临床技术操作规范-病理学分册.pdf

1、临床技术操作规范 病理学分册 第 1 章 总 则 一、为提高病理学诊断质量，促进临床工作，依据中华人民共和国执业医师法精神，结合医院病理科工作的特点，制定本规范。 二、医院病理科和承担医院病理科任务的医学院校病理教研室的主要临床任务是通过活体组织病理学检查（简称活检）、细胞病理学检查（简称细胞学检查）和尸体剖检（简称尸检）等作出疾病的病理学诊断（或称病理诊断）。具有一定规模的病理科，应积极开展教学、培训病理医师和科学研究等项工作。 三、 病理学诊断是病理医师应用病理学知识、有关技术和个人专业实践经 验，对送检的患者标本（或称检材，包括活体组织、细胞和尸体等）进行病理学检查，结合有关临床资料，通

2、过分析、综合后，作出的关于该标本病理变化性质的判断和具体疾病的诊断。病理学诊断为临床医师确定疾病诊断、制定治疗方案、评估疾病预后和总结诊治疾病经验等提供重要的、有时是决定性的依据，并在疾病预防，特别是传染病预防中发挥重要作用。 四、病理学诊断报告书（或称病理诊断报告）是关于疾病诊断的重要医学文书。当涉及医、患间医疗争议时，相关的病理学诊断报告书具有法律意义。病理学诊断报告书应由具有执业资格的注册主治医师以上（含主治医师）的病理医师签发。各医院可酌情准予条件适宜的高年资病理科住院医师试行签署病理学诊断报告书。低年资病理科住院医师、病理科进修医师和非病理学专业的医师不得签署病理学诊断报告书。 五、

3、病理学检查是临床医师与病理医师为确立疾病诊断而进行的合作行为，是有关临床科室与病理科之间特殊形式的会诊。临床医师和病理医师双方皆应认真履行各自的义务和承担相应的责任。 六、病理学检查申请单是临床医师向病理医师发出的会诊邀请单。病理学检查申请单的作用是：临床医师向病理医师传递关于患者的主要临床信息（包括症状、体征、各种辅助检查结果和手术所见等）、诊断意向和就具体病例对病理学检查提出的某些特殊要求，为进行病理学检查和病理学诊断提供重要的参考资料或依据。病理学检查申请单是疾病诊治过程中的有效医学文书，各项信息必须真实，应由主管患者的临床医师亲自（或指导有关医师）逐项认真填写并签名。 七、临床医师应保

4、证送检标本与相应的病理学检查申请单内容的真实性和一致性，所送检材应具有病变代表性和可检查性，并应是标本的全部。 八、患者或患者的授权人应向医师提供有关患者的真实信息（包括姓名、性别、年龄、病史和可能涉及诊断需要的隐私信息）。病理医师应尊重和保护患者的隐私。患者或患者的授权人应保证其自送检材的真实性、完整性和可检查性。 九、病理科应努力为临床、为患者提供优质服务，遵照本规范的要求加强科室建设，制订完善的科室管理制度，并实施有效的质量监控。 十、病理科工作人员应恪尽职守，做好本职工作。病理医师应及时对标本进行检查和发出病理学诊断报告书，认真对待临床医师就病理学诊断提出的咨询，必要时应复查有关的标本

5、和切片，并予以答复。病理科技术人员应严格执行本规范的技术操作规程，提供合格的病理学常规染色片、特殊染色片和可靠的其他相关检测结果，并确保经过技术流程处理的检材真实无误。 第 2 章 病理学检查常规 第一节 普通活体组织病理学检查常规 一、申请单和标本的验收 (一)病理科应有专人验收普通活体组织病理学检查 (常规活检)申请单和送检的标本。 (二)病理科验收人员必须： 11 同时接受同一患者的申请单和标本。 2 认真核对每例申请单与送检标本及其标志（联号条或其他写明患者姓 名、送检单位和送检日期等的标记）是否一致；对于送检的微小标本，必须认真核对送检容器内或滤纸上是否确有组织及其数量。发现疑问时，

6、应立即向送检方提出并在申请单上注明情况。 3认真检查标本的标志是否牢附于放置标本的容器上。 4认真查阅申请单的各项目是否填写清楚，包括：患者基本情况姓名、性别、年龄，送检单位（医院、科室）、床位、门诊号/ 住院号、送检日期、取材部位、标本数量等，患者临床情况病史（症状和体征） 、化验 /影象学检查结果、手术（包括内镜检查）所见、既往病理学检查情况（包括原病理号和诊断）和临床诊断等。 5在申请单上详细记录患者或患方有关人员的明确地址、邮编及电话号码，以便必要时进行联络，并有助于随访患者。 (三)验收标本人员不得对申请单中由临床医师填写的各项内容进行改动。 (四)下列情况的申请单和标本不予接收：

