1、医学免疫学实验教学大纲实验名称：医学免疫学 学时： 6学时学 分： 适应专业：护理学专业执 笔 人：边藏丽审 定 人：王恺兵一、实验目的与任务实验教学是医学免疫学教学的重要组成部分，通过实验教学加深对基础理论知识的理解，了解常用的免疫学检查方法，掌握免疫学基本实验技术（试管凝集、玻片凝集、对流免疫电泳、免疫细胞形态观察、淋巴细胞分离、ELISA等），培养学生严谨求实的科学态度以及观察、分析、综合能力、创造思维能力和初步的科研能力。二、教学基本要求医学免疫学实验对象多为具有传染性的材料，要求学生在实验教学中严格遵守实验室规则，牢固树立无菌观念，认真操作与观察实验结果，实事求是的记录实验结果，并对
2、实验结果进行认真分析和讨论。三、实验项目与类型序号实验项目学时实验类型备注验证设计综合演示创新必做选做1凝集反应（试管凝集、玻片凝集）32对流免疫电泳、血型鉴定23小鼠吞噬细胞及转化细胞形态观察24酶联免疫吸附试验ELISA（HBsAg检测）35豚鼠过敏试验2四、实验教学内容及学时分配实验一 凝集反应（试管凝集、玻片凝集） 3学时1 目的要求掌握体外抗原抗体反应的特点和影响因素；掌握凝集反应原理、方法和用途。2方法原理颗粒性抗原与相应抗体在一定条件下特异性结合而出现肉眼可见的凝集现象。3主要实验仪器及材料试管、玻片、水浴箱、吸管、伤寒杆菌“H”“O”诊断菌液、大肠埃希菌、大肠埃希菌诊断血清等。
3、4掌握要点掌握凝集反应原理、方法和用途；血清效价；凝集现象的观察。 5实验内容：（1）玻片凝集（抗原定性试验）（2）试管凝集（抗体定量试验）实验二 对流免疫电泳、血型鉴定 2学时1 目的要求掌握沉淀的反应原理、方法和用途；了解对流免疫电泳的操作步骤，结果观察；掌握血型鉴定的反应原理、方法及结果判断。2方法原理对流免疫电泳是将经典沉淀反应与电泳技术结合而设计的一项实验。沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在一定条件下发生结合并出现肉眼可见的沉淀物的一种血清学反应。带电的胶体颗粒可在电场中移动，其移动方向与胶体颗粒所带电荷有关。抗原在PH8.6的缓冲带负电荷，将抗原加于琼脂板阴极端的小孔中，由阴极向阳
4、极移动；抗体为球蛋因电渗作用而流向阴极。当抗原抗体在两孔间相遇时，在两者比例适当处形成白色沉淀线。此种在双向琼指扩散基础上加电泳的方法，称为对流免疫电泳。血型鉴定属直接凝集反应。将已知标准抗A和抗B血型抗体分别与待测红细胞混合。如果抗原与抗体相对应，则引起红细胞凝集，反之则不凝集，据其凝集现象可判断血型。3主要实验仪器及材料标准的抗A和抗B单克隆抗体（抗A为蓝色，抗B为黄色）、酒精棉球、采血针、载玻片、待测血清、甲胎蛋白诊断血清，肝癌病人阳性血清，PH8.6 0.05mol/L巴比妥缓冲液，琼脂对流免疫板、打孔器、加样器、电泳仪等。4掌握要点（1）对流免疫电泳的操作步骤，结果观察；（2）血型鉴
5、定的方法及结果判断。5实验内容：（1）讲述沉淀的反应原理、方法和用途；对流免疫电泳的操作步骤，结果观察；血型鉴定的反应原理、方法及结果判断；（2）对流免疫电泳的操作及结果观察；（3）血型鉴定的操作及结果观察；实验三 小鼠吞噬细胞及转化细胞形态观察 2学时1.目的要求观察吞噬细胞的吞噬现象；了解机体的非特异性免疫功能。观察转化细胞、淋巴母细胞的形态了解机体的特异性免疫功能。 2方法原理巨噬细胞可吞噬异种或异体细胞等体积较大的异物，中性粒细胞可吞噬多种细菌。观察这两类细胞的吞噬现象，可计算出吞噬异物的细胞数和吞噬细胞中吞入的异物数，用以 评价机体的免疫状态。淋巴细胞，在受抗原的刺激后，可转化为淋巴
6、母细胞，淋巴细胞转化率的高低可反映机体细胞免疫水平。3主要实验仪器及材料昆明小白鼠、表皮葡萄球菌、瑞氏染液、显微镜、玻片等。4掌握要点小白鼠腹腔解剖；观察吞噬细胞的吞噬现象；观察转化细胞、淋巴母细胞的形态。5实验内容：（1）小白鼠腹腔解剖；（2）标本片制作（3）瑞氏染液、（4）油镜下观察转化细胞、淋巴母细胞的形态。实验四 酶联免疫吸附试验ELISA（HBsAg检测） 2学时1.目的要求了解ELISA的类型，双抗体夹心法的操作方法，掌握结果观察及实际应用。2方法原理酶联免疫吸附试验是一种用酶标化抗原或抗体，以提高抗原抗体反应的灵敏度的免疫学检测方法。本技术肯有敏感性高，特异性强，易观察结果，便于
7、大规模检测的特点。ELISA的类型有间接法、双抗体夹心法、抗原竞争法等。双抗体夹心法是将抗原结合于已预先包被的已知抗体上，再以酶标抗体与抗原结合，通过观察酶对底物的摧化反应所产和的颜色变化，来判断抗原的存在及含量。3主要实验仪器及材料HBsAg酶标试剂盒，内含：已包被抗-HBs微量反应板、阳性控制血清、阴性控制血清、酶标抗-HBs、酶底物A、酶底物B、中止液、洗涤液。待检血清、微量加样器、吸头等。4掌握要点准确加样；准确掌握每步操作时间；认真观察分析结果5实验内容：ELISA检测HBsAg（或抗HBsAg）实验五 豚鼠过敏试验 2学时1.目的要求了解实验性过敏性休克的方法及结果观察；在此基础上
8、掌握型超敏反应的机制、临床表现及特点。2方法原理豚鼠过敏反应属型超敏反应，与人类的青霉素和异种血清所引起的过敏性休克相似。先给豚鼠注射异种蛋白，经过一定时间，动物产生IgE后处于致敏状态。当第二次相同较大量抗原注射时，抗原与IgE结合，导致肥大细胞和碱性粒细胞脱颗粒，释放活性介质，作用于效应器官，产生严重的过敏性休克。3主要实验仪器及材料豚鼠：体重150g左右的幼小豚鼠、马血清（或人血清）、注射器、剪刀、酒精棉球等。4掌握要点掌握抗原注射剂量；第二次相同抗原注射时间；豚鼠发敏、过敏性休克现象观察。5实验内容：（1）豚鼠致敏注射（2）豚鼠发敏、过敏性休克现象观察。五、考核办法考勤、实验操作50%；实验报告50%。考核成绩以20%计入课程总成绩。六、实验教学指导书和参考书1 熊平源，边藏丽医学免疫学与微生物学实验教程，第二版，广西师范大学出版社，1997年8月.2 丁义玲，王恺兵高等医药院校基础医学实验教程，第一版，湖北科学技术出版社，2000年9月.
