1、 Elisa 溶液配制或封闭液（1 % BSA）：每 100 mL 的 PBST 中加入 1 g 牛血清白蛋白（BSA） ，4保存首先摸索 PCV2 抗原包被的最佳浓度，将 PCV2 抗原按照1/50、1/100、1/200、1/400、1/800、1/1600 稀释，一抗用强阳性血清、弱阳性血清、阴性血清按照 1/100 稀释，于 37 孵育 1.5 h，二抗用羊抗猪的酶标二抗，于 37 孵育 1 h，加入 TMB 显色，测其 OD450 nm 值，选择阳性血清 OD450 nm 大于 0.8，而阴性血清小于 0.1 的临界稀释度即为抗原的最佳包被浓度。然后按照最佳的浓度包被 96 孔酶标板
2、，每孔加入 100 L，于 4包被过夜；次日用 PBST（0.15M PBS 0.05% Tween 20）洗涤 3 次，每次 5 min 洗涤；用PBST 溶解的 1% BSA 于 37湿盒中封闭 1-2 h，洗涤方法同上一步骤；然后向孔中加入起始浓度为 300 g/L，按照1/5、1/10、1/20、1/40、1/80、1/160、1/320、1/640 八个稀释梯度的 VHHs，置于 37 湿盒中孵育 2 h，此为反应的一抗；用 PBST 洗涤 5 次，每次 5 min；加入 100 L 抗 His 标签的 HRP 标记的鼠源单抗（1:2000 稀释）作为反应的二抗，置于 37湿盒中孵育 1 h；再用 PBST 洗涤 5 次，每次 5 min；最后每孔加入100 L TMB 显色液，室温避光显色 10-15 min；显色结束后每孔加入 50 L 2 mol/L H2SO4 终止显色，在 A450 nm 波长处读数。同时用武汉科前生物有限公司提供的阳性血清（按照上述稀释梯度进行稀释）作为本实验的阳性对照，分别用 BSA 和未接种病毒的 PD3 细胞裂解液包被酶标板，作为本实验的阴性对照1 和 2。阳性对照组二抗反应时加入 100 L 抗猪-HRP 标记的酶标二抗，其余操作方法同上。