7、1申请单与相关标本未同时送达病理科； 2申请单中填写的内容与送检标本不符合； 3标本上无有关患者姓名、科室等标志； 4申请单内填写的字迹潦草不清； 5申请单中漏填重要项目； 6标本严重自溶、腐败、干涸等； 7标本过小，不能或难以制做切片； 8其他可能影响病理检查可行性和诊断准确性的情况。 病理科不能接收的申请单和标本一律当即退回，不予存放。 (五)临床医师采取的标本应尽快置放于盛有固定液（4% 中性甲醛，即 10%中性福尔马林）的容器内，固定液至少为标本体积的 5 倍。对于需作特殊项目检查（如微生物、电镜、免疫组织化学、分子生物学等）的标本，应按相关的技术要求进行固定或预处理。 (六)病理医师

8、只对病理科实际验收标本的病理诊断负责。 (七)病理科应建立与送检方交接申请单和标本的手续制度。具体交接方法由各医院病理科自行制订。 二、申请单和标本的编号、登记 (一 )病理科验收人员应在已验收的申请单上注明验收日期并及时、准确编号（病理号） ，并逐项录入活检标本登记簿或计算机内。严防病理号的错编、错登。 (二)标本的病理号可按年编序，或连续性（不分年度）编序。 (三 )同一病例同一次的申请单、活检标本登记簿（包括计算机录入）、放置标本的容器、组织的石蜡包埋块（简称蜡块）及其切片等的病理号必须完全一致。 (四)病理科应建立验收人员与组织取材人员之间申请单和标本的交接制度。具体交接方法由各医院病

9、理科自行制订。 (五)在病理科内移送标本时，必须确保安全，严防放置标本的容器倾覆、破损和标本的散乱、缺失等。 三、标本的预处理 标本验收人员对已验收的标本酌情更换适宜的容器，补充足量的固定液； 对于体积大的标本，值班取材的病理医师在不影响主要病灶定位的情况下，及时、规范地予以剖开，以便充分固定。 四、标本的巨检、组织学取材和记录 对于核验无误的标本，应按照下列程序进行操作：肉眼检查标本（巨检）；切取组织块（简2称取材）；将巨检和取材情况记录于活检记录单上（活检记录单印于活检申请单的背面） 。巨检和取材的技术操作参见第 3 章第四节。 巨检和取材时的注意事项： (一)巨检和取材必须由病理医师进行

10、，应配备人员负责记录。 (二)巨检和取材过程中，应严防污染工作人员和周围环境。 (三)标本一般应经适当固定后再行取材。已知具有传染性（例如结核病、病毒性肝炎等）的标本，应在不污染环境和或不扩散传染的原则下，经必要的初步巨检或切开后，立即置于盛有足量固定液的专用容器内，充分固定后再行常规巨检和取材。 (四)病理医师在对每例标本进行巨检和取材前，应与记录人员认真核对该例标本及其标志与申请单的相关内容是否一致。若对申请单填写的内容或和标本有疑问（例如患者姓名有误，标本内容、数量、病变特征与申请单填写的情况不符等），应暂行搁置，尽快与送检方联系，查明原因，确保无误后，再行巨检和取材。必要时，可邀请有关

11、临床医师共同检查标本和取材。对于有疑问的标本，在消除疑问前不得进行巨检和取材，应将有关标本连同其申请单一并暂时妥存。 (五)病理医师进行巨检和取材时，记录人员应根据病理申请单内容，向巨检医师报告患者的基本临床情况、手术所见、标本情况（采取部位、数量等）和送检医师的特殊要求等，并如实、清楚地将病理医师的口头描述记录于活检记录单上。必要时，应在活检记录单上（或另附纸）绘简图显示巨检所见和标示取材部位。取材者应核对记录内容。 (六)具有医学学术价值的标本可摄影存档，并酌情妥为保存。 (七)病理科宜积极推行巨检和取材的录音记录。每次巨检和取材结束后，应由专人立即对录音内容进行文字整理，记录于活检记录单

12、上（手录或用计算机录入、打印）。有关的录音资料应保存至病理诊断报告书发出后两周。 (八)细小标本取材时，可用伊红点染并用软薄纸妥善包裹。 (九)每例标本取材前、后，应用流水彻底清洗取材台面和所有相关器物，严防检材被无关组织或其他异物污染，严防细小检材被流水冲失。 (十)巨检和取材必须按照本规范的要求进行操作（参见第 3 章第四节）。对 于由不同部位或不同病变区域切取的 组织块，应在其病理号之后再加编次级号（例如： 1，2，3 ， ；A, ，B ，C ， 等） 。 (十一)巨检取材者和记录人员应相互配合、核查，确保所取组织块及其编号标签准确地置于用于脱水的容器（脱水盒等）内。 (十二) 标本巨检

