1、临床科研选题与科研设计 （做科研型医生）,中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础医学院,以几个案例作例子来阐述,Idea（新鲜）（创新点）Design 如何(从哪几方面)来验证，它们的逻辑关系Methods（逻辑，内在联系）,新发SLE患者（创新点）调节性 T细胞的研究(表面标志CD25与转录因子Foxp3 的表达、细胞的抑制作用、其临床意义）国外的SLE患者绝大多数有激素或细胞毒药物治疗的经历,案例一,自身免疫应答靶抗原的的“暴露”或形成（隐蔽抗原） 微生物感染激活自身反应性淋巴细胞（分子模拟）协同刺激分子的异位表达多克隆淋巴细胞的非特异性活化（超抗原） 免疫调节紊乱（包括调节性T
2、细胞数量减少或功能减弱）其它,自身免疫病发病的免疫学因素,CD4+CD25+调节性T细胞（其抑制功能需Foxp3转录因子表达）,调节性T细胞,案例一涉及的3项研究,研究新发SLE患者周围血中CD4+ T细胞的CD25与FoxP3表达，及Glucocorticosteroid/cyclophosphamide治疗对CD25与FoxP3 在CD4+ T细胞表达的影响。 研究对象为24例新发活动期SLE患者、20例新发非活动期SLE患者、21例年龄性别相合的正常志愿者。分离周围血的单个核细胞，用流式细胞仪检测CD4 T细胞CD25与FoxP3的表达。 发现FoxP3在新发SLE患者CD4+CD25+
3、 T 细胞的表达下降，在CD4+CD25- T 细胞 的表达增强。还检测了Glucocorticosteroid与cyclophosphamide治疗对FoxP3在CD4+CD25+和CD4+CD25- T 细胞表达的影响,第1项研究：Reduction of Foxp3 levels in CD4+CD25high T cells in patients with new-onset systemic lupus erythematosus. Clin Exp Immunol. 2008;153(2):182-7.,研究新发SLE患者周围血CD4+CD25-Foxp3+ T细胞的临床意义 检
4、测10例活动期、11例非活动期新发 SLE患者、及11例健康志愿者。用流式细胞仪分析Foxp3与CD25在CD4 T细胞的表达。分离CD4+CD25+与CD4+CD25- T细胞，检测它们对T细胞增殖的影响。G检测CD4+CD25- T细胞与其他临床指标（如抗dsDNA、尿蛋白、血清C3水平、SLEDAI）的相关性 这个故事并不复杂，内容较简单，文内仅2张图与1个表格。但创新点明显，文章发表于Ann Rheum Dis. 2008; 67(7):1037-40. Impact fector 7.188。,第2项研究：Clinical significance of increased CD4+
5、CD25-Foxp3+T cells in patients with new-onset systemic lupus erythematosus,第3项研究: Are CD4+CD25Foxp3+ cells in untreated new-onset lupus patients regulatory T cells? Arthritis Res Ther 2009; 11(5):R153,研究新发SLE 患者周围血中的CD4+CD25-Foxp3+ T细胞与CD4+CD25+Foxp3+ T细胞表面表达的分子及分泌的细胞因子有何不同，及 CD4+CD25-Foxp3+ T细胞有否抑制
