1、狂犬病毒及其检验,济宁医学院医学检验教研室 邵泽伟 副教授,内 容,狂犬病流行病学 狂犬病病原学 人类狂犬病的发病机理及临床表现 狂犬病的检验,狂犬病流行病学,北美和欧洲100 死亡数100 000 暴露后免疫,拉丁美洲30 死亡数350 000 暴露后免疫,中东50 死亡数150 000 暴露后免疫,非洲 5000 - 15000 死亡数 7000 000 暴露后免疫,数据不全，特别是非洲和亚洲的数据难以证实,2000年各地区狂犬病发生情况,建国以来全国狂犬病报告发病情况,1996年全国狂犬病报告病例地理分布,2000年全国狂犬病报告病例地理分布,2004年全国狂犬病报告病例地理分布,狂犬病
2、的主要传染源,区域 主要宿主 亚洲狗，狼，猫，猫鼬，非洲狗，豺，猫鼬，狐狸拉丁美洲狗，蝙蝠北美洲臭鼬，浣熊，狐狸 ，蝙蝠加勒比海地区猫鼬西欧狐狸 ，蝙蝠东欧狐狸，狗,亚洲和非洲：狗是主要的传染源，猫也可以传染狂犬病。欧美发达国家野生动物是主要的传染源。,狂犬病的传播,人类,狂犬病的易感人群和分布特征,人群普遍易感发病人群的差异因接触犬机会的多少所致,亚非国家：男性多于女性，青少年发病较多欧美国家：人群分布有一定职业性，以野外考察、旅游者等与野生动物接触的人群多见,儿童狂犬病的特殊性,发病率高，15岁以下儿童占发病数的40以上。极易咬伤头面部、颈部及上肢。被抓伤或咬伤后，未及时告诉监护人，未能得
3、到及时处置，所以容易被忽视。,狂犬病病原学,弹状病毒科狂犬病毒属不分节段的单股负链RNA包膜病毒形状:子弹头(180 nm 75 nm)RNA基因组编码5种蛋白: N, M1, M2, G和L蛋白有一层磷脂层包被，包膜上镶嵌有10-nm长的糖蛋白形成钉状突起蛋白G是主要的病毒保护性抗原，可以刺激机体产生病毒中和抗体,结 构,狂犬病病毒的理化特性,对脂溶剂（肥皂水、氯仿、丙酮等）、乙醇、甲醛、碘制剂以及季胺类化合物、酸（PH 4以下），碱（PH 10以上）敏感；对日光、紫外线和热敏感，病毒悬液经56 3060分钟或100 2分钟即失去活力，易被巴氏消毒法消毒；不易被酚或来苏尔溶液杀灭；对干燥、反
4、复冻融有一定抵抗力。,狂犬病发病机理及临床表现,狂犬病致病机理,通过神经进入分泌腺体：在唾液中排出病毒,进入大脑细胞引起全脑炎,在神经系统中向心性移动,通过肌肉周围神经末梢进入神经系统,病毒在伤口周围肌肉细胞中复制,被动物咬伤而感染病毒,临床表现,潜伏期 前驱期 临床症状 (急性期) 昏迷和死亡,潜伏期,从暴露后数天到数年，差别非常大，一般 20 60 天主要的影响因素：,感染的病毒数量 病毒毒力强弱 暴露的严重程度和部位注：狂犬病暴露者指被狂犬、疑似狂犬或狂犬病宿主动物抓伤、咬伤、舔舐皮肤或粘膜破损处的所有人员。,前驱期,持续数天 非特异症状 不适 乏力 头痛 发热 警示性主诉：暴露部位疼痛
5、或感觉异常，出现蚁走感,急性发作期,情绪波动(激动/抑郁, 攻击性)恐惧发作(恐水 恐光 恐风)自主功能障碍(瞳孔散大),瘫痪,格林巴利综合症(伴发热)完全瘫痪,脑炎型(狂躁型) 狂犬病,约80%,麻痹型(哑型) 狂犬病,约20%,持续数天 两种类型,昏迷和死亡,几乎所有的狂犬病临床症状都会发展成为昏迷和死亡 在发病后数天时开始昏迷 由于呼吸循环衰竭而死亡,狂犬病的检验,狂犬病检验,流行病学史+临床症状,入院后的实验室检查： 免疫荧光抗体法检测病毒抗原 RTPCR方法检测病毒核酸死后的实验室诊断 脑组织标本抗狂犬病毒荧光抗体染色阳性 脑组织中病理切片存在Negri 小体。（常见于海马及小脑浦肯
6、野组织的神经细胞中的一个至数个，圆形或卵圆形，由肿胀或变性的神经细胞形成的直径约310m 的嗜酸性包涵体，即内基小体（Negri body）。 脑组织标本中分离到病毒,每天唾液，鼻咽洗液，脑脊液，尿液，角膜印片，皮肤切片每天唾液，鼻咽洗液，脑脊液，尿液，角膜和皮肤组织,病 史,几乎所有的病例,被唾液中含有病毒的动物（狗）咬伤、抓伤或被舔及粘膜、破损皮肤,极少数病例,吸入病毒气溶胶 (在实验室环境, 蝙蝠居住的洞穴 ),人与人之间的传播 器官移植,*被感染的患者咬伤或被唾液污染，无确切报道*,狂犬病诊断标准,3.1流行病学史 有感染史（被犬、猫、野生食肉动物以及食虫和吸血蝙蝠等宿主动物咬伤、抓伤