13、和取材后剩余的组织器官应置入适当容器内，添加适量 4%中性甲醛并附有相关病理号和患者姓名等标志，然后按取材日期有序地妥为保存。取材剩余的标本一般保存至病理诊断报告书发出后两周。 (十三)病理医师在每批标本巨检和取材后，应与记录人员共同核对取材内 容，并在活检记录单取材工作单上签名和签署日期。 (十四)取材后剩余的病理标本属于污染源，应遵照有关规定处理。 (十五)巨检取材医师或记录人员与制片的技术人员认真办理交接手续。具体交接方法由各医院病理科自行制订。 五、组织切片制备的基本要求 (一)组织制片过程中，应确保切片号与蜡块号一致。 (二)制片工作一般应在取材后 2 个工作日内完成（不含需要脱钙、

14、脱脂等特殊处理的标本）。 (三) 制片完成后，技术人员应检查制片质量，并加贴标有本病理科病理号的标签。常规石蜡 -HE染色片的优良率应 95%， 优秀率不0.5cm) ，面积一般在 11.511.5 以内。切取组织块的形状，在充分包括肉眼病变的前提下尽量规则些（例如方形、矩形、三角形等）；由一个标本切取的多块组织的形状有所不同，便于蜡块与其相应切片的核对。 固定组织块的固定液量，一般应为组织块总体积的 510 倍以上。室内常温（ 25左右）下的固定时间为 324 小时；低温（4 ）下的固定时间应延长。固定组织块的容 器要大一些。组织块固定期间需要间断地轻摇或搅动固定液以利于固定液的渗入。 常用

15、固定液 1 4%中性甲醛（10% 中性福尔马林）固定液 甲醛（40%） 100 ml 无水磷酸氢二钠 6.5g 磷酸二氢钠 4.0g 蒸馏水 900ml 2乙醇甲醛（酒精福尔马林，AF ）固定液 甲醛（40% ） 100ml 95%乙醇 900ml 说明一般组织块经乙醇甲醛固定 12 小时后，即可移入 95%乙醇内脱水。 3Carnoy 固定液 无水乙醇 60ml 氯仿 30ml 冰醋酸 10ml 说明组织化学染色的常用固定液，组织经 Carnoy 液固定 12 小时后，即可移入无水乙醇中脱水。 4Zenker 固定液 17升汞 5.0g 重铬酸钾 2.5g 硫酸钠 1.0g 蒸馏水（加至）

16、100ml 说明配制本液时，先将升汞溶于蒸馏水中、加温至 4050溶解后，再加入重铬酸钾，最后加入硫酸钠，贮存待用。使用前加入 5ml 冰醋酸，混合。组织块需固定 1224 小时。切片染色前，需进行脱汞沉淀处理。 5Bouin 固定液 饱和苦味酸水溶液（约 1.22%） 75ml 甲醛（40% ） 25ml 冰醋酸 5ml 说明本液临用时配制。组织块置于 Bouin 液固定 1224 小时即可（小块组织只需固定数小时） 。经 Bouin 液固定的组织被苦味酸染成黄色，可用水洗涤 12 小时后进入乙醇脱水（兼脱色）。不必将组织中的黄色除净（残存于组织中的苦味酸无碍染色） 6过碘酸赖氨酸多聚甲醛固

17、定液（PLP） A 液：赖氨酸 1.827g 蒸馏水 50ml 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液(pH7.4) 50ml B 液：8% 多聚甲醛水溶液 100ml 说明本液临用时配制：取 A 液 3 份、 B 液 1 份，混合后，加入过碘酸钠，使液体终浓度为2%。组织块在 4下固定 3654 小时。本液对细胞结构和抗原性保存较好。 7B5 （醋酸钠升汞甲醛）固定液 无水醋酸钠 1.25g 升汞 6.0g 蒸馏水 90ml 说明将以上物质混合、溶解，使用前加入甲醛 10ml。本液多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。如不加甲醛称为 B4 固定液（蒸馏水为 100 ml）。 8丙酮固定液 冷

18、丙酮（4 ）固定液用于酶组织化学染色。细胞标本的免疫组化染色也常用冷丙酮固定 10 分钟。 二、常规石蜡包埋组织切片（常规切片）的制备 组织块依序进行：水洗，脱水，透明，浸蜡，包埋和切片。 组织切片制备及其 HE 染色过程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡等为 易燃、有毒物，必须专人管理，2m 以内不得有明火，局部环境应有良好的通风和消防设施。 常规切片的手工操作（步骤次序和各步骤的持续时间） 1水洗：用流水冲洗已经固定的组织块 30min。 2脱水（常温下） （1 ）乙醇甲醛（AF ）液固定 60120min （2 ）80%乙醇 60120min （3 ）95%乙醇 60120min （4 ）