6、。 检测22例新发SLE 患者。用流式细胞仪分析比较CD4+CD25-Foxp3+ 细胞与CD4+CD25+Foxp3+ T细胞表面标志子表达及细胞因子表达的差异。检测CD4+CD25+Foxp3+ T细胞对T细胞增殖有否调节作用。,新发SLE患者其它免疫细胞有什么特点新发其它自身免疫病免疫细胞有什么特点新发其它自身免疫病其它免疫学指标有什么特点,从案例一能得到的启发,案例二 新型抗流感药DAS181的研发,A型流感病毒的生活周期,已批准上市的抗流感药物M2离子通道阻滞剂盐酸金刚乙胺（1993年美国FDA批准上市）金刚烷胺（1966 FDA年批准为预防药，1976年确认其为治疗药）神经胺酸酶（
7、NA）抑制剂达菲（1999年美国FDA批准上市）扎那米韦（1999年5月首先在澳大利亚获准上市）,除了毒副作用外，主要的问题是流感病毒产生抗药性，因为病毒基因突变,研发中的抗流感药物,流感病毒的NA与HA相互作用感染靶细胞,Neu5Ac (2,3)-Gal与Neu5Ac (2,6)-Gal分子就是流感病毒的受体。人流感病毒主要识别(2,6)-Gal唾液酸，禽流感病毒与马流感病毒主要识别(2,3)-Gal唾液酸。流感病毒的HA与细胞表面含(2,3)-Gal或/和(2,6)-Gal唾液酸的糖蛋白相结合。人呼吸道上皮细胞的唾液酸主要是(2,6)-Gal型，但也有(2,3)-Gal型，所以禽流感病毒也
8、能感染人，尽管感染效率不高。NA的作用是破坏HA的受体。它酶切呼吸道黏膜上诸如mucin等潜在抑制性分子的唾液酸，从而使之灭活，促进病毒在呼吸道传播;酶切病毒感染细胞表面的唾液酸，促进子代病毒释出，以助于病毒传播。HA的受体结合作用和NA的受体破坏作用相互相成，维持平衡，于病毒复制和传播十分重要。,呼吸道上皮细胞,唾液酸,流感病毒,HA,NA,以往有报道，体外实验中唾液酸酶能有效阻止流感病毒感染细胞。因此学者欲研制一种融合蛋白，由唾液酸酶与能锚定于人呼吸道上皮细胞的蛋白组成。,DAS181的分子模式,报道已从微生物和真核细胞分离出15种底物特异性和酶动力学各异的唾液酸酶。从中选择A.visco
9、sus唾液酸酶的催化功能域。其理由为：底物特异性广；催化活性最大；人免疫系统对其耐受，因为人正常口腔和胃肠道细菌也产生此唾液酸酶。,DAS181抗流感病毒作用的研究（细胞、小鼠与雪貂模型）,DAS181的创新点,靶点在宿主细胞上，能避免产生病毒耐药广谱抗流感病毒药物（A,B型流感、流感病毒耐药株、副流感病毒）能酶切SA2,3Gal和SA2,6Gal，也能酶切SA2,8Gal。因此，对现有流感毒株、未来毒株、及重组变异毒株均有效吸入给药，生物利用度高药物作用持续时间较长：至少2天（MDCK), 至少7天（HAE)，用于预防和治疗均可,案例三：与IgA肾病发病机制相关,聚糖（glycan),核酸、
10、蛋白质、聚糖和脂是所有细胞的4种基本大分子核酸链基本上由4种核苷酸组成肽链基本上由23种氨基酸组成糖链十分复杂脂质按生物学功能可分为三类：储存脂质（包括甘油三脂和蜡）结构脂质（构成生物膜脂双层的磷脂）活性脂质（类固醇和萜）,案例四：几个病案分析及其它,XXX等（301医院）：不明原因发热的病因分布及临床特征 2000年1月至2009年1月在301医院内科住院且符合不明原因发热的患者816例，病因分布，临床特征，老年患者与非老年患者之间的比较。 XXX等（北京协和医院）：结石性急性胆管炎的治疗 1998.1-2008.12急诊的急性胆管炎患者426例，随着介入技术（急性行经皮经肝胆道穿刺引流术）
11、和内镜技术（急性行经内镜逆行胰胆管造影）的进展，急性胆管炎患者由急诊手术经保守治疗或介入治疗转为择期手术，可以大大减少手术并发症发生率，降低手术死亡率。 XXX等（北京协和医院）：胰腺实性假乳头状瘤的CT诊断及鉴别诊断 对14例病理确诊的胰腺实性假乳头状瘤患者的CT资料作CT诊断及鉴别诊断(无功能性胰岛细胞瘤、胰腺囊腺瘤、胰腺癌、胰腺假性囊肿）分析 XXX等（北京协和医院）：细针穿刺技术在乳腺癌手术治疗中的应用价值 2004.1-2009.1北京协和医院初诊考虑乳腺癌可能性大的530例女性患者作细针穿刺细胞学（FNAC）检查。 FNAC检查阳性325例，直接行乳腺癌根治术，术后组织病理学检查均