7、、舔舐粘膜或伤口）。3.2临床症状3.2.1伤口周围感觉异常、麻木发痒、刺痛或蚁走感。出现兴奋、烦躁、恐惧，对外界刺激如风、水、光、声等异常敏感。3.2.2“恐水”症状，伴交感神经兴奋性亢进（流涎、多汗、心律快、血压增高），继而肌肉瘫痪或颅神经瘫痪（失音、失语、心律不齐）。3.3实验室检查3.3.1免疫荧光抗体法检测抗原：发病第一周内取唾液、鼻咽洗液、角膜印片、皮肤切片，用荧光抗体染色，狂犬病病毒抗原阳性，或用RT-PCR方法检测狂犬病毒核酸阳性 。3.3.2细胞培养法从病人标本中分离到狂犬病毒。 3.3.3死后脑组织标本病毒分离阳性或荧光抗体染色阳性或检到内基氏小体。 病例分类 1.临床诊断
8、病例：具备3.1加3.2.1或3.2.2。 2.确诊病例：临床诊断病例加3.3的任一条。,狂犬病的免疫预防,内 容,暴露后处理 暴露前预防 狂犬病抗体的检测,狂犬病的免疫处理,前提： 所使用的狂犬病疫苗、抗狂犬病血清和人源狂犬病免疫球蛋白的制品质量一定要符合国家标准与要求，只有这样才能达到免疫预防的预期效果。,暴露后免疫,人对狂犬病毒的易感性,人对狂犬病毒没有自然免疫力，无隐性感染者。人被疯动物咬伤抓伤后狂犬病的发生率为30-70%，如能正确处理伤口、使用疫苗和抗血清，发生率可降到1%以下。,预防免疫，越早越好,一旦感染 (被动物致伤),一旦与外周神经结合,病毒开始在伤口局部复制繁殖,一旦症状
9、出现,病毒开始向中枢神经系统移动,死亡几乎不可避免,潜伏期,感染,前驱症状,临床症状,昏迷和死亡,在侵入神经系统前及早采取措施,侵入神经系统后没有任何有效手段阻止病程发展,暴露后处理的步骤,第一步: 立即进行局部伤口的处理，适用于所有类型的暴露 第二步:应根据患者疫苗接种史和伤口类型进行不同的处理 (WHO 关于暴露后免疫的指导原则),WHO 对暴露后处理的指导原则,如果非流行区明显健康的猫或狗被隔离观察或被实验室检验后证实未感染狂犬病毒，则可以终止治疗。本条款不提倡在中国国内使用。暴露于啮齿动物（包括鼠、兔等），也需要暴露后免疫治疗。,暴露于蝙蝠者，按照III类伤口处理,暴露后免疫 局部伤口
10、处理,目的是尽可能多地清除局部感染的病毒 物理方法清除病毒颗粒 化学作用灭活剩余的病毒,立即 然后,用流动的水、20肥皂水或含有清洁剂的水强力冲洗伤口，至少15分钟（WHO）；,使用酒精 (75%)或碘酊消毒；,严重伤口的处理：伤口的清创处理要尽量避免缝合伤口，如必须缝合，则应保证免疫球蛋白已按上述要求在伤口周围浸润注射；需要应用抗生素或抗破伤风措施时，应在局部处理后再进行。,疾控中心狂犬门诊或医疗机构,暴露后免疫 被动免疫,对于WHO推荐方案中的III类暴露以及野生动物咬伤的II类以上的暴露，在接种疫苗的同时，要在伤口周围浸润注射抗狂犬病免疫血清或球蛋白。,抗狂犬病免疫球蛋白/血清的使用方法
11、,在局部伤口内部和周围尽可能多地注射抗狂犬免疫球蛋白/血清以中和病毒，如伤口多时可以全部用于局部。剂量： 人抗狂犬免疫球蛋白/血清: 20 IU/kg 体重 马抗狂犬免疫球蛋白/血清: 40 IU/kg 体重使用马抗狂犬免疫球蛋白/血清之前要进行皮肤过敏试验（按照产品使用说明书）。剩余的抗狂犬免疫球蛋白/血清应当在远离疫苗接种的部位肌肉注射。如果伤口面积大，可以将抗狂犬免疫球蛋白/血清用生理盐水稀释后再浸润注射。不可以和疫苗使用同一支注射器。,使用马的抗血清的注意事项：,注射首针疫苗后7天内，仍应注射抗血清或免疫球蛋白， 理由： 1、因为此时人体的主动免疫尚未产生。 2、局部浸润注射的球蛋白对于血清中 的抗狂犬病毒中和抗体水平可忽略不计。,暴露后免疫 主动免疫：,肌肉 接种方案（上臂三角肌，儿童也可注射于大腿前外侧肌） WHO标准 5针肌肉接种方案,抗狂犬病血清或免疫球蛋白（III类暴露）,注意两手的操作位置和进针角度,儿童大腿前外侧肌注射示意图,狂犬病疫苗的抗体检测,狂犬病疫苗的抗体检测,世界卫生组织推荐两种标准的抗体检测方法：小鼠中和法快速免疫荧光灶抑制试验（RFFIT）目前国内所用的ELISA试剂盒均无国家证书ELISA方法测定的是总抗体，不代表具有保护性的中和抗体水平，其结果仅供参考。,
