1、 GLDH 检测方法 (Glutamate Dehydrogenase) SDZ500140 1. 目的 本程序是为了建立谷氨酸脱氢酶（Glutamate Dehydrogenase）的活性检测方法，适用 于 GLDH 成品的活性检测。 2. 检测 2.1原理 -Ketoglutarate + NH 3+ NADH + H +L-Glutamate+ NAD + +H 2 O NADH的消耗可以通过 340nm 的光吸收进行检测。 2.2试剂： A 0.1 M Tris-HCl 缓冲液, pH 8.3 B 1.5M NH 4 Cl溶液 C 0.225M -酮戊二酸溶液(pH 7.0-9.0)
2、D 7.5mM NADH 溶液 E 酶稀释液: 0.1 M Tris-HCl 缓冲液, pH 8.3 试剂的配制方法详见各试剂配制记录,配制人员需完整填写配制记录。 3 操作规程： 3.1仪器参数设定 若仪器中无已保存参数，按以下参数设定。若已有相关参数，调取后确认。 检测方法：动力学扫描 测量波长：340nm 测量时间：180s 延迟时间：60s 积分时间：120s 系数/因子：6.776 测量温度：301 3.2 样品准备 若待测样品为固体，可以按 10mg 样品/1000ul 超纯水比例溶解。溶解后于 2-8度放 置 30min。 3.3 检测方法 3.3.1 在石英比色皿中加入 2.5
3、ml 试剂 A, 200ul试剂 B,100ul 试剂 C, 100ul D于 30度孵育 2min。 3.3.2 加入 50ul 样品后, 温和混匀后开始测定。 3.3.3 测定结束后，记录相应数值：起始读数、A/min test、活性值（U/ml）。 3.3.4 活性值（U/ml）范围为 0.1-0.3U/ml，若超出范围，待测样品需经试剂 D稀释后再 次进行检测。 3.3.5测定样品前需检测空白反应值，即其他操作不变，用 500ul E代替样品加入比色皿后 进行反应,测定A/min blank。 3.3.6计算公式 活性(U/ml) =(A/min test-A/min blank)6.776df （稀释倍数）
