节 pH 值至 5.2 或用稀乙酸调节 pH 值至 7.0，加水定容到 1L，分装后高压灭菌。275mol/L NaCl 溶液【配制方法】在 800ml 水中溶解 292.2g NaCl 加水定容至 1L，分装后高压灭菌。2810%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液5【配制方法】在 900ml 水中溶解 100g 电泳级 SDS，加热至 68助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的 pH 值至 7.2，加水定容至 1L，分装备用。【注意】SDS 的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区
15、和天平上的 SDS，10%SDS 溶液无须灭 菌。2920SSC 溶液【配制方法】在 800ml 水中溶解 175.3g NaCl 和 88.2g 柠檬酸钠，加入数滴 10mol/l NaOH 溶液调节 pH 值至 7.0，加水定容至 1L，分装后高压灭菌。3020SSPE 溶液【配制方法】在 800ml 水中溶解 17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4H2O 和 7.4g EDTA,用 NaOH 溶液 调节 pH 值 至 7.4（约需 6.5ml 10ml/L NaOH）,加水定容至 1L,分装后高压灭菌。31100%三氯乙酸溶液【配制方法】在装有 500g TCA 的瓶中加入 2
16、27ml 水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。321mol/L Tris 溶液【配制方法】在 800ml 水中溶解 121.91g Tris 碱,加入浓 HCl 调节 pH 值至所需值。pHHCl 7.4 70ml 7.6 60ml 8.0 42ml应使溶液冷至室温后方可最后调定 pH 值，加水定容至 1L，分装后高压灭菌。【注意】如 1mol/L 溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的 Tris。尽管多种类型的电极均不能准确测量 Tris 溶液的 pH 值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。Tris 溶液的 pH 值因温度而异，温度每升高 1，pH 值大约降低 0.03 个单位。例如
17、：0.05mol/L 的溶液在 5、25、和 37时的 pH 值分别为 9.5、8.9 和 8.6。33Tris 缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris）【配制方法】在 800ml 蒸馏水中溶解 8g NaCl、0.2g KCl 和 3g Tris 碱，加入 0.015g酚并用 HCl 调至 pH 值至 7.4，用蒸 馏水定容至 1L，分装后在151bf/in2(1.034105Pa)高 压下蒸汽灭菌 20min，于室温保存。34X-gal 溶液【配制方法】X-gal 为 5-溴-4-氯-3- 吲哚-D 半乳糖苷。用二甲基甲酰胺溶解 X-gal 配制成的20mg/ml 的贮存液。保存
18、于一玻璃管或聚丙烯管中，装有 X-gal 溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20。 X-gal 溶液无须过滤除菌。二、常用抗生素溶液贮存液 a 工作浓度6抗生素 浓度 保存条件 严紧型质粒 松弛型质粒氨苄青霉素 50mg/ml(溶于水) -20 20g/ml 60g/ml羧苄青霉素 50mg/ml(溶于水) -20 20g/ml 60g/ml氯霉素 34mg/ml(溶于乙醇) -20 25g/ml 170g/ml卡那霉素 10mg/ml(溶于水) -20 10g/ml 50g/ml链霉素 10mg/ml(溶于水) -20 10g/ml 50g/ml四环素 b 5mg/ml
19、(溶于乙醇) -20 10g/ml 50g/mla：以乙醇为溶 剂的抗生素溶液无 须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB 培养基）。三、常用的电泳缓冲液缓冲液 使用液 浓贮存液（每升）Tris-乙酸（TAE） 1：0.04mol/L Tris-乙酸 50：242g Tris 碱0.001mol/L EDTA 57.1ml 冰乙酸100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris-磷酸（TPE） 1:0.09mol/L Tris-磷酸 10:10g Tris 碱0.002mol/L EDTA 15
20、.5ml85%磷酸（1.679g/ml）40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris-硼酸（TBE） a 0.50.045mol/L Tris-硼酸 5：54g Tris 碱0.001mol/L EDTA 27.5 硼酸20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)碱性缓冲液 b 1:50mmol/L NaOH 1:5ml 10mol/L NaOH1mmol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)Tris-甘氨酸 c 1:25mmol/L Tris 5:15.1g Tris250mmol/L 甘氨酸 94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3）0.1% SDS 50ml 10% SDS(电泳级)需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网进行咨询：http:/