19、95%乙醇 60120min （5 ）无水乙醇 60120min （6 ）无水乙醇 60120min （7 ）无水乙醇 60min 18注意事项未经充分固定的组织不得进入脱水程序。用于脱水的试剂容积应为组织块总体积的 510 倍以上。自低浓度乙醇向高浓度乙醇逐级移进脱水。脱水试剂应及时过滤、更换（ 500ml 乙醇可用于 500 个组织块脱水；加入硫酸铜的无水乙醇变蓝时，提示需要更换） 。较大组织块的脱水时间长于较小者，应将两者分开进行脱水。组织置于无水乙醇内的时间不宜过长（以免硬化）。丙酮脱水性能强，会使组织块过缩、硬脆，不宜用以替代无水乙醇。 3透明 （1 ）二甲苯 20min （2 ）二

20、甲苯 20min （3 ）二甲苯 20min 注意事项二甲苯的容积应为组织块总体积的 5 10 倍以上。组织块在二甲苯中透明的时间不宜过长（以防组织硬、脆），并依不同种类组织及其大小而异；组织呈现棕黄或暗红色透明即可。二甲苯应及时过滤、更换。组织经二甲苯适度处理后不显透明时，常提示该组织的固定或脱水不充分，应查找原因并妥善处理。 4浸蜡 （1 ）石蜡（ 4550） 60min （2 ）石蜡（ 5658） 60min （3 ）石蜡（ 5658） 60min 注意事项熔化石蜡必须有专人负责，必须在熔蜡箱内或水浴中（70 ）进行，不得用明火加温。熔蜡的容积应为组织块总体积的 5 10 倍以上。组织块

21、经二甲苯适度透明后方可转入浸蜡过程，应尽可能减少将透明后组织块表面的二甲苯带入熔蜡中。浸蜡时间适宜，过短时浸蜡不充分（组织过软），过长时组织硬脆。熔蜡应及时过滤、更换。 5包埋 （1 ）先将熔化的石蜡倾入包埋模具中，再用加热的弯曲钝头镊子轻轻夹取已经过浸蜡的组织块，使组织块的最大面或被特别指定处的组织面向下埋入熔蜡中；应将组织块平正地置放于包埋模具底面的中央处；包埋于同一蜡块内的多块细小组织应彼此靠近并位于同一平面上；腔壁、皮肤和黏膜组织必须垂直包埋（立埋）。 （2 ）将与组织块相关的病理号小条置入包埋模具内熔蜡的一侧。 （3 ）待包埋模具内的熔蜡表面凝固后，即将模具移入冷水中加速凝固。 （

22、4）从包埋模具中取出凝固的包埋蜡块（简称蜡快），用刀片去除组织块周围的过多石蜡（组织块周围保留 12mm 石蜡为宜）。将包埋蜡块修整成为规则的正方形或长方形。 （ 5）将病理号小条牢固地烙贴在蜡块一侧（编号应清晰可见）。 （6 ）把修整好的蜡块烙贴在支持器上，以备切片。 （7 ）使用包埋机的方法按有关厂商的说明书操作。 （8 ）注意事项 应将组织块严格分件包埋。包埋时一定要首先认真核对组织块的病理号（包括亚号） 、块数和取材医师对包埋面的要求，准确地包入相应的病理号小条。发生包埋差错时，必须立即与取材医师和病理科当班负责人取得联系，及时处置。 必须严防各种异物污染，勿将无关组织（包括缝线、纸屑

23、或其他异物（尤其是硬质异物）埋入蜡块内。 包埋过程要操作迅速，以免组织块尚未埋妥前熔蜡凝固。 包埋用的熔蜡应纯净，熔点适宜。浸蜡用软蜡（熔点为 4550），浸蜡、和包埋用蜡均用硬蜡（熔点为 5658）。 包埋用熔蜡使用前应将先静置沉淀、过滤。 熔蜡时不得使用明火，以防燃烧。包埋用熔蜡的温度应30 。乙醇、二甲苯和熔蜡的容积，要大于组织块总体积的 510 倍以上，并应经常过滤，保持清洁；应经常检查试剂的浓度，及时更新。对于多量组织块，可按其大小分批进行处理；小块组织可适当缩短处理时间。 三、快速石蜡包埋组织切片的制备 煮沸固定切片法 1固定：切取大小适宜（厚度1:30 。 3脱钙过程中应不时摇动

