1、本方法适用于酿造酱油时在制品菌种孢子发芽率的测定。1 仪器及试剂 a. 凹玻片、盖玻片、显微镜; b. 恒温箱; c. 生理盐水、无菌水、察氏培养基; d. 接种环、酒精灯等。 2 操作 2.1 制备悬浮液:取种曲少许入盛有 25mL 事先灭菌的生理盐水和玻璃珠的锥形瓶中,充分振摇约 15min,务使孢子个个分散,制成孢子悬浮液。 2.2 制作标本 :先在凹玻片的凹窝内滴入无菌水 1 滴,再将察氏培养基融化并冷却至 45 50后, 接入孢子悬浮液数滴。充分摇匀后,用玻璃棒以薄层涂布在盖玻片上,然后反盖于凹玻片的窝上,四周涂凡士林封固。放置于 3032恒温箱内培养 35h。 2.3 镜检: 取出
2、标本在高倍镜头下观察孢子发芽情况 ,逐个数出发芽孢子数和未发芽孢子数 3 计算 a 发芽率(%) 100A 式中:a-发芽孢子数,个; A-发芽及不发芽孢子总数 ,个。4 注意事项 4.1 为了正确起见,要同时制作两张以上标本片镜检,取其平均值。 4.2 悬浮液制备后要立刻制作标本培养,时间不宜放长。 4.3 培养基中接入悬浮液的数量,应根据视野内孢子数多少来决定,一般以每视野内有 10 20 个孢子为宜。 4.4 每次镜检,要在不同视野中连续观察 100200 个孢子的发芽情况。 4.5 由于发芽快慢与温度有密切关系,所以培养温度要严格控制。为了加速发芽,可提高培养温度至 35左右 ,但必须与 3032 法进行对照。 4.6 菌种不同,驯化程度不同,测定用培养基配方允许稍有不同,例如 3.951 菌种可在察氏培养基中加几滴豆饼煮出液。 4.7 察氏培养基配方如下: 硝酸钠 3g 磷酸氢二钾 1g 氯化钾 0.5g 硫酸镁 0.5g 硫酸亚铁 0.01g蔗糖 20g 蒸馏水 1000mL 琼脂 20g 将上述药品按顺序溶解后,加入琼脂加热溶化。分装15150mL 试管中, 加压灭菌后备用。
