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谷氨酸脱氢酶的检测方法.pdf

1、 GLDH 检测方法 (Glutamate Dehydrogenase) SDZ500140 1. 目的 本程序是为了建立谷氨酸脱氢酶(Glutamate Dehydrogenase)的活性检测方法,适用 于 GLDH 成品的活性检测。 2. 检测 2.1原理 -Ketoglutarate + NH 3+ NADH + H +L-Glutamate+ NAD + +H 2 O NADH的消耗可以通过 340nm 的光吸收进行检测。 2.2试剂: A 0.1 M Tris-HCl 缓冲液, pH 8.3 B 1.5M NH 4 Cl溶液 C 0.225M -酮戊二酸溶液(pH 7.0-9.0)

2、D 7.5mM NADH 溶液 E 酶稀释液: 0.1 M Tris-HCl 缓冲液, pH 8.3 试剂的配制方法详见各试剂配制记录,配制人员需完整填写配制记录。 3 操作规程: 3.1仪器参数设定 若仪器中无已保存参数,按以下参数设定。若已有相关参数,调取后确认。 检测方法:动力学扫描 测量波长:340nm 测量时间:180s 延迟时间:60s 积分时间:120s 系数/因子:6.776 测量温度:301 3.2 样品准备 若待测样品为固体,可以按 10mg 样品/1000ul 超纯水比例溶解。溶解后于 2-8度放 置 30min。 3.3 检测方法 3.3.1 在石英比色皿中加入 2.5

3、ml 试剂 A, 200ul试剂 B,100ul 试剂 C, 100ul D于 30度孵育 2min。 3.3.2 加入 50ul 样品后, 温和混匀后开始测定。 3.3.3 测定结束后,记录相应数值:起始读数、A/min test、活性值(U/ml)。 3.3.4 活性值(U/ml)范围为 0.1-0.3U/ml,若超出范围,待测样品需经试剂 D稀释后再 次进行检测。 3.3.5测定样品前需检测空白反应值,即其他操作不变,用 500ul E代替样品加入比色皿后 进行反应,测定A/min blank。 3.3.6计算公式 活性(U/ml) =(A/min test-A/min blank)6.776df (稀释倍数)

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