24、，多次更换脱钙液。 4脱钙时间不可过长。 5微波处理可加速脱钙过程。 6脱钙后的组织必须用流水充分冲洗。 7用于包埋的石蜡硬度适中（不要过软或过硬）。 六、苏木素伊红（HE ）染色 HE 染色是应用最广泛的组织病理学常规染色技术。 染色程序 1石蜡切片 HE 染色（常规 HE 染色） （1 ）二甲苯 510min （2 ）二甲苯 510min （3 ）无水乙醇 13min （4 ）无水乙醇 13min （5 ）95%乙醇 13min （6 ）95%乙醇 13min （7 ）80%乙醇 1min （8 ）蒸馏水 1min （9 ）苏木素液染色 5 10min （10）流水洗去苏木素液 1min

25、（11） 1%盐酸 -乙醇 1 3s （12）稍水洗 12s （13）返蓝（用温水或 1%氨水等） 5 10s （14）流水冲洗 12min （15）蒸馏水洗 12min （16）0.5% 伊红液染色 1 3min （17）蒸馏水稍洗 12s （18）80% 乙醇 1 2s 23（19）95% 乙醇 2 3min （20）95% 乙醇 2 3min （21）无水乙醇 35min （22）无水乙醇 35min （23）石炭酸 -二甲苯 3 5min （24）二甲苯 35min （25）二甲苯 35min （26）二甲苯 35min （27）中性树胶封固 注：（12 ）和（ 13）项可省去，但（1

26、4 ）的冲水时间需延长至 1015min （细胞核显示更清晰）。 （23）项可用无水乙醇代替；北方地区可省略。 2冰冻切片 HE 染色 （1 ）冰冻切片固定 10 30s （2 ）稍水洗 1 2s （3 ）苏木素液染色（60 ） 3060s （4 ）流水洗去苏木素液 5 10s （5 ）1%盐酸- 乙醇 1 3s （6 ）稍水洗 1 2min （7 ）返蓝（用温水或 1%氨水等） 5 10s （8 ）流水冲洗 1530s （9 ）0.5% 伊红液染色 1 2min （10）蒸馏水稍洗 12min （11）80% 乙醇 1 2min （12）95% 乙醇 1 2min （13）无水乙醇 12mi

27、n （14）无水乙醇 12min （15）石炭酸 -二甲苯 2 3min （16）二甲苯 23min （17）二甲苯 23min （18 ）中性树胶封固 注：（7 ）和（ 8）项可省去，但（ 9）的冲水时间需延长至 1015min （细胞核显示更清晰）。 （15）项可用无水乙醇代替；北方地区可省略。 染色结果：细胞核呈蓝色，细胞浆、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色。 染色注意事项 1切片染色前，应彻底脱蜡。 2用含有升汞液体固定的组织，其切片染色前应先脱去汞盐： （1 ）石蜡切片脱蜡至水洗 （2 ）Lugol 液 20min （3 ）流水冲洗 5min （4

28、 ）95%乙醇 10min （5 ）水洗 1min （6 ）5%次亚硫酸钠水溶液 5min 24（7 ）流水冲洗 5min （8 ）显微镜观察除汞满意后，转入 HE 染色 3脱除福尔马林色素（必要时）： （1 ）石蜡切片脱蜡至水洗 （2 ）1%NaOH(1ml)与 80%乙醇（99ml ）混合液 10min （3 ）流水冲洗 5min （4 ）转入 HE 染色 4严格执行 HE 染色流程，用显微镜控制细胞核的苏木素染色质量。HE 染片应着色鲜艳，红、蓝分明，对比清晰。 5载玻片自二甲苯中取出后，应立即用洁净、光亮的盖玻片和稠度适宜的中性树胶湿封载玻片。封盖处内无气泡，外无溢胶。封片时必须进行操

29、作人员和局部环境的二甲苯污染防护。不应将组织切片烤干或风干后再行封片。 6必须在载玻片的一端牢贴标签。标签上应印有病理科所在的医院名称。标签上应清楚显示有关的病理号及其亚号；标签上的病理号应准确无误，无涂改。 7制片完成后，技术人员应对切片与其相应的病理学检查记录单或取材工作记录单认真进行核对；确认无误后，将制备好的切片连同相关的活检申请单 /活检记录单以及取材工作单等一并移交给有关的病理医师；交接双方经核对无误后，办理移交签字手续。 8石蜡切片-HE 染色的优良率（甲、乙级切片所占的比率）应 85%。石蜡切片 -HE 染色质量的基本标准列于附表。 9制片工作一般应在取材后 2 个工作日内完成

