载体构建基本步骤1. 选定目的基因，设计特异性引物，利用高保真酶进行 PCR 扩增2. 对扩增结果进行琼脂糖凝胶电泳检测（1%）,若检测结果正确，测序结果之后进行胶回收目的片段3. 通过平末端连接将目的基因连接到克隆载体（PMD-18T）4. 转化 DH5，根据载体抗性涂板 37 度过夜培养5. 挑取阳性克隆进行 PCR 验证，PCR 验证后挑取阳性克隆进行大摇并提取质粒、双酶切，同时取 500 微升菌液送测序6. 测序结果正确后对提取的质粒进行双酶切回收目的片段7. 对表达载体用同样的限制性内切酶双酶切之后回收大片段8. 将目的片段与表达载体的大片段用 T4DNA 连接酶连接后转化DH5，涂板 37 度过夜9. 挑取阳性克隆大摇酶切验证，若结果正确，则载体构建完毕