12、为乳腺癌。 FNAC检查阴性205例，开放活检术，术后组织病理学检查137例乳腺癌，68例非乳腺癌。表明FNAC有助于对怀疑乳腺癌者选择适当的术式。,以中国医学科学院学报2011年第1期上的几篇论文为例,病案分析加检验科检测指标也能发SCI文章,2009,确定“点”，要有新意要有正常对照和其它对照（如阳性对照）分析的指标不能单一，分析要有层次正确的统计处理最好能结合一点实验室检测,病案分析中需注意的几点,药剂科的人员一般做药代动力学和生物效性等的试验较多,对药剂师科研工作的建议,与临床大夫密切合作参与新药研制有效制剂的开发（如协和医院的健脑合剂等）做一点药物作用机理的研究,科研工作中尚需注意的
13、几点,每一步都要走得踏实，要核实试剂和仪器是否OK（以本人做PCR检测及研制PSA试剂盒失败为例说明）,表位可分成两类：线性表位（linear，指肽链上由一段序列相连续的氨基酸残基所形成的抗原表位）和构象表位（conformation，指多肽或多糖链上由空间位置相邻，而序列上不相连续的氨基酸残基或多糖残基所形成的抗原表位）,严格实验操作，做好实验记录（包括病案记录）随时分析实验结果，适时对研究目的和技术路线作调整,爱因斯坦有关如何做科学研究的名言,One percent inspiration and ninety nine percent perspiration,灵感来自哪里? 临床实践与
14、文献。要找到和明确什么是你研究的“点”（创新最关键）。 Idea Design(切实可行的技术路线,从哪几方面说明这个“点”，它们的逻辑顺序怎样） Methods 。 需要多一点分子生物学、免疫学、细胞生物学等的知识，需多读文献。,如何写科研论文,明确什么是这篇论文的“点”。确定论文的题目。画制图表（论文的核心）材料与方法查阅文献引言（包括问题的提出（背景、假设），回答了什么问题，创新点）讨论（简单小结本研究的发现，与其他学者研究的比较，本创新发现的意义，其它，等等）摘要,Clinical significance of increased CD4+CD25-Foxp3+T cells in
15、patients with new-onset systemic lupus erythematosus,题 目,以前述案例一（2）为例,实验结果（图表的制作）,Fig 1. CD4+CD25+Foxp3+ and CD4+CD25-Foxp3+ T cells in SLE patients and normal controls,Fig 2. The expression of CD127 by CD4+ T cell subpopulation,材料与方法 （可以参考他人的文章）,前言,CD4+CD25+调节性T细胞在SLE发病中作用的的报道不甚一致，且尚无在新发SLE患者研究的报道Fo
16、xp3表达不只限于CD4+CD25+ T细胞（Treg），作者以往研究观察到新发SLE患者CD4+CD25- Foxp3 T细胞频率增高CD4+CD25-Foxp3+ T细胞有什么临床意义,（包括问题的提出（背景、假设），回答了什么问题，创新点）,讨 论,有关CD4+CD25+ Treg细胞在SLE患者周围血中状况的报道不尽相同。这可能与各种免疫抑制剂使用相关。 本文报道了在新发SLE所做的研究。对CD4+CD25-Foxp3+ T细胞作了讨论。与CD127表达的关系。 新发SLE患者的 CD4+CD25-Foxp3+ T细胞有一定临床意义。 新发SLE患者的 CD4+CD25-Foxp3+ T细胞有否抑制作用？,（简单小结本研究的发现，与其他学者研究的比较，本创新发现的意义，其它，等等）,如果自己用英语写论文暂时有困难，可请专门的论文写作公司帮忙。关键是要有创新的研究结果和确切可靠的数据。,中文论文也一样,基金申请,申请书的撰写（立论依据、技术路线、拟使用的方法、创新点、工作基础、队伍） 评审的流程,谢 谢!,