30、（不含进行脱钙、脱脂等需要特殊处理的标本）。 10制片过程出现意外情况时，技术室人员应及时向病理医师和科主任报告，设法予以补救。 附表 常规石蜡包埋 -HE 染色切片质量的基本标准 优 质 标 准 满 分 质 量 缺 陷 减 分 组织切面完整， 组织稍不完整：减 13 分 不完整：减 410 分 内镜咬检、穿刺标本切面数 10 未达到规定面数：减 5 分 切片薄 (3 5m)，厚薄均匀 10 切片厚(细胞重叠)，影响诊断：减 610 分 厚薄不均匀：减 35 分 切片无刀痕、裂隙、颤痕 10 有刀痕、裂隙、颤痕，尚不影响诊断：减 2 分 有刀痕、裂隙、颤痕，影响诊断：减 5 分 切片平坦，无皱

31、褶、折叠 10 有皱褶或折叠，尚不影响诊断：各减 2 分 有皱褶折或折叠，影响诊断：各减 5 分 切片无污染 10 有污染：减 10 分 无气泡（切片与载玻片间 / 10 有气泡：减 3 分 盖片与切片、载玻片间）， 胶液外溢：减 3 分 25盖片周围无胶液外溢 透明度好 10 透明度差：减 13 分 组织结构模糊：减 57 分 细胞核与细胞浆染色对比清晰 10 细胞核着色灰淡或过蓝：减 5 分 红(细胞浆) 与蓝( 细胞核) 对比不清晰：减 5 分 切片无松散，裱贴位置适当 10 切片松散：减 5 分 切片裱贴位置不当：减 5 分 切片整洁， 切片不整洁：减 3 分 标签端正粘牢，编号清晰

32、10 标签粘贴不牢：减 3 分 编号不清晰：减 4 分 合 计 100 切片质量分级标准： 甲级片： 90 分 （优） 乙级片：7589 分（良） 丙级片：6074 分（基本合格） 丁级片： 59 分 （不合格） HE 染色试剂的配制 1苏木素染液 （1 ）Harri 苏木素染液 苏木素 1g 无水乙醇 10ml 硫酸铝钾 20g 蒸馏水 200ml 氧化汞 0.5g 冰醋酸 8ml 先用无水乙醇溶解苏木素，用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾；然后将该两液合并煮沸，加入氧化汞，继续加热和搅拌溶液至深紫色，随即用冰水冷却，恢复至室温后过滤备用。使用前加入冰醋酸并混匀、过滤。 （2 ）Gill 改良苏木素液

33、 苏木素 2g 无水乙醇 250ml 硫酸铝钾 17g 蒸馏水 750ml 碘酸钠 0.2g 冰醋酸 20ml 先用无水乙醇溶解苏木素，用蒸馏水溶解硫酸铝钾；然后将该两液混合，再依次加入碘酸钠和冰醋酸。使用前过滤。 （3 ）Mayer 改良苏木素液 A 液：苏木素 2g 26无水乙醇 40ml B 液：硫酸铝钾 100g 蒸馏水 600ml 将苏木素溶于无水乙醇中（A 液） ；稍加热，使硫酸铝钾溶于蒸馏水中（B 液） 。将 A 液与 B液混合后煮沸 2min，再用蒸馏水补足至 600 ml，加入 400mg 碘化钠充分混匀。染液呈紫红色。 2. 盐酸乙醇分化液 浓盐酸 1 ml 70%乙醇 9

34、9 ml 3伊红液 （1 ）0.25 0.5% 伊红 Y 水溶液 伊红 Y 0.250.5 g 蒸馏水 100 ml 冰醋酸 1 滴 （2 ）0.5%伊红 Y-氯化钙水溶液 伊红 Y 0.5 g 蒸馏水 100 ml 无水氯化钙 0.5 g （3 ）0.25 0.5% 伊红 Y-乙醇溶液。 伊红 Y 0.250.5 g 80%乙醇 100 ml 4石炭酸- 二甲苯混合液 石炭酸 1 份 二甲苯 3 份 第二节 细胞学诊断检材的制备技术 一、细胞涂片、组织印片和压片的制备 （一）涂片质量的基本要求 1将检材涂布于载玻片的右（或左）2/3 处，另 1/3 部位粘贴标签。 2单向涂布检材，避免细胞变

35、形。 3均匀涂布检材，涂片厚薄适当。 4红细胞过多的涂片，可酌情进行溶解红细胞处理。 （二）涂片方法 1涂抹法：用棉签或针头将标本单向、均匀地涂抹于载玻片上。 2拉片法：将一滴检材置于一张载玻片上，再用另一张载玻片叠加其 上并予轻压，再将该两张载玻片朝反向拉动，从而获得两张涂片。 3推片法：将一滴检液置于载玻片的右端，再用另一张窄边光滑的载 玻片作为推片，并以与滴液载玻片成 40夹角、自右向左匀力推动检液，形成涂片。 （三）痰涂片的制作 1送检的痰液应是由肺内咳出，最好是清晨空腹时自肺内深咳出的痰液。 2核查无误的收验痰液，应立即制作涂片（通常为 23 张） 。 3用细签或无钩镊子挑取痰液置于

