1、细菌的形态结构及观察,一、细菌的形态结构二、细菌的观察方法三、显微镜的使用方法,第一节 细菌的大小与形态 1.大小：个体微小，通常以微米 （m）为测量单位2.基本形态：有三种:球状、杆状、 螺旋状，分别称为球菌、杆菌和螺形菌,球菌,螺型菌,杆菌,细胞壁（cell wall）: 细胞壁是位于细菌细胞膜外的一层坚韧而有弹性的膜状结构。 功能 （1）维持细菌固有外形，保护细菌不受外界低渗环境的破坏； （2）与细胞膜共同完成胞内外的物质交换；（3）决定细菌的抗原性。 (4)某些成分与致病性有关,菌毛,鞭毛,核质DNA,荚膜,细胞壁,细胞膜,核糖体,胞质颗粒,细胞质,中介体,细菌的结构,细菌细胞壁所特有
2、成分 由多糖骨架、四肽侧链和交联 桥3部分组成,磷壁酸（techoic acid）革兰阳性菌特有成分,是由核糖醇或甘油残基经磷酸二酯键相互连接而成的多聚物。 作用： (1)调节离子通过粘肽层，有保存和输送镁离子的作用； (2)为噬菌体的特异性受体； (3)与细菌的致病性有关； (4)具有抗原性可用于细菌的分型。,外膜 G-细菌在肽聚糖层外面还有三层结构,脂蛋白：由脂质和蛋白质构成 外膜 脂质双层类脂A 内毒素的毒性部分,无特异性脂多糖 核心多糖 有属或组的特异性寡糖重复单位 由3-5个单糖组成，有种或型的特异性 脂质双层 是G-菌细胞壁的主要结构，占细胞壁干重的80%，结构类似细胞膜，为液态的
3、脂质双层，又称外膜,革兰阳性菌及革兰阴性菌细胞壁结构及意义的比较,细胞壁 结构 革兰阳性菌 革兰阴性菌 细胞壁强度 较坚硬 较疏松 肽聚糖层数 可达50层 12层 肽聚糖含量 5080% 520% 磷壁酸 有 无 外膜 无 有 五肽交联桥 有（三维结构） 无（二维结构） 革兰染色 阳性（紫色） 阴性（红色） 青霉素和溶菌酶 敏感 不敏感,2 细胞膜(cell membrane) 细胞壁与细胞质之间半渗透性的生物膜脂类双层，镶有蛋白质功能：渗透和运输、生物合成（肽聚糖、磷壁酸、脂多糖等）、呼吸作用、参与细菌分裂。另外，细胞膜是鞭毛基体的着生部位和鞭毛旋转的供能部位。,3 细胞质 是细菌进行新陈代
4、谢的主要场所。含有以下颗粒： 核糖体(ribosome)：合成蛋白质的 场所 胞浆颗粒(cytoplasmic granules):储藏营养。异染颗粒：染成与细菌其他部分不同的颜色，如：白喉杆菌-鉴别 质粒(plasmid)：,质粒：染色体外的遗传物质双股环状DNA携带某些遗传信息，控制某些遗传性状R质粒（resistance plasmid): 耐药性质粒F质粒（fertility plasmid)：致育性质粒Vi质粒 (virulence plasmid): 毒力质粒, 细菌的特殊结构,荚膜、芽胞、鞭毛、菌毛1.荚膜(capsule) 定义：某些细菌胞壁外围绕一层较厚的粘液性物 质，称为荚
5、膜。 形成条件：动物体内、营养丰富的培养基内 化学成分：多糖 分类：荚膜、微荚膜、粘液层-糖被 功能：鉴别细菌、分型依据（因有抗原性）致病性有关（抵抗吞噬、消化等）,2. 鞭毛（flagellum）定义：为附着在某些菌体上的细长而 呈波状弯曲的丝状物种类：单毛菌：如霍乱弧菌 双毛菌：如空肠弯曲菌丛毛菌：如铜绿假单胞菌周毛菌：如伤寒沙门菌化学成分：蛋白质性质：是运动器官功能 ：与致病性有关：粘附性,3.菌毛(fimbria or pili)定义：某些细菌表面遍布着比鞭毛 纤细、短而直的丝状物。只有在电镜下才能观察。 化学成分：主要是蛋白质 菌毛的种类与作用： 普通菌毛：数量多，粘附于受体上-致病
6、性 性菌毛：少，雄性菌（F+)，雌性菌（F-)-接合；噬菌体吸附受体,4.芽胞(endospore or spore)： 定义:细菌在一定环境条件下，胞浆脱水浓缩，在菌体内形成的多层膜状结构的圆形或卵圆形小体。 形成条件：缺乏营养物质，有害代谢产物堆积 性质：是休眠状态，不是繁殖方式 功能 对细菌起保护作用：多层膜包绕，通透性降低 芽孢死亡作为灭菌是否彻底的指标,一 细菌的染色方法二 显微镜的使用方法,三 、细菌染色法:,1.简单染色2.革兰氏染色3.鞭毛染色4.芽孢染色,细菌的染色方法,用于生物简单染色的染料主要有碱性、酸性和中性染料三大类简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态（简单
