1、新一代测序平台文库制备技术简介Ion Torrent PGMIon Torrent PGM基于半导体芯片的高通量测序技术Ion PGM技术原理 使用了一种布满小孔的高密度半导体芯片，一个小孔就是一个测序反应池 当 DNA聚合酶把核苷酸聚合到延伸中的DNA链上时，会释放出一个氢离子，反应池中的 pH发生改变，位于池下的离子感受器感 受到信号，把化学信号直接转化为数字信号，从而读出 DNA序列Ion PGM技术原理Ion PGM技术特点 简单 ：基于半导体技术测序原理，不用荧光、化学发光和酶级联反应；消耗样本少； 快速 ：从文库构建到数据产出只需 2天，上机测序只需 2 3.5小时； 灵活性 ：可
2、满足不同通量的测序需求： 314 TMChip（ 10Mb/run）， 316 TMChip（100Mb/run）， 318 TMChip（ 1000Mb/run，今年年底或明年年初推出）； 准确性 ： 99.97%Ion PGM应用特点 Ion PGM的芯片决定了待测样本的通量，通常根据不同的需要选择不同的芯片，最高通量在 1G左右。因此， PGM在体细胞突变测序、 De novo测序、小 RNA和基因表达研究、 ChIP-seq、农业 SNP应用等方面有着不少的应用范围。Ion PGM技术优势 不需要激发光、 CCD成像仪或任何的荧光标记； 能直接并快速“读”出 DNA序列； 是小规模测序
3、项目的最佳选择。Ion PGM工作流程Ion PGM文库制备 扩增子测序 ： Ion Torrent被大量用于扩增子测序。用户可以针对目标基因序列，扩增出大片段 PCR产物，等量混合后，进行随机断裂，进行常规 DNA文库构建。 FFPE样品文库构建 ： RNA gene expression profiling 血清游离 DNA文库构建 ： Pico DNA library construction Gnomegen DNA建库在 Ion PGM扩增子测序方面的应用 准备流程 ： gDNA large PCR products normalization mix fragmentation 建
4、库流程 ： DNA Seq work flow（和常规DNA文库构建相同） 测序流程 ：上机 测序 分析Gnomegen RNA Profiling建库在Ion PGM平台上的应用 应用实例：-人类及其它复杂程度高的转录组表达谱分析；- FFPE等 RNA高度降解样品分析。 特点：- 单管反应，一天工作流程；- 起始总 RNA的量只需 1ng； 优势：- 相同转录水平下数据量需求少；- 相对于全转录组信息来说投入资金少；- 相对于微阵列分析技术来说覆盖更广。Gnomegen RNA Profiling建库流程（表达谱测序）5 Adaptor ligationReverse Transcript
5、ionPCRAAAFragmented RNA5 AdaptorTTTTTT RT PrimerForward PrimerReverse Primer with barcodeGnomegen痕量 DNA建库在 MiSeq平台上的应用特点 应用实例：-血清游离 DNA测序；-染色体免疫共沉淀测序（ ChIP-seq）。 特点：- 微量的起始 DNA；- 一天实验流程；- 适合自动化操作。 应用：- 染色体免疫共沉淀 DNA建库；- 单细胞 DNA建库；- 血清游离 DNA建库。Gnomegen Pico DNA建库流程Forward PrimerReverse PrimerAA AA AATAATEnd Repair and dA TailingLigase AdaptorsPCRFragmented DNAGnome Ligation Enhancer Ion PGM应用领域 扩增子测序 表达谱测序 Pico DNA测序 靶向重测序 基因组 /全外显子验证Ion PGM应用举例Thank you very much for your attention!如果你有兴趣进一步了解和 Ion PGM相关的产品和技术，请联系我们：电话： 0512-63262768； 0512-63262698邮箱： 或登录会员了解更多 : http:/