36、载玻片上，并左右往复薄涂，随即投入固定液中。 4痰液中呈现下列性状的成分可能 含有癌细胞，应注意挑取制作涂 片：血丝；灰白色痰丝（形如白色细线，微细螺旋状，牵引时可伸长）；透明痰液（可拉成较长细丝）。及时在细胞学检查申请单上记录痰液性状 5检查痰液中的肿瘤细胞，一般应连续送检 3 次。 27（四）黏膜、皮肤表面刮取（刷取、拉取）物和分泌物的涂片的制作 1阴道排出物、子宫颈刮取物涂片：通常由妇产科医师将已制作、固定后的涂片送交病理科检查。注意由子宫颈外口上皮移行带刮取细胞涂片 2支气管镜、胃镜等内腔镜的黏膜刷取物涂片（黏膜刷片）：刷片通常由内腔镜医师制作、固定后送交病理科检查。 3食管、胃拉网涂

37、片：由食管拉出的套网气囊适量放气后，将气囊套网在载玻片滚动涂片，尤应将套囊上血丝、灰白色物制作涂片；涂片通常由有关临床医师将已制作、固定后的刷片送交病理科检查。套网中的小块组织可用来制作石蜡包埋切片。 4眼、耳、鼻、咽、口腔、皮肤等处病变（溃疡性病变等）的分泌物涂片。 （五）液体涂片的制作 液体标本（检材）包括乳头溢液、胸水、腹水、尿液、胃液、脑脊液、穿 刺液、冲洗液、灌注液等。除乳头溢液外，其他液体检材一般均应先行离心（2000r/min， 1020min）后，取其沉淀物制作涂片；液体检材也可用细胞涂片离心机（cytospin ）直接制作细胞涂片。制作好的涂片应立即固定和染色。及时在细胞学检

38、查申请单上记录液体标本的性状和数量 液体标本的离心沉淀物较多时，将制作涂片后剩余的沉淀物固定于 4中性甲醛中 1h，然后用檫镜纸或绸布将其包裹，制作石蜡包埋切片。 1乳头溢液：直接滴于载玻片上制作涂片。 （1 ）患者乳腺触及肿物时：用手指自肿物远方沿乳腺导管引流方向轻力按 模挤压，获取溢液，宜取中段溢液和血性溢液涂片。 （2 ）患者乳腺未触及肿物时：可自乳晕周围向乳腺外周轻力按模挤压，获取溢液。 2胸水和腹水 （1 ）由患者体内抽取的胸水或腹水应尽快送交病理科验收，检液量以 200500ml 为宜。因故（例如远途）延时送达时，需在标本中加入 40%的甲醛（加入量为送检胸水、腹水量的 1/5），

39、或加入等量的 50乙醇生理盐水。 （2 ）胸水、腹水的离心：采取容器底部的液体 10ml（包括可能存在的沉淀物），移入离心管内进行离心。 （3 ）离心后，倾去全部上清液，将离心管底部含有沉淀物的液体摇匀并用吸管吸出适量，滴注于载玻片上，制作涂片。 3尿液 （1 ）制作方法同胸、腹水。 （2 ）尿液含有胶状物时，应先将其除去。清除方法：用 0.5ml/L 氢氧化钠调节尿液 Ph 至 6.0；离心后，倾去上清液，再向沉淀物中加入 95%乙醇 510ml L （固定细胞） ，静置 5min 后加入蒸馏水并轻摇（溶去胶状物）；再次离心后，取沉淀物制作涂片。检查尿液中的肿瘤细胞，一般应连续送检 3 次。

40、 4胃液、胃冲洗液：制作方法同胸、腹水。 5脑脊液 （1 ）制作方法同胸、腹水。 （2 ）脑脊液内细胞一般较少，可用微孔滤膜过滤法、沉淀法或纤维捕捉法收集细胞，制作涂片。 6冲洗液、灌洗液、穿刺液涂片的制作：参见上述的胸水、腹水项。 二、肿物细针穿刺物涂片的制备 （一）实施细针穿刺术前的准备工作 1实施细针穿刺术的病理医师应先了解患者临床情况，向患者和/ 或患者授权人说明实施穿刺术的意义、局限性和其他相关问题等，取得患者和/ 或患方的知情和理解，并签署由各医院制订的28申请实施细针穿刺术细胞病理学诊断患方知情同意书。 2合格的手术操作环境。 3必备的适用手术器械和其他相关设施。 （二）肿物穿刺