7、染色不能辨别细菌细胞的构造）,简单染色,主要步骤:,（1）涂片：直接在载玻片上制薄的涂面 （2）晾干：让涂片自然晾干 （3）固定：菌膜朝上，通过火焰2-3次固定 （4）染色：将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加复红染色1-2min。 （5）水洗：用水洗去涂片上的染色液 （6）干燥：将涂片放在空气中晾干 （7）镜检：在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。,杆菌,革兰氏染色革兰氏染色是采用二种染料对细菌细胞进行染色，初染采用的是结晶紫，复染采用的是番红。 G菌：细胞壁较厚，肽聚糖含量较高，基本不含类脂，肽聚糖分子交联度较紧密，故经乙醇处理后，肽聚糖网孔因脱水而明显收缩，
8、使壁的通透性降低保留着结晶紫碘复合物，所以复染液番红不能进入,细胞显紫色。 G-菌：细胞壁薄，肽聚糖含量低，类脂含量高，肽聚糖分子交松散，故经乙醇处理后，壁会出现较大的缝隙，细胞透性增大，结晶紫碘复合物易被洗脱出来，再经番红复染后使细胞显红色。,步骤：,结果:阳性菌紫色 阴性菌红色,由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。,革兰氏染色法（Gram Stain）,Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells.,Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells,Fig
9、ure,鞭毛染色,鞭毛是细菌的运动“器官”，一般细菌的鞭毛都非常纤细，其直径为001002m。鞭毛染色是借媒染剂和染色剂的沉淀作用，使染料堆积在鞭毛上，以加粗鞭毛的直径，同时使鞭毛着色。,(1)选菌（用新培养的菌种为宜）(2)制片 (3)染色 (4)镜检,主要步骤：,芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。,芽孢染色,主要步骤：,制片(按常规涂片，干燥，固定) 加热染色 脱色 复染 水洗 镜检,细菌芽胞染色技术,芽孢染色法染色结果：位于红色细胞内绿色的为芽胞,1. 观察工具（tools）,普通光学显微镜,暗视野显微镜,相
10、差显微镜,荧光显微镜,电子显微镜,观察细菌的方法,二、显微镜的基本结构及油镜的工作原理 1、普通光学显微镜的基本结构普通光学显微镜分两部分： 1）机械装置：镜座、镜筒、镜臂、物镜转换器、载物台、标本移动螺旋、粗调螺旋和细调螺旋等部件组成。 2）光学系统：目镜、物镜、聚光器、虹彩光圈、光源等组成,普通光学显微镜基本构造,放大倍数= 物镜放大倍数目镜放大倍数,低倍镜的操作 1. 置显微镜于固定的桌上。 2. 旋动转换器，将低倍镜移到镜筒下方与之对直。 3. 转动反光镜向着光源处，同时用眼对准目镜，仔细观察，视野亮度均匀。 4. 将标本放在载物台上，使观察的目的物置于圆孔的正中央。 5. 将粗调节器
11、向下旋转，眼睛注视物镜，以防物镜和载玻片相碰，当物镜的尖端距载玻片约0.5cm处时停止旋转。 6. 左眼向目镜观察，调节粗、细调节器直至目的物清晰为止。,油镜的操作 如果用高倍镜未能看清目的物，则可用油镜。应先用低倍镜和高倍镜检查标本片，将目的物移到视野正中。2.下降载物台在载玻片上滴一滴香柏油，将油镜移至正中央，使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。用细调节器微微向上调即可。,暗视野显微镜,暗视野显微镜是光学显微镜的一种，也叫超显微镜。暗视野显微镜的聚光镜中央有挡光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至 4200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。,使用方法,荧光显微镜,