41、术的操作要点： 1确认肿物部位并估计其大小、与皮表距离和质地（实囊性、硬度等），以指导穿刺的方向、深度和用力程度。 2必须严格实行无菌操作。 3根据肿物大小及其血供情况选择适用型号的穿刺用针头。穿刺用针头的外径为 0.60.9mm，安置在 2ml 或 10ml 的一次性空注射器上。 4针吸法穿刺术操作要点 （1 ）进行穿刺前，先将安装了穿刺用针头的空注射器管芯外拉 2cm；然后，用手固定肿物，将安装在空注射器上的穿刺用针头刺入肿物（注射器内无空气）。 （2 ）迅速上下提插注射器管芯 1020 次（其间变换针头方向 3 4 次），遂使肿物不同部位的多较内容吸进入针头和注射器内。 （ 3）将注射器

42、与针头分离（管内负压因而解除）；随后，再将该注射器与仍插于肿物内的针头相接，拔出针头，穿刺结束。 （4 ）迅速推动注射器的管芯，尽快地将位于穿刺针头内的少量吸出物排射在 23 张清洁的载玻片上，进行涂片。 5涂片方法：用针头将载玻片上的吸出物轻轻均匀拨开，或用推片法朝一个方向展开（不可双向往返推移）。 6吸出物过少时，可用向离心管内冲洗穿刺针头；再将冲洗液离心，然后取其沉淀物涂片参见上述一（五）项“液体涂片的制作” 。 7吸出物较多时，可适量 50乙醇生理盐水液将涂片后注射器和针头内剩余的吸出物冲洗至离心管中，离心后，取其沉淀物制作常规石蜡包埋切片。 8吸出物中含有细小组织块时，应将其制作常规

43、石蜡包埋切片。 9内脏肿物穿刺时，必须在影象学检查的引导下用较长细针进行穿刺。 10穿刺操作完成后，即在细胞病理学检查单上书写穿刺记录。 三、组织印片、压片的制备 （一） 组织印片： 1用锋利刀片剖开刚切取的新鲜肿瘤组织或淋巴结等，然后用清洁载玻片轻压于组织剖面处，将组织表面的细胞成分印在玻片上。用稍微加温的载玻片制备印片时，可印得较多细胞。 2制作淋巴结印片前，应先用滤纸吸去淋巴结切面上的血液、组织液。 （二）压片： 1选取微小薄片组织平铺于一张载玻片上，再用另一张载玻片叠加其上并予轻压。 2脑组织质软，易于制作压片；稍硬的组织需切成细碎薄片制作压片。 四、涂片的固定 （一）用于 HE 染色

44、和巴氏染色的涂片必须湿固定，即涂片后立即进行固定。乳头溢液涂片和液体标本离心沉淀物涂片，应待涂膜潮干（即周膜稍干而其中央区域未干）时进行固定。用于瑞氏染色、 May-Grnwald 姬姆萨染色和免疫细胞化学染色的涂片，必须干固定，即待涂片稍干后再进行固定。 （二）固定液 1乙醇冰醋酸液：95% 乙醇冰醋酸991 。常用。 2乙醇乙醚液：95% 乙醇 49.5ml, 乙醚 49.5ml, 冰醋酸 1ml。较常用。 3甲醇：滴加在干燥涂片上，用于瑞氏染色、 May-Grnwald 姬姆萨染色 29和免疫细胞化学染色。 4丙酮：适用于酶类染色。 5Carnoy 液：由无水乙醇、氯仿、冰醋酸按 6:3

45、:1 比例混成，适用于显 示核酸、糖原、黏液染色。涂片在 Carnoy 液固定 35min 后，应移入 95%乙醇中继续固定。 6对于液体标本的离心沉淀物、食管拉网获取的小块组织或吸出物中的细小组织块等，固定于4%中性甲醛液中 1h，然后制作常规石蜡包埋切片。 （三）固定方法 1浸入法： （1 ）将稍为干燥（不能完全干燥）的涂片直接浸泡于固定液内至少 15 30min。 （2 ）因细胞容易脱落，宜以一个盛有固定液的容器只固定一例标本的涂片；一个容器固定多例涂片时，有可能造成的肿瘤细胞交叉污染。 （3 ）必要时可将标本涂在硅化载玻片上，以防脱落。 （4 ）固定液重复使用时，应先用滤纸过滤。 （5 ）95%乙醇固定液多次重复使用时，需测定其浓度比重，乙醇浓度低于 90%时应予弃用。 2滴加法：将固定液滴加于平放的干燥涂片上，应避免因固定液挥发造成沉淀。 （四）固定后未染色涂片的保存或邮寄：涂片固定 15min 后取出，立即滴加数滴甘油于涂膜上。对该涂片进行染色前，应先将其置于 95%乙醇中溶去甘油。 五、涂片的染色 最常用于细胞病理学涂片检查的是苏木素伊红（HE ）染色和巴氏